【正文】 霉素溶液200u/ml 四環(huán)素溶液200u/ml 磺胺嘧啶鈉200g/ml［記錄］菌　　　　種藥　物抑菌圈直徑（mm）　　判　　定金　黃　色葡　萄　球　菌青霉素鏈霉素四環(huán)素磺胺嘧啶鈉大　腸　桿　菌青霉素鏈霉素四環(huán)素磺胺嘧啶鈉［討論］列出青霉素、鏈霉素、四環(huán)素、磺胺嘧啶鈉的抗菌范圍及其主適應癥。附：培養(yǎng)基及菌液的制備１、肉湯培養(yǎng)基制法：　　、蒸餾水1000。溶解后，－，煮沸10分鐘，冷卻過濾，15磅壓力滅菌15分鐘備用。２、肉瓊脂培養(yǎng)基制法：　　肉湯培養(yǎng)基100ml，－，在肉湯培養(yǎng)基高壓滅菌前，加入瓊脂煮沸，再高壓消毒，如果培養(yǎng)肺炎雙球菌或鏈球菌，臨用前須另加1％葡萄糖或10％滅活血清（即血清經56℃水溶30分鐘）。３、菌液制備：常用的菌種有鏈球菌、肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌、大腸桿菌、綠膿桿菌等，前兩種菌須用10％血清肉湯培養(yǎng)基接種，39℃培養(yǎng)16－18小時，然后1：10或1：100稀釋后用，其余菌種給肉湯培養(yǎng)基接種，方法同前，培養(yǎng)后備用。 　應用試管法測定抗菌藥的最小抑菌濃度［目的］通過實驗，掌握體外測定抗菌藥物的ＭＩＣ的一般方法。［材料］試管、吸管、試管架、洗耳球、容量瓶；　抗生素（如恩諾沙星）、肉湯培養(yǎng)液、菌液。［方法］１、稀釋藥液（１０倍稀釋法）：取原藥１ml，用培養(yǎng)液稀釋為１０ml；　　對倍稀釋法：取滅菌試管６支，，混勻，，依次類推到第６管。２、加菌液：。３、做對照管：（１）絕對生長管：；（２）絕對不生長管：取試管１只。４、培養(yǎng)觀察：將做好的各管包扎好，寫好組名，放入３７℃的恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，２４小時后觀察結果。判斷：試驗管以出現(xiàn)渾濁的前一管的濃度為最小抑菌濃度。如５號管開始出現(xiàn)渾濁，則４號管的濃度為該抗生素的最低抑菌濃度。 藥物的體內抗菌實驗[目的] 了解細菌感染實驗治療方法的基本過程并觀察青霉素的體內抗菌作用及ED50的測定。[材料] 小白鼠30只（18～22g）注射器（1ml） 小試管 試管架 MH培養(yǎng)基 金葡菌液 5%胃膜素懸液 青霉素G鈉 %碘酊 70%乙醇 5%石炭酸溶液[方法] 制備菌液 將保存的金葡菌接種于MH培養(yǎng)基中，于37℃培養(yǎng)16～18小時。用平皿表面計數法測定實驗感染用的活菌數（如條件一致，則不必每次測定）。將上述菌液用生理鹽水以10倍順序稀釋為1010103…等不同濃度菌液；再取此不同濃度的菌液1ml加5%胃膜素懸液9ml，即做成濃度為1010104…的菌懸液用。 預試 將不同濃度的菌懸液分別腹腔注射于3～5只小鼠，,觀察其死亡情況。正式實驗時選用最小致死量，即感染后引起小鼠80～100%死亡的菌液濃度進行感染。肺炎球菌和鏈球菌的腹腔感染可不用胃膜素稀釋，而是將在血清MH培養(yǎng)基中培養(yǎng)16～～,觀察24～48小時動物死亡情況。 實驗治療 取18～22g的小鼠30只，雌雄均可，雌者須無孕。按性別體重隨機分為6組，每組5只。用預試中選定并適當稀釋的菌懸液，以感染各組小鼠。第1～5組于感染的同時及感染后6小時肌內注射不同劑量青霉素，劑量分別為20萬u，14萬u，，（亦可實驗前根據細菌敏感情況調整用量）。連續(xù)觀察2～3天，記錄各組小鼠死亡情況。[注意事項] 本實驗須按微生物實驗中處理感染動物之常規(guī)進行，嚴防菌液污染。 實驗結束后，應將全部接種過菌液的動物不論死活進行焚化或丟入置有5%石炭酸溶液的缸內，用肥皂洗手后用碘酊及酒精擦手，以防傳播疫病。[報告要點] 實驗結果按下表填寫并計算該藥的半數有效量及95%可信限。并根據其半數致死量計算治療指數。治療指數=LD50/ED50藥物名稱劑量（mg/kg）對數劑量X動物數（只）死亡動物數（只）%ED50與95%可信限受試藥物對照藥物[討論題] 抗菌藥物的體內抗菌實驗包括哪些基本步驟，應如何進行？ 治療指數有何意義？ 硫酸鏈霉素的急性中毒及其解救[目的] 觀察硫酸鏈霉素的急性中毒癥狀，了解其解救方法。[材料] 家兔2只人工呼吸機 橡皮導管 剪刀 注射器 棉球25%硫酸鏈霉素溶液 10%葡萄糖酸鈣溶液 %甲基硫酸新斯的明溶液[方法] 取家兔2只，編號，稱體重，觀察動物的呼吸情況，翻正反射及四肢肌肉張力。（25%），觀察其反應。當出現(xiàn)呼吸麻痹時，將與人工呼吸機的出氣口相連的橡皮導管插入家兔的一側鼻孔，連續(xù)給予人工呼吸，觀察其能否恢復。 （25%），呼吸麻痹后同樣通過鼻導管給予人工呼吸，并靜脈注射葡萄糖酸鈣250mg/kg(10%)(%)，觀察其能否恢復。[報告要點]兔（編號）處理階段觀察項目呼吸情況翻正反射四肢肌張力1給藥前給鏈霉素后2給藥前給鏈霉素后給葡萄糖酸鈣及新斯的明后[討論題] 鏈霉素的急性中毒主要表現(xiàn)在哪些方面？應如何解救？你能否從靜注葡萄糖酸鈣和新斯的明有解救作用來推論鏈霉素使骨骼肌麻痹的機制？ 磺胺藥物的溶解性［目的］　了解磺胺類藥物的特性。［材料］?。保癿l刻度試管、試管架、滴管；磺胺嘧啶、蒸餾水、１Ｎ氫氧化鈉、１／４Ｎ鹽酸、pH試紙、天平。［方法］１、放入10ml試管中，加入蒸餾水5ml，劇烈振搖數分鐘，觀察能否溶解。２、然后滴入１Ｎ氫氧化鈉，隨搖隨滴，直到藥物溶解為止，采用pH試紙測其pH值。３、再慢慢滴加１／４Ｎ鹽酸，隨搖隨滴，可見溶液變混濁，有羽狀小片游懸于其中，此時再測其pH值。４、最后再加入過量的１／４Ｎ鹽酸，溶液能否變成澄清？此時pH值又為多少？［記錄］　　　水　氫氧化鈉　　鹽　酸　過量鹽酸溶解情況溶液pH溶解情況溶液pH溶解情況溶液pH溶解情況溶液pH磺胺粉［討論］解釋本實驗各階段的結果，并討論其臨床意義。 糖皮質激素對單核巨噬細胞吞噬功能的影響（小鼠碳粒廓清法）[目的] 學習小鼠碳粒廓清法，觀察可的松對單核巨噬細胞功能的影響。[原理] 一定大小的顆粒狀異物（如印度墨汁等），靜脈注射入血流后，迅速被單核吞噬細胞所清除，故恒定異物量時，其血流中消除速率可反映單核巨噬細胞的吞噬功能。血中碳粒濃度對數值與時間呈直線關系，該直線斜率K可表示吞噬速率（或稱廓清指數）。因動物肝、脾重量可影響K值，故可換算為吞噬指數a。[材料] 小鼠2只（編號）試管 采血吸管 吸管 注射器 小鼠固定器 鼠籠 天平 剪刀鑷子 分光光度計1%醋酸可的松溶液 生理鹽水 %NaCO3溶液 1：5稀釋的印度墨汁[方法] 實驗前4天，取體重18～22g 的小鼠2只，標記，稱重。給甲鼠腹腔注射醋酸可的松100mg/kg(1%)，每日1次，連續(xù)3日。 實驗當天（即末次給藥后24小時），給每只鼠尾靜脈注射1：,并記時。注射印度墨汁后1min和5min用采血吸管（預先用肝素溶液濕潤）分別從眶后靜脈叢取血20ul，% NaCO3溶液2ml的試管內，搖勻。在680nm波長下比色，記錄吸收度（A）值。最后將小鼠頸椎脫臼處死，取肝、脾，用濾紙吸干后稱重。 按下列公式計算廓清指數K值和吞噬指數a值： K= a= 式中A為血樣吸收度值，t為采血時間，W為體重，Wls為肝脾合重。 [注意事項] 印度墨汁臨用前用生理鹽水稀釋5倍，經超聲處理后，3000rpm離心15min，棄去沉淀物后供用，以免凝聚的碳粒阻塞毛細血管，引起動物猝死。 經尾靜脈注射的印度墨汁量必須準確。 采血時間也可于注射印度墨汁后2min和20min進行，但必須準確無誤。[報告要點]鼠（編號）藥物劑量與途徑廓清指數（K）吞噬指數（a）12綜合各實驗小組的結果，對兩組小鼠的廓清指數和吞噬指數差異進行統(tǒng)計學處理。[討論題] 糖皮質激素對免疫過程的哪些環(huán)節(jié)有作用？本實驗結果說明什么問題？ 環(huán)磷酰胺對小鼠血清抗體形成的影響[目的] 學習血清中溶血素的分光光度測定法，觀察環(huán)磷酰胺對血清溶血素形成的影響。[原理] 經綿羊紅細胞（SRBC）免疫后的動物，其淋巴細胞可產生抗SRBC抗體溶血素，并釋放至外周血。溶血素與SRBC一起體外溫育，在補體的參與下，可以發(fā)生溶血反應。溶血產生的全部血紅蛋白與Drabkin試劑反應，變成氰化血紅蛋白，溶液呈穩(wěn)定紅色，可于540nm比色。由分光光度法測定溶血過程中釋放的血紅蛋白，可以檢測出免疫動物血清溶血素的含量。[材料] 小鼠2只（編號）試管 試管架 吸管 長針 注射器 天平 恒溫水浴 冰浴 離心機 分光光度計 %環(huán)磷酰胺溶液 生理鹽水 Alsever溶液[，，蒸餾水100ml，無菌過濾，（G5漏斗）或8磅10分鐘滅菌后備用]Drabkin試劑（，，蒸餾水1000ml）。 3:5(V/V)SRBC懸液（無菌條件下自健康成年綿羊外頸靜脈取血，置于有玻璃珠的三角瓶中，搖動10分鐘以除去纖維蛋白，加入2倍量的Alsever 溶液，混勻，置4℃冰箱備用，保薦期不超過2周，臨用前用生理鹽水洗滌3次，前兩次1500rpm離心5min,棄去上清液，最后經2000rpm離心10min 得壓積紅細胞。按3:5（V/V）以生理鹽水稀釋即得所需SRBC懸液。）補體（將新鮮豚鼠血清按10:1(V/V)加入壓積SRBC中，于4℃放置30min，經常震蕩，2000rpm離心10min，吸取上清液，用生理鹽水1:10稀釋即得。原血清可置—20℃以下備用。）[方法]1． 給藥與免疫 取體重20g左右的小鼠2只，標記，稱重。甲鼠皮下注射環(huán)磷酰胺20mg/kg(%)。30min后，給每只鼠腹腔注射3:5(V/V)。2． 制備血清樣品 免疫4天后，摘除兩鼠眼球，將血液分別滴集于兩支小試管內，室溫下放置１h，用長針將凝固的血塊與管壁劃開，使血清充分滲出。以2000rpm離心10min，取上層血清，用生理鹽水稀釋500倍。3． 溶血反應 取2支試管，分別加入已稀釋好的兩鼠血清樣品各1ml，再逐支加入3:，冰浴中冷卻試管，向每管內加入補體1ml。將試管移至37℃恒溫水浴中，保溫10min，隨即置入冰浴中以終止反應。以2000rpm離心10min，取上清液供比色測定用。 另取一支試管，加入生理鹽水1ml代替血清樣品，其它操作與上述相同。該試管作為空白對照管供比色測定用。4． 比色測定 （1）測定樣品的吸收度值 分別取上述上清液1ml置入試管中，加入Drabkin試劑3ml，充分搖勻，放置10min后，于540nm波長下比色，記錄吸收度值。（2）測定SRBC半數溶血時的吸收度值 取3:，加Drabkin試劑稀釋至4ml，搖勻，放置10min，于540nm比色，即得本實驗中所用SRBC半數溶血時的吸收度值。5． 計算結果 按下式計算樣品半數溶血值（HC50）：樣品HC50=匯集全實驗室的結果，計算兩組小鼠的平均HC50值，進行t檢驗以判斷差異的顯著性。[注意事項]，應嚴格控制試管在恒溫水浴中的保溫時間。，豚鼠血清一定要經SRBC吸收，以消除非特異性溶血。[報告要點]組別藥物劑量與途徑本組HC50全實驗室HC50平均HC50差異的顯著性[討論題] 根據本次實驗結果，初步分析環(huán)磷酰胺的作用原理。 環(huán)磷酰胺對抗體分泌細胞的影響（溶血空斑試驗）[目的] 利用玻片小室法學習液相單層溶血技術，并觀察環(huán)磷酰胺對抗體分泌細胞的影響。[原理] 取出經綿羊紅細胞（SRBC）免疫后的動物脾臟制成細胞懸液，與SRBC混合溫育，在補體參與下，抗體分泌細胞釋放的抗體（溶血素），溶解周圍的SRBC，形成肉眼可見的溶血空斑。溶血空斑大體上能夠反應抗體分泌細胞數，故溶血空斑試驗可在體外檢測單個抗體分泌細胞（即空斑形成細胞，PFC），從而定量觀察藥物對抗體分泌細胞的影響。玻片小室法是將抗體分泌細胞，靶細胞和適量補體共同混懸于液體培養(yǎng)基中，加入平面小室，封閉形成一片單層細胞，37℃溫育形成空斑。[材料] 小鼠2只（編號）載玻片（7626mm） 蓋玻片（244mm制作小室用） 蓋玻片（畫有55格的2222mm，空斑計數用） 夾子 離心管 小試管 試管架 平皿 吸管滴管 尼龍網（100目） 注射器 天平 手術剪 鑷子 血細胞計數板 顯微鏡 冰浴 離心機 恒溫箱 %環(huán)磷酰胺溶液 生理鹽水 10%SRBC懸液（用生理鹽水稀釋壓積紅細胞而得，約2109SRBC/ml） 1%SRBC懸液（用Hank′s溶液配制而成） 補體（經SRBC吸收的豚鼠血清） TrisNH4CL溶液 Hank′s溶液 臺盼藍（tryp an blue）染液 石蠟[方法] 1．制作玻片小室 在載玻片的兩端和中央各放一張蓋玻片（244mm）,另將一張載玻片復蓋其上，將兩層載玻片用夾子夾住，然后用石蠟封固載玻片兩端和一邊，制作成一邊開口的兩個小室。2．給藥與免疫 取體重18～22 g小鼠2只，稱記體重