【正文】 60。 活化能：在一定溫度下1mol底物全部進入活化狀態(tài)所需要的自由能（kj/mol）（4） 酶的轉化數(shù)：在一定條件下每秒鐘每個酶分子轉換底物的分子數(shù)。（5） 寡聚酶：由兩個以上亞基組成的酶。（6） Kat單位：在最適條件下，酶秒鐘催化1mol底物轉化為產(chǎn)物所需的酶量，為Kat單位。（7） 酶偶聯(lián)分析法：由于分光光度法有其獨特的優(yōu)點，因此把一些遠類沒有光吸收變化的酶反應，可以通過與一些能引起光吸收變化的酶反映偶聯(lián)使第一個酶反映的產(chǎn)物轉變成第二個酶的具有光吸收變化的產(chǎn)物來進行測量。（8） 誘導契合說：1958年Koshland提出，當酶分子與底物分子接近時，酶蛋白受底物分子誘導，其構想發(fā)生有利于底物結合的變化，酶與底物在此基礎上互補契合進行反應。（9） 反饋抑制：許多小分子物質的合成是由一聯(lián)串的反應組成的，催化此物質生成的第一步的酶，往往被它們終端產(chǎn)物抑制。這種抑制叫反饋抑制。（10） 多酶復合體：由幾種酶靠非共價鍵彼此嵌合而成。， AgNO3，求該酶的最低相對分子質量。（Mr:92103）在最適條件下，試計算：（1）酶的比活力。[500U/mg]（2）轉換數(shù)。[]解：（1）比活力= （2）轉換數(shù)=1247。（1106/92103106）=，其轉換數(shù)為6104min1，試計算該酶在細胞內 濃度（假設新鮮組織含水80%，并且全部在細胞內）。[107 mol/L]解：1/610440247。（180%103）=[107 mol/L，其相對分子質量為120103，由6個相同亞基組成。純酶的Vmax為2800U/mg酶。它的一個活力單位規(guī)定為：在標準測定條件下，37℃、15min內水解10μmol焦磷酸所需要的酶量。問：（1）酶mg酶在每秒鐘內水解多少mol 底物？[105mol]。（2）每mg酶中有多少mol的活性部位（假設每個亞基上有一個活性部位）？[5108mol活性中心]。（3）酶的轉換數(shù)是多少？[622s1或622mol焦磷酸/（s?mol）酶活性中心]解：（1）280010/151/（60106）1=105 mol （2）1103/1201036=5108 mol （3）105247。1103/1201031/6=622，以酪蛋白為底物，用Folin酚比色法測定酶活力，得知每小時產(chǎn)生1500μg酪氨酸。另取2ml酶液，若以每分鐘產(chǎn)生1μg 酪氨酸的酶量為1個活力單位計算，根據(jù)以上數(shù)據(jù)，求出：（1）1ml酶液中所含蛋白質量及活力單位。[，250U]（2）比活力。[400U/mg蛋白質]（3）1g酶制劑的總蛋白含量及總活力。[，105U]解：（1）247。（225/25）= 1500/60247。（25/25）=250U （2）250247。=400U/mg （3）247。（125/25）1103= 103mg= 1500/60247。（25/25）247。（125/25）103=105U，用水溶解成1000ml，從中取出1ml測定淀粉酶活力。計算每g酶制劑所含淀粉酶活力單位數(shù)？[3000U]（淀粉酶活力單位定義：在最適條件下每小時分解1g淀粉的酶量稱為1個活力單位）解：60247。（1/10001）=3000U，竟測定得到下列數(shù)據(jù)：試計算比活力、百分產(chǎn)量及純化倍數(shù)。[比活力：180U/mg蛋白質，百分產(chǎn)量：17%，純化倍數(shù)：9倍] 體積/ml 活力單位/（U/ml） 蛋白質/（mg/ml）初提取液（NH4）2SO4鹽析 1205 200810 104解：（1）810/=180U/mg （2）8105247。（200120）100%=17% （3）180247。（200/10）=9第九章酶促反應動力學提要酶促反應動力學是研究酶促反應的速率以及影響此速率各種因素的科學。它是以化學動力學為基礎討論底物濃度、抑制劑、pH、溫度及激活劑等因素對酶反應速率的影響。化學動力學中在研究化學反應速率與反應無濃度的關系時，常分為一級反應、二級反應及零級反應。研究證明，酶催化過正的第一步是生成酶底物中間產(chǎn)物，MichaelisMenten該呢舉中間產(chǎn)物學說的理論推導出酶反應動力學方程式，即Km、Vmax、kcat、kcat/Km。Km是酶的一個特征常數(shù)，以濃度為單位，Km有多種用途，通過直線作圖法可以得到Km及Vmax。Kcat稱為催化常數(shù)，又叫做轉換數(shù)（TN值），它的單位為s1，kcat值越大，表示酶的催化速率越高。kcat/Km常用來比較酶催化效率的參數(shù)。酶促反應除了單底物反應外，最常見的為雙底物反應，按其動力學機制分為序列反應和乒乓反應，用動力學直線作圖法可以區(qū)分。酶促反應速率常受抑制劑影響，根據(jù)抑制劑與酶的作用方式及抑制作用是否可逆，將抑制作用分為可逆抑制作用及不可逆抑制作用。根據(jù)可逆抑制劑與底物的關系分為競爭性抑制、非競爭性抑制及反競爭性抑制3類，可以分別推導出抑制作用的動力學方程。競爭性抑制可以通過增加底物濃度而解除，其動力學常數(shù)Kˊm變大，Vmax不變；非競爭性抑制Km不變，Vˊmax變小；反競爭性抑制Kˊm及Vˊmax均變小。通過動力學作圖可以區(qū)分這3種類型的可逆抑制作用?？赡嬉种苿┲凶钪匾氖歉偁幮砸种疲^度態(tài)底物類似物為強有力的競爭性抑制劑。不可逆抑制劑中，最有意義的為專一性Ks型及kcat型不可逆抑制劑。研究酶的抑制作用是研究酶的結構與功能、酶的催化機制、闡明代謝途徑以及設計新藥物的重要手段。溫度、pH及激活劑都會對酶促反應速率產(chǎn)生重要影響，酶反應有最適溫度及最適pH，要選擇合適的激活劑。在研究酶促反應速率及測定酶的活力時，都應選擇酶的最適反應條件。習題%時，在Km和[S]之間有何關系？[Km=[S]]解：根據(jù)米氏方程：V=Vmax[S]/(Km+[S])得：=Vmax[S]/(Km+[S])Km=[S]102 mol/L，當?shù)孜镞^氧化氫濃度為100mol/L時，求在此濃度下，過氧化氫酶被底物所飽和的百分數(shù)。[80%]解：fES=[S]/（Km+[S]）=100103/(102+100103)=80%→P測得如下數(shù)據(jù)：[S]/molL1 V/nmolL1min1106 105 104 103 102 （1） 計算Km及Vmax。[Km：105，Vmax：75 nmolL1min1]（2） 當[S]= 5105 mol/L時，酶催化反應的速率是多少？[ nmolL1min1]（3） 若[S]= 5105 mol/L時，酶的濃度增加一倍，此時V是多少？[100 nmolL1min1]（4） 表中的V是根據(jù)保溫10min產(chǎn)物生成量計算出來的，證明V是真正的初速率。解：（1）由米氏方程得：15=Vmax?106/ (Km+106)……① 60=Vmax?104/（Km+104）……②由①、②得：Km=105，Vmax=75 nmolL1min1（2）V=755105/（105+5105）= nmolL1min1（3）502=100 nmolL1min1（4）帶如米氏方程可驗證。105 molL1，Vmax為22μmolL1 min1，底物濃度為2104 molL1。試計算：（1）競爭性抑制劑，（2）非競爭性抑制劑，（3）反競爭性抑制劑的濃度均為5104 molL1時的酶催化反映速率？這3中情況的Ki值都是3104 molL1，（4）上述3種情況下，抑制百分數(shù)是多少？[（1） min1，24%；（2） min1，%；（3） min1，%]解：（1）競爭性抑制劑的米氏方程為：V=Vmax[S]/(Km(1+[I]/Ki)+[S])代入數(shù)據(jù)得：V= min1i%=（1a）100%=（1Vi/Vo）100%=24%（2）非競爭性抑制劑的米氏方程為：V=Vmax[S]/((Km+[S])(1+[I]/Ki))代入數(shù)據(jù)得：V= min1i%=（1a）100%=（1Vi/Vo）100%=%（3）反競爭性抑制劑的米氏方程：V=Vmax[S]/(Km+[S](1+[I]/Ki))代入數(shù)據(jù)得：V= min1i%=（1a）100%=（1Vi/Vo）100%=%6．今制得酶濃度相同、底物濃度不同的幾個反應混合液，并測得反應初速率，數(shù)據(jù)見下表。請利用“EadieHofstee”方程式，用圖解法求出Km值及Vmax值。這種作圖法與LineweaverBurk作圖法比較有何優(yōu)點？[Vmax=160μmolL1 min1,Km=105 molL1][S]/molL1 V/μmolL1min1104 130104 110104 89105 62105 53105 38105 32解：將米氏方程改寫成：V=VmaxKm?V/[S],以VV/[S]作圖，得一直線，其縱截距為Vmax，斜率為Km，由圖得Vmax=160μmolL1min1,Km=105 molL1優(yōu)點：實驗點相對集中于直線上，Km和Vmax測定值較準確。，當?shù)孜餄舛萚S]=Km，競爭抑制劑濃度[I]=Ki時，反應的初速率是多少？[V=1/3Vmax]解：根據(jù)米氏方程可得：V=Vmax[S]/ (Km(1+[I]/Ki)+[S]),其中[S]=Km，[I]=KiV= VmaxKm/ (Km(1+Ki/Ki)+Km)=1/3 Vmax：（1）無抑制劑和有抑制劑的Vmax和Km值。[無抑制劑時Km=105 molL1，Vmax=50μmolL1min1，有抑制劑時：Km=105 molL1，Vmax=50μmolL1min1]（2）EI復合物的解理常數(shù)Ki。[Ki= 103molL1][S]/molL1 V/μmolL1min1 無抑制劑 有抑制劑（103 molL1）105 105 105 105 105 解：（1）無抑制劑時：V=Vmax[S]/(Km+[S])，將表中數(shù)據(jù)代入此式可得Km=105 molL1，Vmax= 對表中數(shù)據(jù)用V對[S]作圖，求Km值，可判斷有抑制劑時，Km值明顯增大，故該抑制劑應為競爭性抑制劑。據(jù)V=Vmax[S]/(Km(1+[I]/Ki)+[S])以及Vmax不變的性質可得，此時Vmax=，Km=105 molL1，Ki= 103molL19．同上。，求出下列參數(shù)（反應混合物中酶量為103μmol）。（1）Km；（2）Vmax；（3）kcat/Km；(4)轉換數(shù)。[Km:5104molL1；Vmax:6μmolL1min1；kcat/Km: 2105 mol1Ls1；轉換數(shù):100s1]解：Vmax=kcat?[Et]=k3?[E]=k3?[ES]？胰凝乳蛋白酶的轉換數(shù)100s1，DNA聚合酶是15s1。（1） 胰凝乳蛋白酶結合第五比DNA聚合酶有更高的親和性。（2） 胰凝乳蛋白酶反映速率比DNA聚合酶反映速率更大。（3） 在特別的酶濃度和飽和底物水平下胰凝乳蛋白酶反應速率比DNA聚合酶在相同條件下更低。（4） 在飽和底物水平下，兩種酶的反應速率。，它符合MichaelisMenten動力學，其Km為1106molL1。 molL1時。試問：底物濃度分別為102molL103molL1和106molL1時的反應初速率是多少？[1107 molL1min1，5108 molL1min1]解：∵Km=1106molL1《[S]= ∴V=Vmax=將題中數(shù)據(jù)代入米氏方程：V=Vmax[S]/(Km+[S])得：設[S]=xKmV=Vmax?xKm/((x+1)Km)=x/(x+1)?Vmax=1/(1+1/x)?VmaxV1= V2=V3=1/2?Vmax=13．假設2104 molL1的[I]抑制了一個酶催化反應的75%，計算這個非競爭性抑制劑的Ki？[105 molL1]解：i%=（1a）100%=（1Vi/Vo）100%=75% Vi/Vo=1/4 → Vo=4Vi…