液相色譜聯(lián)用穩(wěn)定同位素比值質(zhì)譜法行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)編制說(shuō)明-資料下載頁(yè)
2025-07-15 01:08本頁(yè)面
【正文】 葡萄糖、蔗糖、果糖和甘油購(gòu)自試劑公司。 乙醇（色譜純）購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)。 樣品處理 使用超純水將樣品稀釋至乙醇濃度約，用μ尼龍濾膜過(guò)濾，轉(zhuǎn)移至樣品瓶中供測(cè)定乙醇δ值。 實(shí)驗(yàn)條件條件：色譜柱為 柱（，μ，公司）；流動(dòng)相為硫酸溶液，流速為μ；柱溫為℃，進(jìn)樣體積為μ。磷酸溶液和過(guò)兒硫酸鈉溶液作為反應(yīng)助劑，流速為以將色譜分離的有機(jī)物轉(zhuǎn)化成。 結(jié)果與討論方法中推薦使用 色譜柱用于葡萄酒甘油分析，國(guó)內(nèi)李學(xué)民等人對(duì)比了 （）和 （）分離甘油和乙醇的效果，其中 （）具有較好的分離效果。本項(xiàng)目采用 開(kāi)展了后續(xù)研究。 甘油保留時(shí)間 乙醇和甘油是葡萄酒中最重要的兩大有機(jī)組分，有報(bào)道顯示色譜柱和流動(dòng)相的選擇會(huì)影響二者的分離效果。為驗(yàn)證 對(duì)乙醇和甘油的分離能力，配制乙醇和甘油的溶液并進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖。圖 甘油和乙醇δ的離子流圖圖顯示了甘油與乙醇的離子流圖，可以看出保留時(shí)間分別為和，二者的分離度良好，因此分析過(guò)程中可排除乙醇對(duì)甘油的干擾。然而葡萄酒中的有機(jī)物并非只有甘油和乙醇，還有諸多的有機(jī)酸以及可能存在少量的糖，我們?cè)诜治銎咸丫茦悠窌r(shí)也確實(shí)發(fā)現(xiàn)甘油峰前面有一雜峰（見(jiàn)圖）。經(jīng)過(guò)單標(biāo)驗(yàn)證，我們確定該位置的有機(jī)物為乳酸，其與甘油保留時(shí)間比較接近，而其他有機(jī)酸和糖類(lèi)的保留時(shí)間與甘油相差甚遠(yuǎn)，而乳酸即便與甘油接近，也存在的間隔，不會(huì)干擾甘油的測(cè)定，并且葡萄酒樣品中乳酸含量只占甘油含量的左右，因此其對(duì)甘油的影響可以忽略。圖 葡萄酒樣品中甘油δ的離子流圖 流動(dòng)相選擇基于的分析特性，其流動(dòng)相不能含有任何有機(jī)組分，而流動(dòng)相的理化特性對(duì)分離效果影響甚大。 不能使用含無(wú)機(jī)鹽的流動(dòng)相，而文獻(xiàn)中報(bào)道較多的則是以硫酸溶液作為流動(dòng)相，因此本研究針對(duì)純水和不同濃度的硫酸溶液展開(kāi)分析。表 不同濃度硫酸溶液作為流動(dòng)相時(shí)的甘油保留時(shí)間硫酸濃度（）起始時(shí)間（）δ值（‰）由于液相流動(dòng)相管道對(duì)酸堿的耐受極限是，因此研究中我們僅對(duì)以下的硫酸溶液進(jìn)行了驗(yàn)證。正如表所示，流動(dòng)相中硫酸濃度只對(duì)甘油的保留時(shí)間有輕微影響，隨著濃度升高，甘油的保留時(shí)間稍微后延，對(duì)δ測(cè)定結(jié)果也無(wú)影響。然而，研究中發(fā)現(xiàn)，盡管流動(dòng)相的酸濃度不影響甘油的峰形，但是對(duì)該色譜柱上甘油相鄰物質(zhì)乳酸的影響極大，純水流動(dòng)相時(shí)會(huì)造成乳酸出現(xiàn)前沿峰而有可能會(huì)影響甘油的分離，而濃度時(shí)乳酸色譜峰變得比較對(duì)稱(chēng)，時(shí)呈正態(tài)分布。因此，確定流動(dòng)相為的硫酸溶液。 色譜柱溫度選擇有文獻(xiàn)指出色譜柱溫度會(huì)影響待測(cè)組分的氧化效率，然而，我們分別在℃、℃和℃條件下分離甘油，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表。表 不同溫度下甘油各指標(biāo)的δ測(cè)定結(jié)果類(lèi)別編號(hào)柱溫℃柱溫℃柱溫℃保留時(shí)間（）峰面積（）δ測(cè)定值（‰）由上表可知，應(yīng)用本色譜柱時(shí)，不同溫度條件下保留時(shí)間、峰面積及δ值并未出現(xiàn)明顯變化，這說(shuō)明上述分析指標(biāo)不受色譜柱溫度的影響，尤其是峰面積接近，說(shuō)明溫度未影響甘油的氧化效率。雖然各甘油標(biāo)樣δ測(cè)定值與的給定值存在一定差異，但相關(guān)分析表明二者的線(xiàn)性擬合度均大于，這說(shuō)明測(cè)定過(guò)程中出現(xiàn)的系統(tǒng)偏差是固定的，可以通過(guò)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的方式進(jìn)行數(shù)據(jù)校正。 方法精密度分別選取甘油標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，以及紅白葡萄酒樣品各一個(gè)，分別重復(fù)次測(cè)定，δ結(jié)果見(jiàn)表。表 葡萄酒樣品中甘油δ精密度試驗(yàn)結(jié)果（‰）樣品白葡萄酒紅葡萄酒三個(gè)不同類(lèi)型樣品的甘油甘油δ結(jié)果極差均小于‰，而標(biāo)準(zhǔn)偏差均優(yōu)于‰。 方法準(zhǔn)確性由于國(guó)際上缺乏葡萄酒甘油δ分析的參考物質(zhì)，因此本研究采用配制模擬樣品的方式對(duì)方法的準(zhǔn)確性進(jìn)行評(píng)估：測(cè)得表中紅葡萄酒的甘油含量為；配制的乙醇水溶液，并以此為溶質(zhì)稀釋甘油工作標(biāo)準(zhǔn)至（甘油乙醇水溶液），按照體積比、、和的比例混合紅葡萄酒和甘油乙醇水溶液，并分別測(cè)定甘油δ值，結(jié)果見(jiàn)表。表 模擬樣品中甘油δ測(cè)定結(jié)果（‰）甘油乙醇水溶液：紅葡萄酒預(yù)測(cè)值實(shí)測(cè)值 通過(guò)對(duì)表數(shù)據(jù)分析，我們發(fā)現(xiàn)兩組數(shù)據(jù)的線(xiàn)性擬合的相關(guān)系數(shù)為，配對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果表明兩組數(shù)據(jù)無(wú)顯著性差異（），這說(shuō)明該方法能夠準(zhǔn)確測(cè)定葡萄酒樣品中甘油的δ值。 協(xié)同試驗(yàn)為驗(yàn)證方法的再現(xiàn)性，按照 的規(guī)定隨機(jī)選定位操作人員，分別處理純甘油、表中紅白葡萄酒樣品并測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表。表 協(xié)同試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果實(shí)驗(yàn)室純甘油白葡萄酒紅葡萄酒 平均值重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差 重復(fù)性限 再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)差 再現(xiàn)性限 方法 規(guī)定測(cè)定甘油δ的重復(fù)性限和再現(xiàn)性分別為‰和‰，由此可知，本次協(xié)同試驗(yàn)的結(jié)果符合要
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