高效液相色譜-資料下載頁
2025-08-01 17:58本頁面
【正文】 器進(jìn)樣裝置 ? 壓力小于 10MPa時用，采用雙層隔膜和雙隔板進(jìn)樣口，微量注射器直接進(jìn)樣，受進(jìn)樣技術(shù)影響大。不常用。 ? B 閥進(jìn)樣裝置 ? 常用 。由高壓六通閥和固定體積的定量管（ 11000ul）組成。 ? 可以由定量管和微量進(jìn)樣器來選擇進(jìn)樣體積。 ? 優(yōu)點：進(jìn)樣量可變范圍大，分析制備通用；重復(fù)性好；可直接高壓進(jìn)樣，不需停流；易于自動化。 ? 缺點：死體積稍大，價格高。 C 自動進(jìn)樣裝置 ? 自動控制，儀器化操作 ? 一般可放置 100多個樣品。 ? 軟件操作。 ? 價格高。 D 進(jìn)樣技術(shù)對峰擴(kuò)展的影響 ? 進(jìn)樣體積過大會使柱效下降，峰變寬。 ? 注意控制樣品濃度不要太大。防止固定相超負(fù)荷。 ? 一般認(rèn)為樣品濃度對譜峰擴(kuò)展的影響比樣品體積更為重要。 分離系統(tǒng) —— 色譜柱 色譜柱是液相色譜的 心臟部件 ，它包括柱管與固定相兩部分。柱管材料有玻璃、不銹鋼、鋁、銅及內(nèi)襯光滑的聚合材料的其他金屬。玻璃管耐壓有限，故金屬管用得較多。一般色譜柱長 5～30cm，內(nèi)徑為 4～ 5mm，凝膠色譜柱內(nèi)徑 3～ 12mm，制備柱內(nèi)徑較大，可達(dá) 25mm 以上。 一般在分離柱前有一個預(yù)柱，預(yù)柱內(nèi)填充物和分離柱通常一樣，這樣可以使樣品或流動相中存在的強(qiáng)保留組分被預(yù)柱 “ 吸附 ” ，保證分離柱的性能不受影響 。 柱子裝填得好壞對柱效影響很大。對于細(xì)粒度的填料（＜ 20μm）一般采用勻漿填充法裝柱，先將填料調(diào)成勻漿，然后在高壓泵作用下，快速將其壓入裝有洗脫液的色譜柱內(nèi)，經(jīng)沖洗后，即可備用。 色譜柱 A 液相色譜填料 ? 填料之間存在差異，甚至同一廠商生產(chǎn)的同一種填料因批號不同也會有差異。因此只有相當(dāng)?shù)闹盍?，沒有相同的柱填料。這與基質(zhì)、鍵合、填裝過程都有關(guān)系。 ? 多數(shù)柱填料基質(zhì)采用多孔微粒硅膠，通常有球形和無定形兩種。具有不同的粒度、孔徑和表面積。一般 HPLC使用小顆粒球形硅膠，具有分離速度快、阻力大的特點。粒徑一般 310微米，孔徑 610nm。而用的最多的是 5微米粒度，孔徑 810nm。用于蛋白質(zhì)分離的大孔硅膠孔徑為 30nm。多孔聚合物微球可以使用寬的 pH范圍。 ? 不同液相色譜法使用的填料將在下一節(jié)課中討論， B 柱材料、形狀，柱管清洗 柱管 為不銹鋼管，內(nèi)壁有很高的光潔度（優(yōu)于 ?8），不能有軸向溝槽。 尺寸 ： 分析柱： 內(nèi)徑 2 ，長度 1025厘米 半制備柱： 5 10 制備柱： 10 微型柱： 細(xì)徑柱 也有 PEEK柱管 毛細(xì)管柱 也有石英毛細(xì)管 柱管清洗 ： 溶劑清洗 （丙酮 ?苯 ?異丙醇 ?重蒸水 ?空氣或 N2） 不銹鋼管油污 （清除油污 ?浸入硫酸 /硝酸 /鹽酸 /水=28:4:8:60處理 260秒再清洗） 表面黑膜 可用 7080%硝酸溶液祛除，再用上法清洗 接頭、連接管的選擇 ：耐化學(xué)腐蝕、密封性好，死體積要小。窄心管內(nèi)徑約 。 C 柱裝填與維護(hù) ? 填料的篩分 溶劑沉降法懸浮篩分 ? 干法裝柱 ：適用于 2050um制備色譜填料的裝填，方法與氣相填充柱的裝填大致相同，但不要過分地振動和敲打。 (僅適用于大粒徑固定相 ) 濕法裝柱（勻漿法裝柱） 基本過程 （勻漿 ?入罐 ?排氣 ?高壓頂替裝填 ?降壓平衡 ?降至常壓靜置 ?拆下、安裝） a. 等密度法 使用高密度溶劑碘代或溴代烷烴 b. 氨水法 使用 ，主要用于硅膠柱的裝填（利用極性溶劑的分散性能） c. 非等密度法 使用二氧六環(huán) /四氯化碳、甲醇、氯仿、異丙醇等，濃度要低，配制后盡快裝填。 ? 頂替液通常為甲醇（反相柱）、己烷或氯仿（正相柱） ?柱性能評價： 塔板數(shù)、峰不對稱度（ 1/10處，垂線至后沿 /前沿 = 不超過 ） ? 柱維護(hù)： 加流路過濾器和保護(hù)柱，避免高壓沖擊，選擇合適的流動相，凈化樣品，用強(qiáng)溶劑定期沖洗柱。 ?柱封存溶劑： 正相柱用 2,2,4三甲基戊烷；反相柱用甲醇；離子交換柱用水（可加%疊氮鈉防霉）
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