第四節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)-資料下載頁
2025-08-01 13:36本頁面
【正文】 同一批號的血清，并同時(shí)做負(fù)對照（不加轉(zhuǎn)染試劑及外源 DNA）以測試細(xì)胞生長是否正常。有些轉(zhuǎn)染技術(shù)如脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染在有血清存在情況下效率很低，因此在轉(zhuǎn)染前要除血清。 載體構(gòu)建 轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建也影響轉(zhuǎn)染結(jié)果。病毒載體對特定宿主細(xì)胞感染效率較高，但不同病毒載體有其特定的宿主，有的還要求特定的細(xì)胞周期，此外還需考慮一些安全問題（如基因污染）。除載體構(gòu)建外，載體的形態(tài)及大小對轉(zhuǎn)染效率也有不同的影響，如果基因產(chǎn)物對細(xì)胞有毒性作用，轉(zhuǎn)染也很難進(jìn)行，因此選擇組成及合適的啟動(dòng)子也很重要，同時(shí)做空載體及其它基因相同載體構(gòu)建的正對照可排除毒性影響的干擾。 DNA質(zhì)量 DNA質(zhì)量對轉(zhuǎn)染效率影響非常大。如果 DNA不純，帶少量的鹽離子、蛋白、代謝物污染都會顯著影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的有效形成及轉(zhuǎn)染的進(jìn)行。 轉(zhuǎn)染技術(shù) 轉(zhuǎn)染技術(shù)的選擇對轉(zhuǎn)染結(jié)果影響也很大，許多轉(zhuǎn)染方法需要優(yōu)化DNA與轉(zhuǎn)染試劑比例，細(xì)胞數(shù)量，培養(yǎng)及檢測時(shí)間等。 五、基因敲除與敲進(jìn) 基因敲除 （ knock out of gene）：利用基因打靶技術(shù)，用無功能的外源基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞與基因組中同源序列進(jìn)行同源重組，把具有功能的同源序列置換出來，造成功能基因的缺失或失活，這一技術(shù)叫基因敲除。 基因敲進(jìn) （ knock in of gene）：利用基因同源重組，將外源有功能的基因轉(zhuǎn)入基因組中不存在或已失活的細(xì)胞中與其基因組中同源序列進(jìn)行同源重組，在細(xì)胞內(nèi)獲得表達(dá)，這一技術(shù)稱為基因敲進(jìn)。 意義： ① 研究基因功能 ② 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的制備 ③ 用于藥物篩選的動(dòng)物模型 ④ 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可作為 “ 生物反應(yīng)器 ” 生產(chǎn)藥物
公司管理相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1