制備色譜技術與操作及實驗經(jīng)驗-資料下載頁
2025-07-13 21:48本頁面
【正文】 以來保證純度，主要為了節(jié)省流動相和提高設備利用率。13 問：制備純化蛋白、多肽，耗用流動相驚人，請問這些用過的流動相（乙腈，甲醇）可以重蒸使用嗎？ 答： [sya] [zwc] [haode0864] [jianjun_he]流動相用一般減壓方法重蒸后，往往會形成有機溶劑和水會共沸，另外，由于減壓蒸餾屬于單次平衡，往往得不到100%純度的溶劑，這會使溶劑的配置有一定困難，從而使色譜的重現(xiàn)性和分離度會發(fā)生一定的變化。如果要求不是很高的話，一般可以分析重蒸后餾分中的各組分含量，計算后再使用。要通過重蒸得到純物質(zhì)是極其困難的，必須采用精餾塔多級蒸發(fā)，單就設備投資和能耗來講，實驗室規(guī)?；蛏a(chǎn)規(guī)模的廢液回收處理已經(jīng)是得不償失。其實，我們沒有必要得到純的物質(zhì)。14 問：反相色譜分離純化后，怎樣除去流動相產(chǎn)品中的TFA和乙腈或其他雜質(zhì)？ 答：[jianjun_he]TFA是反相色譜分離中常用的添加劑?？梢杂脙龈傻霓k法去除，國外許多文獻是這樣報道的。還可以試試離子交換、凝膠層析、甚至透析和超濾，其中，離子交換層析效果比較好，還可以起到濃縮樣品的作用。首先，凍干的辦法應該可以幾乎徹底地除去TFA和乙腈，藥物實驗前最好先檢測一下凍干品中的殘留量，只要不超過允許范圍，這種辦法是最最簡單、有效的。其次，如果你的藥物的分裝量不大的話(100ug)，建議你用離子交換層析，最好裝一個小一點兒的柱子，讓含鹽洗脫峰的蛋白濃度達10mg/ml以上，稀釋后完全符合試驗要求。如果用分子篩，考慮稀釋，最好也先過一個離子交換。此外可以試試疏水層析。如果產(chǎn)品是堿的話，可能會形成TFA鹽，這樣通過上述方法就無法除去。一般可以用堿水洗，然后將產(chǎn)品萃取出來?；蛘咴诶锩婕尤胍欢康柠}酸，再干燥后形成鹽酸鹽。15 問：同一種填料的分析柱、制備柱按線形放大公式套，分離度會不會變化？答：[clitonzhou] [朝陽]一般會有一定的變化，原因有以下幾點（1） 制備柱的裝填是否均勻，如不均勻則可能產(chǎn)生渦流擴散使各個組分的經(jīng)過通道的直徑不同、阻力不一樣，停留時間不同，色譜峰可能變寬。（2） 如果樣品在流動相中溶解度小，在制備色譜上會有不同的峰展寬。（3）如果樣品在分析柱上有展寬或拖尾的現(xiàn)象，放大到制備柱上后峰的展寬和拖尾經(jīng)常會非常嚴重，導致分離失敗。16 問：制備色譜柱如何測柱效？答：[888wym]可以選擇幾種物質(zhì)，苯，甲苯，萘、蒽等的衍生物上柱，流動相一般用6580%的甲醇/水，測定后根據(jù)保留時間計算塔板數(shù)。由于制備色譜的管路死體積一般比較大，很難得到和供應商相同的柱效。建議在制備柱開始使用時在自己的色譜上測一下柱效，然后定期檢測柱效進行以進行比較。17 問：反相色譜分離后，如何快速從流動相中得到產(chǎn)品？答：[半透膜] 可以考慮先在低溫下，減壓旋蒸除去其中的有機溶劑，然后用萃取的方法（如乙醚、氯仿萃取等）把產(chǎn)品萃取出來，然后再低溫再旋蒸，這樣，就可以不將溫度升得很高而得到產(chǎn)品。如果要直接蒸掉流動相，水泵的真空度要注意（要檢查氣密性），否則蒸水會很慢。一般比較好的泵在6070度即可蒸掉水，如果泵的真空度不好，可能需要8090度才行，這樣容易暴沸導致樣品損失。另為，溫度太高可能引起物質(zhì)變性。
范文總結(jié)相關推薦
鄂ICP備17016276號-1