有關(guān)人鼠嵌合抗體制備的可行性-資料下載頁
2025-06-22 14:20本頁面
【正文】 ne 2000試劑轉(zhuǎn)染，按試劑盒使用說明書進(jìn)行。設(shè)置空載體和無載體的細(xì)胞為對照。轉(zhuǎn)染72 h 后，加含MTX的選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。2周后將生長出的陽性克隆利用有限稀釋法單克隆化。4． 陽性克隆鑒定與篩選以間接法用抗原和酶標(biāo)羊抗人IgG Fc片段抗體檢測嵌合抗體的特異性及重組性。以適量抗原包被酶標(biāo)板，加細(xì)胞培養(yǎng)上清反應(yīng)后，再加羊抗人IgG Fc片段HRP酶標(biāo)抗體（經(jīng)鼠Ig吸附過）孵育，顯色后測A490吸光值。5． 抗體腹水生產(chǎn)腹腔種植轉(zhuǎn)染瘤細(xì)胞，5~7 天后抽取腹水。一只種植雜交瘤細(xì)胞的小鼠有時可產(chǎn)生多達(dá)10ml的腹水。報道稱從腹水中獲得的嵌合抗體產(chǎn)量可達(dá)1~2 mg/ml。七、 時間及成本預(yù)算表1 時間預(yù)算項(xiàng)目時間（周）載體構(gòu)建（外包，一次性）8雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)RNA提取與反轉(zhuǎn)錄引物合成1V區(qū)基因擴(kuò)增與克隆2V區(qū)基因測序1插入表達(dá)載體及鑒定2表達(dá)載體擴(kuò)增與抽提1轉(zhuǎn)染Sp2/0細(xì)胞與篩選3嵌合抗體檢測與篩選1總計(jì)（First Time）20表2 成本預(yù)算項(xiàng)目費(fèi)用（元）感受態(tài)細(xì)胞TEasy Vector載體構(gòu)建（外包）T4 DNA連接酶Taq DNA酶限制酶Trizol RNA提取試劑盒反轉(zhuǎn)錄PCR試劑盒，瓊脂糖，dNTPs，DNA MarkerDNA凝膠回收試劑盒質(zhì)粒抽提試劑盒轉(zhuǎn)染試劑盒LipofectamineTM 2000，篩選劑MTX羊抗人IgG Fc片段HRP酶標(biāo)抗體低溫高速臺式離心機(jī)水平式電泳儀PCR擴(kuò)增儀紫外透射儀恒溫?fù)u床引物合成測序其它耗材總計(jì)（First Time）
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