營養(yǎng)組學研究進展-資料下載頁
2025-06-28 06:48本頁面
【正文】 快速臨床診斷。ＩＣＡＴ技術也面臨一些問題:無法檢測不含半胱氨酸的蛋白質。半胱氨酸殘基必須位于易處理的位置上。很難得到蛋白質磷酸化等翻譯后修飾的信息存在特異性吸附、不可逆吸附和容量低的缺點.⑥ 噬菌體展示技術。,表面就會表達出相應的單抗。將噬菌體過柱,檢測單抗與柱上目的蛋白的特異性結合。同酵母雙雜交系統相比,噬菌體展示技術同樣具有簡便、高通量的優(yōu)點,不同的是,反應在溶液中而不是在酵母細胞核中進行。另外,由于有些蛋白質本身有激活轉錄活性,不經過雙雜交相互作用就能激活報道基因的表達,此時酵母雙雜交系統不再適用,可能改變天然蛋白質的結構和功能,其體外檢測的相互作用可能與體內不符。⑦ 串聯親和純化(Tandem affinity purification ，TAP)。TAP技術的開發(fā)成為研究蛋白質相互作用的方法學上的巨大突破。該方法集成了經典的親和純化和免疫共沉淀這兩種技術的優(yōu)點,既可像前者得到高純度、低拷貝數的蛋白質復合體,也繼承了后者運用特異性的標記蛋白與親和柱之間的相互作用,可快速地得到生理條件下與目標蛋白存在真實相互作用的蛋白質。目前ＴＡＰ技術與質譜技術的聯用,以及質譜技術的自動化,使得大規(guī)模地分析相互作用的蛋白質在技術上成為可能。⑧ 酵母雙雜交系統。酵 母 雙 雜 交 系 統 是 由Fileds等（1989）首先報道，主要用于研究蛋白之間的相互作用，其工作原理是基于酵母基因的啟動子序列可被轉錄激活因子所識別，從而誘導位于啟動子下游的報告基因表達，真核細胞的許多轉錄激活因子含有2個功能區(qū)：一個是DNA結合區(qū),能與啟動子序列結合,另一個是激活區(qū),能活化啟動子,僅含有DNA結合區(qū)或啟動子激活區(qū)的蛋白均無法激活啟動子。所以位于啟動子下游報告基因的表達為陰性，可構建表達DNA結合區(qū)與誘餌蛋白Y融合的載體同時構建表達啟動子激活區(qū)與獵物蛋白Z融合的載體,然后將它們同時引入含有特定啟動子和報告基因的酵母細胞中,，則啟動子會被激活。誘導其下游報告基因的表達，因此通過檢測報告基因是否表達，就可推斷蛋白Y與Z之間是否存在著相互作用的關系。研究進展：傳統的Y2H系統只能檢測位于細胞核內的蛋白間的相互作用，難以研究膜蛋白或細胞漿內蛋白間的相互作用。為了克服其局限性，Snider等人（2010）建立了膜酵母雙雜交系統（membrane Y2H）來檢測膜蛋白與膜蛋白或膜蛋白與細胞漿蛋白之間的相互作用。（3）展望雖然蛋白質組學的研究方法很多,但每種方法都存在缺點。但隨著科學技術的不斷發(fā)展,蛋白質組學的研究技術會日益成熟。目前,已經出現了大量靈敏度更高、質譜、芯片等技術現正得到普遍的應用。我們有理由相信,隨著基因組研究的進一步拓展,蛋白質研究數據的不斷積累,尤其是隨著新技術方法的不斷突破和生物信息學工具的日益完善,蛋白質組學必將取得突飛猛進的發(fā)展,相信隨著全世界生命科學研究的持續(xù)快速發(fā)展,蛋白質組學及其研究技術必將成為21世紀的核心學科之一,并將切實而廣泛地對人類生活帶來巨大影響,為人類進步和發(fā)展做出更大的貢獻
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