【正文】 DNA指紋技術(shù)的理論基礎(chǔ) 發(fā)現(xiàn)： 1985年 Jeffreys報告 人肌紅蛋白基因第一內(nèi)含子 重復(fù)單位 33個堿基，重復(fù) 4次 核心序列 16個堿基 探針： 篩選出 8個陽性克隆 核心序列 GGAGGTGGGCAGGAXG 確定探針 : AGGGCTGGAGG AGGTGGGCAGGTGG 分析： DNA酶切片段（ HinfI） 電泳分析 轉(zhuǎn)移印跡 探針雜交 RFLP圖譜（ 20條左右的片段） **偶合幾率 10111012 ?小衛(wèi)星變異重復(fù)多態(tài)性 部分重復(fù)單位內(nèi)部的出現(xiàn)堿基替換 重復(fù)單位 AGGTCGG 變異單位 AGGTTGG 等位基因 A 等位基因 B 酶切分析： PCR擴(kuò)增 （ short tandem repeats, STR) 特征： 重復(fù)單位 2bp6bp 不宜用 RFLP方法分析 實質(zhì)也是一種 VNTR PCR擴(kuò)增沒有優(yōu)勢擴(kuò)增 重復(fù)次數(shù) 5次 60次，總序列長度 400bp 微衛(wèi)星 DNA 適用于降解 DNA的鑒定 最常見是二核苷酸，法醫(yī)常用的是四核苷酸重復(fù) 必須用高分辨率的電泳方法分離 分布廣泛，人類基因組的 5%，估計 2050萬個 檢出 8000多個， 遺傳標(biāo)記數(shù)目多 絕大多數(shù)分布非編碼區(qū)，極少三核苷酸位于編碼區(qū) 類型 ：根據(jù)重復(fù)單位的堿基組成分為以下三類： 重復(fù)單位長度 重復(fù)單位組成 簡單重復(fù)序列 基本一致 基本一致 復(fù)合重復(fù)序列 基本一致 組成不同 復(fù)雜重復(fù)序列 長度不同 組成不同 篩選 基本條件： 多態(tài)性程度高 、擴(kuò)增穩(wěn)定性好 300bp 4核苷酸 ，無非重復(fù)單位堿基 812個 ，個人識別能力 、突變率低 命名 基 因 座 ?結(jié)構(gòu)基因 內(nèi)含子 中 STR基因座 GenBank注冊基因名稱命名 例： TH01 酪氨酸羥化酶基因第 1內(nèi)含子 ?非編碼 區(qū) /定位不清的 STR基因座 Genome Database原始序號 例： D3S1359 3號染色體 。單拷貝 。1359號 等位基因 不同實驗室檢驗結(jié)果的可比性和重復(fù)性 ?按照重復(fù)單位次數(shù)命名 5’GGTCATCATCATGG3’ “TCA TCA TCA” “CAT CAT CAT” ** 從離 5’端最近的核苷酸開始定義 ?含有不完全重復(fù)的等位基因 （完整重復(fù)等位基因數(shù)） （不完全堿基數(shù)） 例 :TH01基因座 [ATG]4ATG[AATG]5 （ 1） 同源重組 概念： 發(fā)生在聯(lián)會復(fù)合體內(nèi)的，同源染色體的兩條非姊妹染 色單體之間的遺傳物質(zhì)交換 條件 ，重組發(fā)生在同樣基因座 機(jī)制 ： 不等交換 交換雙方地位平等，但數(shù)量不一定相等 證據(jù)： 核心序列 G/C含量與堿基序列和大腸桿菌 χ 序列類似 χ 序列原核生物基因組 DNA重組的信號 以核心序列為探針與減數(shù)分裂中期的人染色體雜交 信號集中在染色體著絲點及附近 意義： 法醫(yī)學(xué) 形成 DNA片段長度多態(tài)性 遺傳學(xué) 減輕編碼區(qū)選擇壓力，維持物種穩(wěn)定 （ 2）基因的結(jié)構(gòu)重排 概念： 通過基因的轉(zhuǎn)座， DNA的斷裂錯接使正?；蝽樞虬l(fā) 生改變 機(jī)制 ：結(jié)構(gòu)重排是一種 DNA雙鏈斷裂的修復(fù)過程。 DNA斷裂（ 5’端的重復(fù)序列內(nèi)） 形成兩個游離末 修復(fù)過程中：末端的因擺動或錯位 —基因轉(zhuǎn)移移動 部位 ： 基因內(nèi)重排 單鏈末端的堿基率先復(fù)復(fù)性 然后合成空缺的堿基，形成插入重復(fù)單位 TCC TCC TCC TCC TCC TCC TCC TCC AGG AGG AGG AGG AGG AGG AGG AGG 基因間重排 游離單鏈末端侵入對應(yīng)染色單體基因 形成同源染色單體基因移動 （ 1）部分重復(fù)單位的轉(zhuǎn)移 （ 2）基因共轉(zhuǎn)移（部分重復(fù)單位 +側(cè)翼 SNP） （ 3）基因間重組交換 （ 3）復(fù)制滑動 類型： 正向鏈 3’5’的滑動錯配 在正向鏈中 插入 1個重復(fù)單位 反向鏈 3’5’的滑動錯配 正向復(fù)制鏈中 缺失 1個重復(fù)單位 特點 ： ，更傾向較短重復(fù)序列 是 STR多態(tài)性那個的主要原因 ，衛(wèi)星序列有自我加速復(fù)制、延長 該序列可以減輕編碼區(qū)承受的選擇壓力 DNA半保留復(fù)制的關(guān)系 只要出現(xiàn)不對稱環(huán)，多為滑動錯配 二、 DNA序列多態(tài)性 概念： 是指一個基因座上，因不同個體 DNA序列有一個或多 個堿基的差異而構(gòu)成的多態(tài)性。 即：同一基因座上所有的等位基因 DNA長度相同 但它們之間的序列存在差異。 原因： 點突變 物種進(jìn)化 —對自然選擇的回應(yīng) 法 醫(yī) 學(xué) —提供大量的遺傳標(biāo)記 單核苷酸多態(tài)性（ single nucleotide polymorphism,SNP) 在人類基因范圍內(nèi)，如果任何單堿基突變使特定核苷酸位置上 出現(xiàn)兩種堿基，其中最少的一種在群體中的頻率不少于 1%。 特點： 二態(tài)基因 利于信息的自動化分析 含量豐富 在基因組中至少有 300萬個 SNP 期望： 高通量分型檢測的技術(shù)難題 遺傳標(biāo)記 分析方法 VNTR DNA指紋技術(shù) STR PCR擴(kuò)增技術(shù) SNP DNA芯片技術(shù) 概念： 半保留復(fù)制 DNA變性 DNA降解 DNA復(fù)性 分子雜交 Tm值 基因表達(dá) 斷裂基因 重疊基因 重復(fù)序列 串聯(lián)重復(fù)序列 多基因家族 端粒 異質(zhì)性 DNA多態(tài)性 DNA長度多態(tài)性 DNA序列多態(tài)性 核心序列 小衛(wèi)星變異單位多態(tài)性 同源重組 VNTR STR 小衛(wèi)星 DNA和微衛(wèi)星 DNA的主要區(qū)別 線粒體 DNA復(fù)制的特點 線粒體 DNA的主要特征 。 DNA一級結(jié)構(gòu)的生物學(xué)意義主要有 和 。 堿基配對原則的生物學(xué)意義 ， 和 。 影響復(fù)性的主要因素是 和 。 DNA復(fù)制的過程包括 、 和 。 DNA聚合酶具有 、 和 功能。 聚合酶實現(xiàn) DNA復(fù)制的條件是 、 、 和 。 保證復(fù)制忠實性有 和 兩種機(jī)制 基因表達(dá)包括 和 兩個過程。 主要的 DNA修復(fù)方式是 和 。 基因分為 、 、 和 三。 真核生物基因的特點是 。 重復(fù)序列分 、 、和 三類。 線粒體 DNA突變率高的原因有 、 、 和 。 線粒體 DNA 的特點 、 、 、 和 。 基因突變的后果 、 、 、 和 。 STR的三種結(jié)構(gòu)類型有 、 和 。 STR篩選條件 、 、 、 、 和 長度多態(tài)性形成的機(jī)制