大規(guī)模動物細胞培養(yǎng)問題及對策-資料下載頁
2025-06-07 17:37本頁面
【正文】 螯合層析直接復性及純化包涵體形式表達的組氨酸融合蛋白；以HiTrap Heparin肝素親和層析直接復性及純化包涵體形式表達的含多個賴氨酸的融合蛋白。兩種親和層析預裝柱均可反復多次重復使用，比一般試劑盒更方便、耐用。中藥的化學成分極其復雜。傳統(tǒng)中藥多是煎熬后服用，有效成份多較為親水，包括生物堿、黃酮、蒽醌、皂甙、有機酸、多糖、肽和蛋白質。靈活及綜合性地利用多種層析方法。如離子交換、分子篩、反相層析，更容易分離到單一活性成分。Sephadex LH20葡聚糖凝膠同時具備吸附性層析和分子篩功能，例：如用甲醇分離黃酮甙，三糖甙先被洗下來，二糖甙其次，單糖甙隨后，最后是甙元。Sephadex LH20可使用水、醇、丙酮、氯仿等各種試劑，廣泛用于各種天然產物的分離，包括生物堿、甙、黃酮、醌類、內脂、萜類、甾類等。*生物堿在酸性緩沖液中帶正電，成為鹽，HiTrap SP陽離子交換層析柱可以分離許多結構非常近似的生物堿。相反，黃酮、蒽醌、皂甙、有機酸等可溶于偏堿的緩沖液中，在HiTrap Q陰離子交換柱上分離效果良好。*一般多糖純化大多使用分子篩如Sephadex，Sephacryl。若分子量在600KD以下，并需更高分辨率，可選擇新一代的Superdex。一般植物可能含水溶性、酸溶性、堿溶性多種多糖。綜合利用分子篩及離子交換層析有助進一步獲各組份純品。另外，多糖藥物需去除可引起過敏的蛋白質，傳統(tǒng)Sevag方法用丁醇脫蛋白需反復數(shù)十次。陰陽離子交換法可以一、兩步快速去除多糖中殘存的蛋白質。SOURCE130RPC反相層析也很適合各種中藥有效成分的檢測、分離和放大制備。由于中藥的成分非常復雜，SOURCE反相層析可用范圍為PH114 ，并可用1M NaOH，1M HCL清洗、再生。比傳統(tǒng)硅膠反相層析更易于工藝優(yōu)化及在位清洗，壽命也更長。肽類的來源有天然萃取，合成肽和重組肽三種。肽容易被酶降解，但可從有機溶劑或促溶劑中復性，所以多以高選擇性的反相層析如SOURCE 30RPC、SOURCE 15RPC、SOURCE 5RPC或離子交換Minibeads、Monobeads作純化。Superdex Peptide HR是專為肽分子純化設計的凝膠過濾預裝柱，能配合反相層析做出更精美的肽圖。肽分子制備可用離子交換配合凝膠過濾Superdex 30 PG。、病毒核酸的純化用于去除影響測序或PCR污染物等研究。核酸可大致上分為質粒DNA、噬菌體DNA和PCR產物等。病毒也可視作核酸大分子，和質粒DNA一樣，可用分離大分子的Sephacry S1000 SF、Superose或Sepharoce 4FF凝膠過濾介質去除雜蛋白，再配合離子交換如Mono Q、 SOURCE Q分離核酸。寡酸苷酸多應用在反義(antisense)DNA、RNA測序、PCR和cDNA合成等研究。合成后含三苯甲基的寡核苷酸以陰離子交換的Mono Q或快速低反壓的SOURCE Q在PH12下可除副產物，并避免凝集和保護基的脫落。載量大大高過反相層析，可用做大量制備。不含三苯甲基的失敗序列可用反相柱ProRPC去除。、小分子去除使用凝膠過濾介質Sephadex G10，G15，G25，G50等去除小分子，效率高，處理量可達床體積30%。只需在進樣后收集首1/31/2柱體積的洗脫液，就可以去除該填料分離范圍上限以下的小分子，簡單直接。由于只是去除小分子，柱高10cm以上即可。整個過程一般可于數(shù)分鐘至半小時完成。Sephadex G25系列介質專為蛋白質脫鹽而設計，預裝柱HiTrap Desalting（5ml）可用針筒操作。HiPrep Desalting(26ml)可在數(shù)分鐘為多至10ml樣品脫鹽。使用凝膠過濾介質Sepharose 4FF純化疫苗，去除培養(yǎng)基中的雜蛋白，處理量可大于床體積10%。柱高一般4070cm，整個過程約半至一小時。目前使用此法生產的疫苗品種有乙肝、狂犬、出血熱、流感、肺結核、小兒麻痹疫苗等。分子量較小的疫苗可使用Sephacryl S500HR，如甲肝疫苗等。中國藥典從2000年版起要求抗生素頭孢曲松鈉需要找出聚合物占產品的白分比，規(guī)定使用Sephadex G10凝膠過濾法測定。SORRCE 15 Sepharose XL，SOURCE 15Q，STREAMLINE Q，Sephacryl S500，Plasmidselect在下游純化中,可應用不同層析技術在純化生物分子的同時,去除各種污染物?！獌榷舅貎榷舅赜址Q熱原。含脂肪A、糖類和蛋白，是帶負電的復合大分子。內毒素的脂肪A部份有很強的疏水性。但在高鹽下會凝集，無法上疏水層析。利用疏水層析試驗盒（17134901）可選擇結合目標蛋白的介質而去除內毒素。內毒素與陰離子交換介質Q或DEAE Sepharose Fast Flow有較強結合?？稍谙疵撃繕说鞍缀笥酶啕}緩沖液或NaOH去除。利用CNBr或NHS Sepharose FF可偶聯(lián)內毒素底物如LAL，PMB，自動成親合層析介質結合內毒素。內毒素經常是多聚體，凝膠過濾層析可有效地將之去除?！鞍字械暮怂岽罅亢怂嵩黾訕颖攫ざ龋顓^(qū)帶擴張，反壓增加，降低分辨率和流速。藥審和食檢對核酸含量也有嚴格限制。胞內表達蛋白的核酸問題尤其嚴重。核酸帶陰電荷，在初步純化時利用陽離子交換介質如STREAMLINESP，SP Sepharose Big Beads,SP或CM Sepharose FF,SP SepharoseXL結合目標蛋白，可除去大量核酸。核酸在高鹽下會和蛋白解離,疏水層析介質很適合用來結合目標蛋白,在純化蛋白的同時去除核酸。利用核酸酶將核酸切成小片斷,用凝膠過濾做精細純化時便很容易去除了?！《竞臀⑸锊《竞臀⑸锟沙蔀椴≡?應盡量減除。結合不同層析技術，使用注射用水，用NaOH定期進行儀器和凝膠的在位消毒和在位清洗，皆可避免污染物增加。病毒大都有脂外殼。可用與目標蛋白電荷相反的S/D（solvent/detergent)處理，使病毒失活，如Triton和Tween。再用適當?shù)碾x子交換介質如CM Sepharose FF結合目標蛋白，去除S/D。其它污染物可以改變pH和離子強度使其從目標分子中解離或失活，凝膠過濾介質Superdex及多種吸附性介質，SOURCE都是很好的精細純化介質,可去除多種微量污染
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