細(xì)胞與分子免疫學(xué)-2研究生免疫球蛋白-資料下載頁
2025-08-05 10:37本頁面
【正文】 入； （ 3） 體細(xì)胞突變： 體細(xì)胞突變也可以產(chǎn)生 Ig的多樣性。 重排過程 第三節(jié) 基因工程抗體 （ Geic Engineering Antibody） ?概述 單克隆抗體 (McAb)在臨床疾病診斷和治療中已發(fā)揮了很大的作用，但以下幾點限制了抗體的導(dǎo)向治療： （ 1）鼠源性 McAb在人體內(nèi)易誘導(dǎo)免疫應(yīng)答； （ 2）人的 McAb制備甚為困難。 一、嵌合抗體 （ Chimeric Antibody） 原理： 保留鼠 Ig可變區(qū)部分，將其恒定區(qū)用人 Ig取代。 方法： PCR克隆 鼠 可變區(qū)基因和 人 恒定區(qū)基因， 將兩 基因連接，并插入原核或真核表達(dá)載體中，并 導(dǎo)入大腸桿菌或轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞，就可表達(dá)出嵌 合抗體分子。 優(yōu)點： 親和力保持良好。 缺點： 含鼠 Ig可變區(qū)的異源性，仍 易誘導(dǎo)人免疫應(yīng)答 。 原理： 僅保留鼠 Ig可變區(qū) CDR部分，將 Ig其它區(qū)域都 用人 Ig取代。 方法： CDR序列的獲得通常采用 PCR技術(shù)。 優(yōu)點： 大大降低了鼠抗體的免疫原性。 缺點： 親和力不佳。 二、 CDR移植抗體 （ CDR Grafting Antibody） 又稱重構(gòu)抗體或改形抗體（ Reshaped Antibody） 原理： 將鼠 Ig Fv中的 VH和 VL兩肽鏈用不同的連接物 連接成一條多肽鏈，稱為單鏈抗體（ ScFv）； 將兩個相同或不同特異性的 ScFv連接在一個分 子上，就獲得了雙價 ScFv。 方法： DNA重組技術(shù)；共價或非共價交連。 優(yōu)點： 親和力保持良好，可針對 2個不同的抗原表位。 缺點： 容易解離或被組織酶解。 三、 單鏈抗體（ ScFv）和 雙價 ScFv 原理： 將鼠 Ig Fab基因片段與絲狀噬菌體 FUSE5載體連接，產(chǎn) 物轉(zhuǎn)化大腸桿菌，使 Fab與噬菌體外殼蛋白基因 III以融 合蛋白表達(dá)的形式表達(dá)在絲狀噬菌體表面，構(gòu)建成噬菌 體表面肽庫（ Phage peptide library display）；再用特 異性抗原對該肽庫進(jìn)行篩選，獲得具有高度抗原親和力 的 Fab，最后進(jìn)行體外重建。 方法： DNA重組技術(shù)； ELISA。 優(yōu)點： 親和力保持良好。 缺點： 容易解離或被組織酶解。 四、噬菌體肽庫技術(shù)構(gòu)建抗體片段 Thanks!
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