液相色譜聯(lián)用穩(wěn)定同位素比值質(zhì)譜法行業(yè)標準編制說明-資料下載頁
2025-07-15 01:08本頁面
【正文】 葡萄糖、蔗糖、果糖和甘油購自試劑公司。 乙醇（色譜純）購自國藥集團。 樣品處理 使用超純水將樣品稀釋至乙醇濃度約，用μ尼龍濾膜過濾，轉(zhuǎn)移至樣品瓶中供測定乙醇δ值。 實驗條件條件：色譜柱為 柱（，μ，公司）；流動相為硫酸溶液，流速為μ；柱溫為℃，進樣體積為μ。磷酸溶液和過兒硫酸鈉溶液作為反應助劑，流速為以將色譜分離的有機物轉(zhuǎn)化成。 結(jié)果與討論方法中推薦使用 色譜柱用于葡萄酒甘油分析，國內(nèi)李學民等人對比了 （）和 （）分離甘油和乙醇的效果，其中 （）具有較好的分離效果。本項目采用 開展了后續(xù)研究。 甘油保留時間 乙醇和甘油是葡萄酒中最重要的兩大有機組分，有報道顯示色譜柱和流動相的選擇會影響二者的分離效果。為驗證 對乙醇和甘油的分離能力，配制乙醇和甘油的溶液并進樣測定，結(jié)果見圖。圖 甘油和乙醇δ的離子流圖圖顯示了甘油與乙醇的離子流圖，可以看出保留時間分別為和，二者的分離度良好，因此分析過程中可排除乙醇對甘油的干擾。然而葡萄酒中的有機物并非只有甘油和乙醇，還有諸多的有機酸以及可能存在少量的糖，我們在分析葡萄酒樣品時也確實發(fā)現(xiàn)甘油峰前面有一雜峰（見圖）。經(jīng)過單標驗證，我們確定該位置的有機物為乳酸，其與甘油保留時間比較接近，而其他有機酸和糖類的保留時間與甘油相差甚遠，而乳酸即便與甘油接近，也存在的間隔，不會干擾甘油的測定，并且葡萄酒樣品中乳酸含量只占甘油含量的左右，因此其對甘油的影響可以忽略。圖 葡萄酒樣品中甘油δ的離子流圖 流動相選擇基于的分析特性，其流動相不能含有任何有機組分，而流動相的理化特性對分離效果影響甚大。 不能使用含無機鹽的流動相，而文獻中報道較多的則是以硫酸溶液作為流動相，因此本研究針對純水和不同濃度的硫酸溶液展開分析。表 不同濃度硫酸溶液作為流動相時的甘油保留時間硫酸濃度（）起始時間（）δ值（‰）由于液相流動相管道對酸堿的耐受極限是，因此研究中我們僅對以下的硫酸溶液進行了驗證。正如表所示，流動相中硫酸濃度只對甘油的保留時間有輕微影響，隨著濃度升高，甘油的保留時間稍微后延，對δ測定結(jié)果也無影響。然而，研究中發(fā)現(xiàn)，盡管流動相的酸濃度不影響甘油的峰形，但是對該色譜柱上甘油相鄰物質(zhì)乳酸的影響極大，純水流動相時會造成乳酸出現(xiàn)前沿峰而有可能會影響甘油的分離，而濃度時乳酸色譜峰變得比較對稱，時呈正態(tài)分布。因此，確定流動相為的硫酸溶液。 色譜柱溫度選擇有文獻指出色譜柱溫度會影響待測組分的氧化效率，然而，我們分別在℃、℃和℃條件下分離甘油，測定結(jié)果見表。表 不同溫度下甘油各指標的δ測定結(jié)果類別編號柱溫℃柱溫℃柱溫℃保留時間（）峰面積（）δ測定值（‰）由上表可知，應用本色譜柱時，不同溫度條件下保留時間、峰面積及δ值并未出現(xiàn)明顯變化，這說明上述分析指標不受色譜柱溫度的影響，尤其是峰面積接近，說明溫度未影響甘油的氧化效率。雖然各甘油標樣δ測定值與的給定值存在一定差異，但相關分析表明二者的線性擬合度均大于，這說明測定過程中出現(xiàn)的系統(tǒng)偏差是固定的，可以通過建立標準曲線的方式進行數(shù)據(jù)校正。 方法精密度分別選取甘油標準物質(zhì)，以及紅白葡萄酒樣品各一個，分別重復次測定，δ結(jié)果見表。表 葡萄酒樣品中甘油δ精密度試驗結(jié)果（‰）樣品白葡萄酒紅葡萄酒三個不同類型樣品的甘油甘油δ結(jié)果極差均小于‰，而標準偏差均優(yōu)于‰。 方法準確性由于國際上缺乏葡萄酒甘油δ分析的參考物質(zhì)，因此本研究采用配制模擬樣品的方式對方法的準確性進行評估：測得表中紅葡萄酒的甘油含量為；配制的乙醇水溶液，并以此為溶質(zhì)稀釋甘油工作標準至（甘油乙醇水溶液），按照體積比、、和的比例混合紅葡萄酒和甘油乙醇水溶液，并分別測定甘油δ值，結(jié)果見表。表 模擬樣品中甘油δ測定結(jié)果（‰）甘油乙醇水溶液：紅葡萄酒預測值實測值 通過對表數(shù)據(jù)分析，我們發(fā)現(xiàn)兩組數(shù)據(jù)的線性擬合的相關系數(shù)為，配對檢驗結(jié)果表明兩組數(shù)據(jù)無顯著性差異（），這說明該方法能夠準確測定葡萄酒樣品中甘油的δ值。 協(xié)同試驗為驗證方法的再現(xiàn)性，按照 的規(guī)定隨機選定位操作人員，分別處理純甘油、表中紅白葡萄酒樣品并測定，結(jié)果見表。表 協(xié)同試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計結(jié)果實驗室純甘油白葡萄酒紅葡萄酒 平均值重復性標準差 重復性限 再現(xiàn)性標準差 再現(xiàn)性限 方法 規(guī)定測定甘油δ的重復性限和再現(xiàn)性分別為‰和‰，由此可知，本次協(xié)同試驗的結(jié)果符合要
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