農(nóng)用微生物菌劑國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)-資料下載頁(yè)
2025-06-06 20:04本頁(yè)面
【正文】 中)，靜置20 min，在旋轉(zhuǎn)式搖床上200 r/min充分振蕩30 min，即得到1101稀釋度的菌懸液。，充分振蕩搖勻，得到1102稀釋度的菌懸液，依此方法制成1101101105……稀釋度的菌懸液（每個(gè)稀釋度應(yīng)更換無(wú)菌移液管）?！〖訕舆x擇適宜的5個(gè)連續(xù)稀釋度， mL， mL無(wú)菌培養(yǎng)基的螺口試管中，每一稀釋度重復(fù)接5支試管（不同稀釋度間更換無(wú)菌移液管），同時(shí)用無(wú)菌培養(yǎng)液作對(duì)照?！∨囵B(yǎng)接種后立即擰緊塑料帽并搖勻，將接種好的試管放到適宜的條件下培養(yǎng)?！∮?jì)算根據(jù)各稀釋系列試管中有無(wú)待測(cè)微生物生長(zhǎng)或其生理反應(yīng)的正或負(fù)得出數(shù)量指標(biāo)，并在相應(yīng)的MPN統(tǒng)計(jì)表中查出近似值（見(jiàn)表C1），即可計(jì)算出待測(cè)樣品的有效活菌數(shù)，以億個(gè)/mL或億個(gè)/g表示。計(jì)算方法：1mL（g）樣品中的有效活菌數(shù)=菌數(shù)近似值數(shù)量指標(biāo)第一位數(shù)的稀釋倍數(shù) 計(jì)數(shù)規(guī)則在稀釋系列中必須最后一個(gè)稀釋度所有重復(fù)間都沒(méi)有微生物生長(zhǎng)。確定數(shù)量指標(biāo)系取稀釋系列中所有重復(fù)都有生長(zhǎng)(或是正反應(yīng))的最高稀釋度為數(shù)量指標(biāo)的第一位數(shù)字，總共取三個(gè)連續(xù)稀釋管的結(jié)果查表?！≡谌?支試管中均出現(xiàn)生長(zhǎng)的稀釋度中，把出現(xiàn)生長(zhǎng)的稀釋度倍數(shù)最高的那一級(jí)放入數(shù)列。例如：為55300時(shí)，則取530數(shù)列； 在全部5支試管中均不出現(xiàn)生長(zhǎng)的稀釋度中，把稀釋度倍數(shù)最低的那一級(jí)放入數(shù)列。例如：為53000時(shí)，則取530數(shù)列； 如果應(yīng)用上述兩條規(guī)則，會(huì)出現(xiàn)采用如55430這樣的4個(gè)等級(jí)的稀釋度的情況。此時(shí)，可先取前面的543數(shù)列，后取430數(shù)列，分別求出lgMPN，然后算出其真數(shù)的平均值。在此列中，+1（后一數(shù)列與前一數(shù)列相應(yīng)稀釋了10倍，故要加1進(jìn)行校正），（+）/2=，所以MPN=。 MPN，lgMPN表陽(yáng)性試管數(shù)MPN（相當(dāng)于第一稀釋管1毫升）LgMPN陽(yáng)性試管數(shù)MPN（相當(dāng)于第一稀釋管1毫升）LgMPN第一稀釋管第二稀釋管第三稀釋管第一稀釋管第二稀釋管第三稀釋管0000500010501100510110511200520201521210522220530300531301532310540320541400542401543410550411551420552421553430554555附 錄 D (略)農(nóng)業(yè)專用微生物菌劑：微生物肥料實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基技術(shù)條件（NY/T 11142006）1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了微生物肥料實(shí)驗(yàn)室使用的培養(yǎng)基技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于微生物肥料產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)、菌種培養(yǎng)與保藏用培養(yǎng)基的制備。2 規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T 肥料中糞大腸菌群的測(cè)定NY 5272002 光合細(xì)菌菌劑3 術(shù)語(yǔ)和定義培養(yǎng)基 medium由人工配制的適合微生物生長(zhǎng)、代謝、繁殖和保存的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。4 培養(yǎng)基制備流程圖（略）5 培養(yǎng)基選用原則 含有滿足所培養(yǎng)的微生物生長(zhǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。 各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)要有合適的比例和濃度。 有合適的pH范圍和一定的緩沖pH能力?！∮幸欢ǖ难趸€原電位和合適的滲透壓?！?duì)于特殊用途的培養(yǎng)基，除遵循以上原則外，還應(yīng)滿足以下要求： 在選擇培養(yǎng)基中，應(yīng)加入利于目的微生物生長(zhǎng)而抑制其它微生物生長(zhǎng)的化學(xué)物質(zhì)。 菌種保藏培養(yǎng)基選用原則 對(duì)于產(chǎn)芽孢或孢子的菌種保藏培養(yǎng)基應(yīng)以易產(chǎn)生芽孢或孢子為原則?！?duì)于自養(yǎng)微生物的菌種保藏培養(yǎng)基應(yīng)只使用無(wú)機(jī)鹽類，不使用有機(jī)物?！?duì)能利用無(wú)機(jī)氮源的微生物，其菌種保藏培養(yǎng)基中不宜使用有機(jī)氮源?！?duì)營(yíng)養(yǎng)缺陷型微生物，其菌種保藏培養(yǎng)基中必須含有該缺陷所需的物質(zhì)?！?duì)耐某種藥物的微生物，其菌種保藏培養(yǎng)基中應(yīng)含有一定濃度的該種藥物。6 要求 材料 用于配制培養(yǎng)基的化學(xué)試劑純度至少為化學(xué)純?！≡噭┏霈F(xiàn)顏色改變、沉淀、混濁、吸潮結(jié)塊的現(xiàn)象時(shí)，不宜使用?！√烊辉牧蠎?yīng)質(zhì)量穩(wěn)定，未發(fā)生霉變、生蟲(chóng)和變質(zhì)。 瓊脂凝固后應(yīng)具有良好的透明度。 器皿 配制試劑所用的器皿應(yīng)潔凈?！∈⒀b培養(yǎng)基的器皿應(yīng)由對(duì)微生物無(wú)毒害并耐高溫的材料制成?！〔牧闲杓訜崛芙鈺r(shí)，可選用玻璃容器、搪瓷缸和不銹鋼容器等，禁用銅制、鋁制和鐵制容器?！∶奕蚬枘z塞 不應(yīng)使用脫脂棉制作棉塞?！∈褂妹奕蚬枘z塞時(shí)，將其長(zhǎng)度的2/3塞入容器內(nèi)。要求松緊適當(dāng)，緊貼管壁?！缇鷷r(shí)，棉塞外要加包牛皮紙或耐高溫透氣塑料薄膜，以防止滅菌時(shí)棉塞受潮或進(jìn)水?！∨囵B(yǎng)基配制 材料稱量 根據(jù)培養(yǎng)基配方，準(zhǔn)確稱取相應(yīng)材料的量。 當(dāng)配方中某種成分微量時(shí)，可預(yù)先將該成分配制成一定濃度的母液，然后按量加入。母液須低溫保存。 材料溶解 不溶于水的組分應(yīng)在所需的溶劑中溶解后，再加入到培養(yǎng)基中?！》侨苄越M分，如CaCO3,應(yīng)最后加入。 易形成沉淀的組分應(yīng)分別溶解。 不易溶解的組分應(yīng)做預(yù)處理。加熱溶解過(guò)程中一旦出現(xiàn)焦化現(xiàn)象時(shí)應(yīng)棄用?！∨囵B(yǎng)基中含有指示劑或有顏色的試劑時(shí)，應(yīng)在培養(yǎng)基pH調(diào)節(jié)好之后再加入?！H測(cè)定與調(diào)節(jié) 用精密pH試紙或酸度計(jì)測(cè)定培養(yǎng)基的pH。 培養(yǎng)基的pH用稀酸或稀堿溶液調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)過(guò)程中不可用酸堿溶液反復(fù)調(diào)節(jié)。 分裝裝入三角瓶的培養(yǎng)基體積不應(yīng)超過(guò)其容量的1/2，裝入試管的培養(yǎng)基體積為其容量的1/4～1/5。分裝過(guò)程中防止培養(yǎng)基粘附在瓶口或管口?！缇「邏赫羝麥缇邏赫羝麥缇刂频臈l件為121℃、維持30min。當(dāng)培養(yǎng)基中含有不耐高溫的組分時(shí)，可采用115℃、維持15min～30min?！∵^(guò)濾除菌在無(wú)菌條件下，將待除菌溶液經(jīng)濾膜為φ≦，達(dá)到除菌的目的。適用于易受高溫破壞、失活的物質(zhì)的滅菌，如維生素?！「蔁釡缇鷮⒋郎缇钠髅?，用紙包好或放在特定的容器內(nèi)，置于烘箱中，在160℃左右保持2h。適用于培養(yǎng)皿等玻璃器皿的滅菌。 平板和斜面的制備在無(wú)菌條件下把冷卻至45℃左右的培養(yǎng)基倒入無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，平板厚度范圍控制在3mm～5mm。制備的斜面長(zhǎng)度不超過(guò)試管長(zhǎng)度的2/5?！∨囵B(yǎng)基合格檢驗(yàn) 檢查固體培養(yǎng)基濕度。培養(yǎng)基冷凝水過(guò)多或干燥出現(xiàn)裂痕時(shí)，均不能使用。 隨機(jī)抽取已滅過(guò)菌的培養(yǎng)基放入28℃～30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h～48h，確定無(wú)菌生長(zhǎng)后方可使用?！∨囵B(yǎng)基存放培養(yǎng)基應(yīng)放在冰箱4℃ ～8℃保存。，合格后方可使用。7 微生物肥料常用培養(yǎng)基配方、配制要點(diǎn)和用途微生物肥料常用培養(yǎng)基配方、配制要點(diǎn)和用途參見(jiàn)附錄A。
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