【正文】 ：玻璃柱 150mmX3mm， 柱溫 140℃ ，進樣口、檢測器溫度 200℃ ． 載氣：氮氣，流速： 70mL/min （ 4）測定： 同時取 、 BHT混合標準使用液注入氣相色譜儀，分別記錄標準液和樣液的峰高或峰面積進行比較定量。 ? 計算公式： 式中： X樣品脂肪中 BHA或 BHT的含量， g/Kg h1樣品的峰高或峰面積 h2標準的峰高或峰面積 ρ標準溶液的濃度， mg/mL V樣品制備液的體積， mL m樣品中脂肪的質量， g )/(21 KggmhVhX???? ?? 說明及注意事項： （ 1）抗氧化劑本身會被氧化，樣品隨著存放時間的延長含量會下降，所以樣品進入實驗室應盡快分析，避免結果偏低。 （ 2） BHT穩(wěn)定性較差，易受陽光、熱的影響，操作時應盡量避光。 （ 3）抗氧化劑在層析柱中停留的時間不宜太長，但淋洗速度也不能太快，控制在每分鐘 70滴左右為宜。 、 2， 6一二叔丁基對甲酚 (BHT)的測定 ? 原理 ：利用樣品通過水蒸氣蒸餾，使 BHT分離，用甲醇吸收后，遇鄰聯二茴香胺與亞硝酸鈉溶液生成橙紅色化合物，再用三氯甲烷提取，于 520nm處測定其吸光度并與標準比較定量。 ? 操作步驟 (1)樣品處理：甘油浴 165℃ 蒸餾，甲醇接收。 (2)標準曲線的繪制 (3)樣品測定 沒食子酸丙酯 (PG)的測定方法 ?原理：樣品經石油醚溶解，用乙酸銨水溶液提取后，沒食子酸丙酯 (PG)與亞鐵酒石酸鹽起顏色反應，在波長 540nm處測定吸光度，與標準比較定量。 ?操作步驟 (1)樣品處理 (2)標準曲線的繪制 (3)樣品測定 （ 4)結果計算 、 合成著色劑的測定 ： ? 定義： 食用色素是以食品著色、改善食品色澤為目的的食品添加劑。 ? 分類： 食用色素就來源可分成兩大類：天然色素和合成色素 天然色素是從一些動物、植物組織中提取出來， 安全性高；但穩(wěn)定性差（對光、熱、酸、堿等條件敏感），著色能力差，難以調出任意的色澤，且資源短缺，不能滿足食品工業(yè)的需求。 合成色素是用有機物合成的，資源十分豐富（來自于煤焦油及其副產品），穩(wěn)定性好、色澤鮮艷、著色力強、能調出任意顏色，因而得到廣泛的應用。 ? 測定意義： 食品中合成著色劑的種類很多，國際上允許使用的有 30余種，我國允許使用的主要有莧菜紅、胭脂紅、赤蘚紅、新紅、莧菜紅、誘惑紅、檸檬黃、日落黃、亮藍、靛藍等。 由于許多合成色素本身或其代謝產物具有一定的毒性、致瀉性、致癌性，因此必須對合成色素的使用范圍及用量加以限制，確保其安全性。 ? 測定方法： 目前，在食品行業(yè)中使用單一色素已經比較少，大多數使用復合色素方可達到比較滿意色澤，因而給分析工作者帶來一定困難。 目前合成色素的測定方法主要采用高效液相色譜法 ? 在食品中添加色素 ， 經常是由兩種以上的色素配合而成的拼色 ， 對合成色素在測定時采用的幾大步驟如下： 樣品前處理 → 提純 → 分離 → 鑒別（何種色素） → 定量（此色素含量是否超標） ? 原理 食品中的合成著色劑經 聚酰胺吸附法或液 液分配法提取后，制成水溶液，注入高效液相色譜儀，經反相色譜分離，根據保留時間定性和與峰面積比較進行定量。 ? 儀器與試劑 高效液相色譜儀，帶紫外檢測器 ? 操作步驟： (1)樣品處理： ①飲料類： 吸取樣液 50mL于 100mL燒杯中（含 CO2的加熱排除 CO2） ② 配制酒： 吸取樣液 100mL于 200mL燒杯中，加熱排出乙醇，加熱前放幾片碎瓷片。 ③淀粉、軟糖、硬糖、蜜餞類： 稱取粉碎樣品 5～ 10g加水 30mL， 加熱溶解，用 20％檸檬酸溶液調 PH至 4左右。 ④奶糖： 稱取樣品 10g粉碎，加 30mL乙醇一氨溶液溶解，臵水 浴上加熱濃縮到 20mL左右，立即用 1:10硫酸調至微酸性（用 PH 試紙測定），再繼續(xù)滴加 1mL1:10硫酸，再加 1mL10％ 鎢酸鈉溶液使 蛋白質沉淀，過濾、用少量水洗滌，收集濾液備用。 ⑤蛋糕類： 稱取樣品 10g， 粉碎，加放少量海砂或無水硫酸鈉，混勻，用電吹風吹干，加入30mL石油醚攪拌靜臵片刻，傾出石油醚，如此重復 2～ 3次以 除去油脂 ，再吹干研細，然后轉入漏斗中，用乙醇一氨溶液提取色素直至色素提取完全，以下按（ 4）自 “ 臵水浴上加熱濃縮至 20mL左右 ” 起依法操作。 （ 2）色素提?。? ① 聚酰胺吸附法： 樣品溶液加 20%檸檬酸調 pH為 4~6，加熱至 60 ℃ ， 將 1g聚酰胺粉加少許水調成糊狀，倒入樣品溶液中，攪拌片刻，以 G3垂融漏斗抽濾，用 60 ℃ PH4的水洗滌 3～ 5次，然后用甲醇 —甲酸混合液洗滌3～ 5次（含赤蘚紅的樣品不能洗），再用水洗至中性，用乙醇 —氨水 —水混合液解吸 3～ 5次，每次 5mL， 收集解吸液，加乙酸中和，蒸發(fā)至近干，加水溶解，定容至 5mL。 經濾膜（ ） 過濾，取 10 181。 L進高效液相色譜儀。 ②液一液分配法（適用于含赤蘚紅的樣品）： 將制備好的樣品溶液放入分液漏斗中，加 2mL鹽酸，三正辛胺十正丁醇溶液（ 5十 95） 10～ 20mL， 振搖，提取，分取有機相，重復此操作，合并有機相，用飽和硫酸鈉溶液洗 2次，每次 10mL分取有機相，放蒸發(fā)皿中，水浴加熱濃縮至 10mL， 轉移到分液漏斗中，加 60mL正己烷，混勻， 加氨水（ 2＋ 98）提取 2～ 3次，每次 5ml， 合并氨水層（含水溶性 酸性色素），用正己烷洗 2次，氨水層加乙酸調成中性，水浴加蒸發(fā)至近干，加水溶解，定容至 5mL。 經濾膜（ ） 過濾，取 10 181。 L進高效液相色譜儀。 （ 3）高效液相色譜分析參考條件 ： 柱： 10181。m， C18不銹鋼柱。 流動相：甲醇、 （ pH4） 梯度洗脫：開始：甲醇 ?乙酸銨溶液為 20 ? 80； 5min后：甲醇 ?乙酸銨溶液為 35 ? 65 10min后：甲醇 ? 乙酸銨溶液為 98 ? 2， 繼 續(xù) 6min 流速： 1mL／ min。 檢測器；紫外檢測器，波長 254nm。 根據保留時間定性，外標峰面積法定量。 ? 計算： ? A樣 ——樣品的峰面積 ? A標 ——標樣的峰面積 ? C標 ——標樣的濃度 ? V樣 ——樣品的定容體積 ? m樣 ——樣品的質量 )/( KgmgmAVCA樣標樣標樣色素含量????? 說明及注意事項 （ 1）樣品在加入聚酰胺粉吸附色素之前，要用 20％檸檬酸調至 PH至 4左右，因為聚酰胺粉在偏酸性（ PH4～ 6）條件下對色素吸附力較強，吸附較完全。 （ 2）如樣品色素濃度太高，要用水適當稀釋，因為在濃溶液中，色素鈉鹽的鈉離子不容易解離，不利于聚酰胺粉吸附。 （ 3）樣液中的色素被聚酰胺粉吸附后，當用熱水洗滌聚酰胺粉以便 除去可溶性雜質時，要求水偏酸性，防止吸附的色素被洗脫下來，使定量結果偏低。 （ 4）在提純的樣品溶液進行蒸發(fā)濃縮時，要控制水浴溫度在 70～ 80℃ ， 使其緩慢蒸發(fā)，勿濺出皿外，另外，要經常搖動蒸發(fā)皿，防止色素干結在蒸發(fā)皿的壁上。 （ 5）用 HPLC測定時，測定一個樣品后，將流動相中的甲醇濃度恢復至 20%，使之穩(wěn)定 20min后，再開始測定第二個樣品。