分子生物學(xué)常見試題-資料下載頁
2025-08-04 13:19本頁面
【正文】 幾個(gè)堿基而不影響PCR反應(yīng)的進(jìn)行.8,引物的539。端可以修飾,如附加限制酶位點(diǎn),引入突變位點(diǎn),用生物素,熒光物質(zhì),地高辛標(biāo)記,加入其它短序列包括起始密碼子,終止密碼子等.(十八),PCR的反應(yīng)條件答:1,PCR反應(yīng)的緩沖液:Tris HCl緩沖液KCl 促進(jìn)引物的退火,濃度太高時(shí)會抑制Taq DNA聚合酶活性.加入BSA或明膠有利于保護(hù)TaqDNA聚合酶活性.必要時(shí)加入適量二甲基亞砜(DMSO)或甲酰胺利于破壞模板二級結(jié)構(gòu),提高PCR反應(yīng)特異性.2,鎂離子濃度 mmol/L,Taq DNA聚合酶活性需要Mg 2+.Mg 2+濃度過低,會顯 2+ 2+濃度還會影響引物的退火,模板與PCR產(chǎn)物的解鏈溫度,從而影響擴(kuò)增片段的產(chǎn)率.3,底物濃度 工作濃度20200umol/L, dNTPs濃度過高可加快反應(yīng)速度,也增加堿基的錯配率和實(shí),4種dNTP必須以等摩爾濃度配制,以減少PCR反應(yīng)的錯配誤差并提高使用效率.4,Taq DNA聚合酶 7580℃時(shí)具有最高的聚合酶活性,150個(gè)核苷酸/秒。具有良好的熱穩(wěn)定性,95℃仍有活性,5,引物 ,生成引物二聚體,使目的DNA,引物Tm值在5580 ℃ 范圍較為理想.6,反應(yīng)溫度和循環(huán)次數(shù)(十九),影響大腸桿菌系統(tǒng)外源基因表達(dá)的因素答:1,啟動子的強(qiáng)弱。2,基因的劑量。3,影響RNA轉(zhuǎn)錄和翻譯效率的因素:SD序列,mRNA。4,外源基因密碼子的選擇。5,表達(dá)產(chǎn)物的大小。6,表達(dá)產(chǎn)物的穩(wěn)定性.(二十),大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)外源基因必須具備的條件答:1,要求外源基因的編碼區(qū)不能含有內(nèi)含子。2,表達(dá)的外源片段要位于大腸桿菌啟動子的下游,并形成正確的閱讀框架。3,轉(zhuǎn)錄出的mRNA必須有與大腸桿菌16S rRNA3,末端相匹配的SD序列,才能被有效的翻譯成蛋白質(zhì).4,蛋白產(chǎn)物必須穩(wěn)定,不易被細(xì)胞內(nèi)蛋白酶快速降解,且對宿主無害.(二十一),真核細(xì)胞表達(dá)外源基因的條件答:1,中表達(dá)外源基因的真核轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件。2,注意選擇轉(zhuǎn)染的受體細(xì)胞,不同類型的細(xì)胞具有不同的特性。3,注意選擇適當(dāng)?shù)倪x擇標(biāo)記.(二十二),轉(zhuǎn)基因動物的概念,原理及應(yīng)用答:1,概念:是指用人工方法將外源基因?qū)牖蛘系交蚪M內(nèi),特點(diǎn)是分子及細(xì)胞水平操作,組織及動物整體水平表達(dá).2,基本原理:將目的基因或基因組片段用顯微注射等方法注入實(shí)驗(yàn)動物的受精卵或著床前的胚胎細(xì)胞中,使目的基因整合到基因組中,然后將此受精卵或著床前的胚胎細(xì)胞再植入受體動物的輸卵管或子宮中,使其發(fā)育成攜帶有外源基因的轉(zhuǎn)基因動物,人們可以通過分析轉(zhuǎn)基因和動物表型的關(guān)系,揭示外源基因的功能。也可以通過轉(zhuǎn)入外源基因培育優(yōu)良的動物品種.3,應(yīng)用:建立用于研究外源基因表達(dá)調(diào)控體系。建立醫(yī)學(xué)中常用的疾病模型。培育動物新品種。藥理學(xué)和藥用蛋白的生產(chǎn)研究.(二十三),基因敲除的基本程序答:通過DNA同源重組,使得胚胎干細(xì)胞特定的內(nèi)源基因被破壞而造成功能喪失,然后通過胚胎干細(xì)胞介導(dǎo)得到該基因喪失的小鼠模型的過程稱為基因敲除.1, 打靶載體的構(gòu)建:同源序列要足夠長,要含有篩選用的標(biāo)志基因.2, 胚胎干細(xì)胞的體外培養(yǎng)3, 打靶載體導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞4, 同源重組胚胎干細(xì)胞的篩選5, 基因敲除胚胎干細(xì)胞注射入胚泡6, 胚泡植入假孕小鼠的子宮中7, 雜交育種獲得純合的基因敲除動物(二十四),DNA芯片的原理答:DNA芯片技術(shù)就是一種大規(guī)模的集成的固相核酸分子雜交,以大量已知堿基序列的寡核苷酸片段為探針,檢測樣品中哪些核酸序列與其互補(bǔ),然后通過定性定量分析得出待測樣品的基因序列及,樣品的準(zhǔn)備,分子雜交和檢測分子.(二十五),誘變劑的作用機(jī)制答:1,堿基的類似物誘發(fā)突變2,改變DNA的化學(xué)結(jié)構(gòu)3,結(jié)合到DNA分子上誘發(fā)移碼突變4,紫外線及其他射線引起的DNA分子的變化(二十六),突變類型及其遺傳效應(yīng)答:1,突變類型:① 點(diǎn)突變:.② 缺失:一個(gè)堿基或一段核苷酸鏈從DNA大分子上消失.③ 插入:一個(gè)原來沒有的堿基或一段原來沒有的核苷酸鏈插入到DNA大分子中間.④ 倒位:DNA鏈內(nèi)重組,使其中一段方向倒置.2,突變的遺傳效應(yīng):①遺傳密碼的改變:錯義突變,無義突變,同義突變,移碼突變② 對mRNA剪接的影響:一是使原來的剪接位點(diǎn)消失。二是產(chǎn)生新的剪接位點(diǎn).③ 蛋白質(zhì)肽鏈中的片段缺失:(二十七),基因治療的策略答:1,基因置換或稱基因矯正:特定的目的基因?qū)胩囟ǖ募?xì)胞,通過定位重組,讓導(dǎo)入的正?；蛑脫Q基因組內(nèi)原有的缺陷基因,不涉及基因組的任何改變.2,基因添加或稱基因增補(bǔ):通過導(dǎo)入外源基因使靶細(xì)胞表達(dá)其本身不表達(dá)的基因.3,基因干預(yù):采用特定的方式抑制某個(gè)基因的表達(dá),或者通過破壞某個(gè)基因而使之不能表達(dá),以達(dá)到治療疾病的目的.4, 基因標(biāo)記:基因標(biāo)記實(shí)驗(yàn)是基因治療的前奏,并不在于直接治療疾病而是期望能夠提供有關(guān)正常細(xì)胞生物學(xué)和疾病病理方面的信息.(二十八),基因診斷常用的生物學(xué)技術(shù).(二十九),簡述重組DNA技術(shù)的過
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1