【正文】 霉素溶液200u/ml 四環(huán)素溶液200u/ml 磺胺嘧啶鈉200g/ml［記錄］菌　　　　種藥　物抑菌圈直徑（mm）　　判　　定金　黃　色葡　萄　球　菌青霉素鏈霉素四環(huán)素磺胺嘧啶鈉大　腸　桿　菌青霉素鏈霉素四環(huán)素磺胺嘧啶鈉［討論］列出青霉素、鏈霉素、四環(huán)素、磺胺嘧啶鈉的抗菌范圍及其主適應(yīng)癥。附：培養(yǎng)基及菌液的制備１、肉湯培養(yǎng)基制法：　　、蒸餾水1000。溶解后，－，煮沸10分鐘，冷卻過(guò)濾，15磅壓力滅菌15分鐘備用。２、肉瓊脂培養(yǎng)基制法：　　肉湯培養(yǎng)基100ml，－，在肉湯培養(yǎng)基高壓滅菌前，加入瓊脂煮沸，再高壓消毒，如果培養(yǎng)肺炎雙球菌或鏈球菌，臨用前須另加1％葡萄糖或10％滅活血清（即血清經(jīng)56℃水溶30分鐘）。３、菌液制備：常用的菌種有鏈球菌、肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌、大腸桿菌、綠膿桿菌等，前兩種菌須用10％血清肉湯培養(yǎng)基接種，39℃培養(yǎng)16－18小時(shí)，然后1：10或1：100稀釋后用，其余菌種給肉湯培養(yǎng)基接種，方法同前，培養(yǎng)后備用。 　應(yīng)用試管法測(cè)定抗菌藥的最小抑菌濃度［目的］通過(guò)實(shí)驗(yàn)，掌握體外測(cè)定抗菌藥物的ＭＩＣ的一般方法。［材料］試管、吸管、試管架、洗耳球、容量瓶；　抗生素（如恩諾沙星）、肉湯培養(yǎng)液、菌液。［方法］１、稀釋藥液（１０倍稀釋法）：取原藥１ml，用培養(yǎng)液稀釋為１０ml；　　對(duì)倍稀釋法：取滅菌試管６支，，混勻，，依次類(lèi)推到第６管。２、加菌液：。３、做對(duì)照管：（１）絕對(duì)生長(zhǎng)管：；（２）絕對(duì)不生長(zhǎng)管：取試管１只。４、培養(yǎng)觀(guān)察：將做好的各管包扎好，寫(xiě)好組名，放入３７℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，２４小時(shí)后觀(guān)察結(jié)果。判斷：試驗(yàn)管以出現(xiàn)渾濁的前一管的濃度為最小抑菌濃度。如５號(hào)管開(kāi)始出現(xiàn)渾濁，則４號(hào)管的濃度為該抗生素的最低抑菌濃度。 藥物的體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)[目的] 了解細(xì)菌感染實(shí)驗(yàn)治療方法的基本過(guò)程并觀(guān)察青霉素的體內(nèi)抗菌作用及ED50的測(cè)定。[材料] 小白鼠30只（18～22g）注射器（1ml） 小試管 試管架 MH培養(yǎng)基 金葡菌液 5%胃膜素懸液 青霉素G鈉 %碘酊 70%乙醇 5%石炭酸溶液[方法] 制備菌液 將保存的金葡菌接種于MH培養(yǎng)基中，于37℃培養(yǎng)16～18小時(shí)。用平皿表面計(jì)數(shù)法測(cè)定實(shí)驗(yàn)感染用的活菌數(shù)（如條件一致，則不必每次測(cè)定）。將上述菌液用生理鹽水以10倍順序稀釋為1010103…等不同濃度菌液；再取此不同濃度的菌液1ml加5%胃膜素懸液9ml，即做成濃度為1010104…的菌懸液用。 預(yù)試 將不同濃度的菌懸液分別腹腔注射于3～5只小鼠，,觀(guān)察其死亡情況。正式實(shí)驗(yàn)時(shí)選用最小致死量，即感染后引起小鼠80～100%死亡的菌液濃度進(jìn)行感染。肺炎球菌和鏈球菌的腹腔感染可不用胃膜素稀釋?zhuān)菍⒃谘錗H培養(yǎng)基中培養(yǎng)16～～,觀(guān)察24～48小時(shí)動(dòng)物死亡情況。 實(shí)驗(yàn)治療 取18～22g的小鼠30只，雌雄均可，雌者須無(wú)孕。按性別體重隨機(jī)分為6組，每組5只。用預(yù)試中選定并適當(dāng)稀釋的菌懸液，以感染各組小鼠。第1～5組于感染的同時(shí)及感染后6小時(shí)肌內(nèi)注射不同劑量青霉素，劑量分別為20萬(wàn)u，14萬(wàn)u，，（亦可實(shí)驗(yàn)前根據(jù)細(xì)菌敏感情況調(diào)整用量）。連續(xù)觀(guān)察2～3天，記錄各組小鼠死亡情況。[注意事項(xiàng)] 本實(shí)驗(yàn)須按微生物實(shí)驗(yàn)中處理感染動(dòng)物之常規(guī)進(jìn)行，嚴(yán)防菌液污染。 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)將全部接種過(guò)菌液的動(dòng)物不論死活進(jìn)行焚化或丟入置有5%石炭酸溶液的缸內(nèi)，用肥皂洗手后用碘酊及酒精擦手，以防傳播疫病。[報(bào)告要點(diǎn)] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果按下表填寫(xiě)并計(jì)算該藥的半數(shù)有效量及95%可信限。并根據(jù)其半數(shù)致死量計(jì)算治療指數(shù)。治療指數(shù)=LD50/ED50藥物名稱(chēng)劑量（mg/kg）對(duì)數(shù)劑量X動(dòng)物數(shù)（只）死亡動(dòng)物數(shù)（只）%ED50與95%可信限受試藥物對(duì)照藥物[討論題] 抗菌藥物的體內(nèi)抗菌實(shí)驗(yàn)包括哪些基本步驟，應(yīng)如何進(jìn)行？ 治療指數(shù)有何意義？ 硫酸鏈霉素的急性中毒及其解救[目的] 觀(guān)察硫酸鏈霉素的急性中毒癥狀，了解其解救方法。[材料] 家兔2只人工呼吸機(jī) 橡皮導(dǎo)管 剪刀 注射器 棉球25%硫酸鏈霉素溶液 10%葡萄糖酸鈣溶液 %甲基硫酸新斯的明溶液[方法] 取家兔2只，編號(hào)，稱(chēng)體重，觀(guān)察動(dòng)物的呼吸情況，翻正反射及四肢肌肉張力。（25%），觀(guān)察其反應(yīng)。當(dāng)出現(xiàn)呼吸麻痹時(shí)，將與人工呼吸機(jī)的出氣口相連的橡皮導(dǎo)管插入家兔的一側(cè)鼻孔，連續(xù)給予人工呼吸，觀(guān)察其能否恢復(fù)。 （25%），呼吸麻痹后同樣通過(guò)鼻導(dǎo)管給予人工呼吸，并靜脈注射葡萄糖酸鈣250mg/kg(10%)(%)，觀(guān)察其能否恢復(fù)。[報(bào)告要點(diǎn)]兔（編號(hào)）處理階段觀(guān)察項(xiàng)目呼吸情況翻正反射四肢肌張力1給藥前給鏈霉素后2給藥前給鏈霉素后給葡萄糖酸鈣及新斯的明后[討論題] 鏈霉素的急性中毒主要表現(xiàn)在哪些方面？應(yīng)如何解救？你能否從靜注葡萄糖酸鈣和新斯的明有解救作用來(lái)推論鏈霉素使骨骼肌麻痹的機(jī)制？ 磺胺藥物的溶解性［目的］　了解磺胺類(lèi)藥物的特性。［材料］　１０ml刻度試管、試管架、滴管；磺胺嘧啶、蒸餾水、１Ｎ氫氧化鈉、１／４Ｎ鹽酸、pH試紙、天平。［方法］１、放入10ml試管中，加入蒸餾水5ml，劇烈振搖數(shù)分鐘，觀(guān)察能否溶解。２、然后滴入１Ｎ氫氧化鈉，隨搖隨滴，直到藥物溶解為止，采用pH試紙測(cè)其pH值。３、再慢慢滴加１／４Ｎ鹽酸，隨搖隨滴，可見(jiàn)溶液變混濁，有羽狀小片游懸于其中，此時(shí)再測(cè)其pH值。４、最后再加入過(guò)量的１／４Ｎ鹽酸，溶液能否變成澄清？此時(shí)pH值又為多少？［記錄］　　　水　氫氧化鈉　　鹽　酸　過(guò)量鹽酸溶解情況溶液pH溶解情況溶液pH溶解情況溶液pH溶解情況溶液pH磺胺粉［討論］解釋本實(shí)驗(yàn)各階段的結(jié)果，并討論其臨床意義。 糖皮質(zhì)激素對(duì)單核巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響（小鼠碳粒廓清法）[目的] 學(xué)習(xí)小鼠碳粒廓清法，觀(guān)察可的松對(duì)單核巨噬細(xì)胞功能的影響。[原理] 一定大小的顆粒狀異物（如印度墨汁等），靜脈注射入血流后，迅速被單核吞噬細(xì)胞所清除，故恒定異物量時(shí)，其血流中消除速率可反映單核巨噬細(xì)胞的吞噬功能。血中碳粒濃度對(duì)數(shù)值與時(shí)間呈直線(xiàn)關(guān)系，該直線(xiàn)斜率K可表示吞噬速率（或稱(chēng)廓清指數(shù)）。因動(dòng)物肝、脾重量可影響K值，故可換算為吞噬指數(shù)a。[材料] 小鼠2只（編號(hào)）試管 采血吸管 吸管 注射器 小鼠固定器 鼠籠 天平 剪刀鑷子 分光光度計(jì)1%醋酸可的松溶液 生理鹽水 %NaCO3溶液 1：5稀釋的印度墨汁[方法] 實(shí)驗(yàn)前4天，取體重18～22g 的小鼠2只，標(biāo)記，稱(chēng)重。給甲鼠腹腔注射醋酸可的松100mg/kg(1%)，每日1次，連續(xù)3日。 實(shí)驗(yàn)當(dāng)天（即末次給藥后24小時(shí)），給每只鼠尾靜脈注射1：,并記時(shí)。注射印度墨汁后1min和5min用采血吸管（預(yù)先用肝素溶液濕潤(rùn)）分別從眶后靜脈叢取血20ul，% NaCO3溶液2ml的試管內(nèi)，搖勻。在680nm波長(zhǎng)下比色，記錄吸收度（A）值。最后將小鼠頸椎脫臼處死，取肝、脾，用濾紙吸干后稱(chēng)重。 按下列公式計(jì)算廓清指數(shù)K值和吞噬指數(shù)a值： K= a= 式中A為血樣吸收度值，t為采血時(shí)間，W為體重，Wls為肝脾合重。 [注意事項(xiàng)] 印度墨汁臨用前用生理鹽水稀釋5倍，經(jīng)超聲處理后，3000rpm離心15min，棄去沉淀物后供用，以免凝聚的碳粒阻塞毛細(xì)血管，引起動(dòng)物猝死。 經(jīng)尾靜脈注射的印度墨汁量必須準(zhǔn)確。 采血時(shí)間也可于注射印度墨汁后2min和20min進(jìn)行，但必須準(zhǔn)確無(wú)誤。[報(bào)告要點(diǎn)]鼠（編號(hào)）藥物劑量與途徑廓清指數(shù)（K）吞噬指數(shù)（a）12綜合各實(shí)驗(yàn)小組的結(jié)果，對(duì)兩組小鼠的廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。[討論題] 糖皮質(zhì)激素對(duì)免疫過(guò)程的哪些環(huán)節(jié)有作用？本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明什么問(wèn)題？ 環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠血清抗體形成的影響[目的] 學(xué)習(xí)血清中溶血素的分光光度測(cè)定法，觀(guān)察環(huán)磷酰胺對(duì)血清溶血素形成的影響。[原理] 經(jīng)綿羊紅細(xì)胞（SRBC）免疫后的動(dòng)物，其淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生抗SRBC抗體溶血素，并釋放至外周血。溶血素與SRBC一起體外溫育，在補(bǔ)體的參與下，可以發(fā)生溶血反應(yīng)。溶血產(chǎn)生的全部血紅蛋白與Drabkin試劑反應(yīng)，變成氰化血紅蛋白，溶液呈穩(wěn)定紅色，可于540nm比色。由分光光度法測(cè)定溶血過(guò)程中釋放的血紅蛋白，可以檢測(cè)出免疫動(dòng)物血清溶血素的含量。[材料] 小鼠2只（編號(hào)）試管 試管架 吸管 長(zhǎng)針 注射器 天平 恒溫水浴 冰浴 離心機(jī) 分光光度計(jì) %環(huán)磷酰胺溶液 生理鹽水 Alsever溶液[，，蒸餾水100ml，無(wú)菌過(guò)濾，（G5漏斗）或8磅10分鐘滅菌后備用]Drabkin試劑（，，蒸餾水1000ml）。 3:5(V/V)SRBC懸液（無(wú)菌條件下自健康成年綿羊外頸靜脈取血，置于有玻璃珠的三角瓶中，搖動(dòng)10分鐘以除去纖維蛋白，加入2倍量的Alsever 溶液，混勻，置4℃冰箱備用，保薦期不超過(guò)2周，臨用前用生理鹽水洗滌3次，前兩次1500rpm離心5min,棄去上清液，最后經(jīng)2000rpm離心10min 得壓積紅細(xì)胞。按3:5（V/V）以生理鹽水稀釋即得所需SRBC懸液。）補(bǔ)體（將新鮮豚鼠血清按10:1(V/V)加入壓積SRBC中，于4℃放置30min，經(jīng)常震蕩，2000rpm離心10min，吸取上清液，用生理鹽水1:10稀釋即得。原血清可置—20℃以下備用。）[方法]1． 給藥與免疫 取體重20g左右的小鼠2只，標(biāo)記，稱(chēng)重。甲鼠皮下注射環(huán)磷酰胺20mg/kg(%)。30min后，給每只鼠腹腔注射3:5(V/V)。2． 制備血清樣品 免疫4天后，摘除兩鼠眼球，將血液分別滴集于兩支小試管內(nèi)，室溫下放置１h，用長(zhǎng)針將凝固的血塊與管壁劃開(kāi)，使血清充分滲出。以2000rpm離心10min，取上層血清，用生理鹽水稀釋500倍。3． 溶血反應(yīng) 取2支試管，分別加入已稀釋好的兩鼠血清樣品各1ml，再逐支加入3:，冰浴中冷卻試管，向每管內(nèi)加入補(bǔ)體1ml。將試管移至37℃恒溫水浴中，保溫10min，隨即置入冰浴中以終止反應(yīng)。以2000rpm離心10min，取上清液供比色測(cè)定用。 另取一支試管，加入生理鹽水1ml代替血清樣品，其它操作與上述相同。該試管作為空白對(duì)照管供比色測(cè)定用。4． 比色測(cè)定 （1）測(cè)定樣品的吸收度值 分別取上述上清液1ml置入試管中，加入Drabkin試劑3ml，充分搖勻，放置10min后，于540nm波長(zhǎng)下比色，記錄吸收度值。（2）測(cè)定SRBC半數(shù)溶血時(shí)的吸收度值 取3:，加Drabkin試劑稀釋至4ml，搖勻，放置10min，于540nm比色，即得本實(shí)驗(yàn)中所用SRBC半數(shù)溶血時(shí)的吸收度值。5． 計(jì)算結(jié)果 按下式計(jì)算樣品半數(shù)溶血值（HC50）：樣品HC50=匯集全實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果，計(jì)算兩組小鼠的平均HC50值，進(jìn)行t檢驗(yàn)以判斷差異的顯著性。[注意事項(xiàng)]，應(yīng)嚴(yán)格控制試管在恒溫水浴中的保溫時(shí)間。，豚鼠血清一定要經(jīng)SRBC吸收，以消除非特異性溶血。[報(bào)告要點(diǎn)]組別藥物劑量與途徑本組HC50全實(shí)驗(yàn)室HC50平均HC50差異的顯著性[討論題] 根據(jù)本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果，初步分析環(huán)磷酰胺的作用原理。 環(huán)磷酰胺對(duì)抗體分泌細(xì)胞的影響（溶血空斑試驗(yàn)）[目的] 利用玻片小室法學(xué)習(xí)液相單層溶血技術(shù)，并觀(guān)察環(huán)磷酰胺對(duì)抗體分泌細(xì)胞的影響。[原理] 取出經(jīng)綿羊紅細(xì)胞（SRBC）免疫后的動(dòng)物脾臟制成細(xì)胞懸液，與SRBC混合溫育，在補(bǔ)體參與下，抗體分泌細(xì)胞釋放的抗體（溶血素），溶解周?chē)腟RBC，形成肉眼可見(jiàn)的溶血空斑。溶血空斑大體上能夠反應(yīng)抗體分泌細(xì)胞數(shù)，故溶血空斑試驗(yàn)可在體外檢測(cè)單個(gè)抗體分泌細(xì)胞（即空斑形成細(xì)胞，PFC），從而定量觀(guān)察藥物對(duì)抗體分泌細(xì)胞的影響。玻片小室法是將抗體分泌細(xì)胞，靶細(xì)胞和適量補(bǔ)體共同混懸于液體培養(yǎng)基中，加入平面小室，封閉形成一片單層細(xì)胞，37℃溫育形成空斑。[材料] 小鼠2只（編號(hào)）載玻片（7626mm） 蓋玻片（244mm制作小室用） 蓋玻片（畫(huà)有55格的2222mm，空斑計(jì)數(shù)用） 夾子 離心管 小試管 試管架 平皿 吸管滴管 尼龍網(wǎng)（100目） 注射器 天平 手術(shù)剪 鑷子 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板 顯微鏡 冰浴 離心機(jī) 恒溫箱 %環(huán)磷酰胺溶液 生理鹽水 10%SRBC懸液（用生理鹽水稀釋壓積紅細(xì)胞而得，約2109SRBC/ml） 1%SRBC懸液（用Hank′s溶液配制而成） 補(bǔ)體（經(jīng)SRBC吸收的豚鼠血清） TrisNH4CL溶液 Hank′s溶液 臺(tái)盼藍(lán)（tryp an blue）染液 石蠟[方法] 1．制作玻片小室 在載玻片的兩端和中央各放一張蓋玻片（244mm）,另將一張載玻片復(fù)蓋其上，將兩層載玻片用夾子夾住，然后用石蠟封固載玻片兩端和一邊，制作成一邊開(kāi)口的兩個(gè)小室。2．給藥與免疫 取體重18～22 g小鼠2只，稱(chēng)記體重