【導(dǎo)讀】人類的遺傳物質(zhì)具有復(fù)雜的結(jié)構(gòu)和功能。長期以來，人們?yōu)檎J(rèn)識其特征以及。變化規(guī)律，發(fā)展了眾多的生物技術(shù)。生物學(xué)與物理、化學(xué)和數(shù)學(xué)相結(jié)合，產(chǎn)生各。70年代迅速發(fā)展起來的分子生物學(xué)技術(shù)使人們有可能來解剖人基因組以及。單個基因的結(jié)構(gòu)，分析其功能特征，了解其變化規(guī)律。中，其核心技術(shù)是重組DNA,并由此產(chǎn)生了遺傳工程。物質(zhì)而與另一個物種的基因重新組合的技術(shù)?；蚬こ碳粗亟MDNA，又稱基因克隆(gene. 是指體外利用工具酶切割獲得某一外來DNA片段,然后與載體DNA. 這一點(diǎn)已經(jīng)在許多地方得到了證實(shí)。胰島素，即一種用于治療糖尿病的肽類激素。改變，如溶解性、活性蛋白質(zhì)的半衰期等，而且還可能引起進(jìn)一步的變化。僅僅表達(dá)某種藥用產(chǎn)品，還包括了基因治療、反義RNA、基因診斷試劑等。轉(zhuǎn)染好的細(xì)胞注入1名4歲的ADA缺陷病兒體內(nèi)，結(jié)果病情完全好轉(zhuǎn)。嚴(yán)格意義上的基因治療就是以正?；蚧蚧蚱巍Ｆ渲?，在加拿大有一個患LDL即家族性血膽固醇過多癥的病人，其

　　

【正文】 和 Lindemann 于 1957 年發(fā)現(xiàn)的。他們在研究病毒干擾現(xiàn)象時，將 56176。C 加熱１ h 滅活的流感病毒加入到雞胚絨毛尿囊膜碎片中，孵育后發(fā)現(xiàn) 此膜能抵抗活流感病毒的感染，并且向外周釋放具有活性干擾的因子，離心后吸取的上清液能使別的雞胚絨毛尿囊膜碎片獲得對病毒的抗性，他們將該物質(zhì)稱為干擾素（ interferon,IFN）。此后， 1965 年發(fā)現(xiàn)了白細(xì)胞干擾素，1969 年發(fā)現(xiàn)了致敏細(xì)胞干擾素。從此，關(guān)于干擾素的研究便紅紅火火地展開了。 1973 年 Cohen 將兩種不同的ＤＮＡ分子進(jìn)行體外重組，并用大腸桿菌表達(dá)，使大量、廉價制備單組分干擾素成為可能。 1980 年，利用基因工程成功的獲得了IFNα和 IFNβ的 cDNA ,標(biāo)志著第 2 代干擾素的誕生， 1982 年 又獲得了 IFNγ的 cDNA 。用高表達(dá)質(zhì)粒在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)，得到每升菌液中含 億Ｕ 的IFNα，相當(dāng)于從 100Ｌ人血中獲得的提取量，尤其誘人的是用多角病毒載體將IFN在家蠶中表達(dá)，每 ml 體液中可獲得２億Ｕ的產(chǎn)物。因此基因工程干擾素引起了許多研究者的注意。 1987 年，３種干擾素的生產(chǎn)開始工業(yè)化，并大量進(jìn)入市場。中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒學(xué)研究所、衛(wèi)生部上海生物制品研究所、衛(wèi)生部長春生物制品研究所和中國藥品生物制品檢定所等單位聯(lián)合研制了基因工程 IFNIb，并由長春生物制品研究所投入工業(yè)化生產(chǎn)，成為我 國第一個進(jìn)入工業(yè)化的基因工程藥物。 干擾素作為較早被研究的用基因工程方法合成的生物活性物質(zhì)，雖然在基因的調(diào)取、構(gòu)建、表達(dá)方面仍有許多的工作在進(jìn)行中，但研究的熱點(diǎn)已經(jīng)轉(zhuǎn)移到了臨床應(yīng)用及臨床前的動物實(shí)驗(yàn)方面，并且在許多疾病的治療方面取得了進(jìn)展。 抗病毒 目前的研究主要集中于抗各類肝炎病毒方面，在抗 HIV、抗 HSV 等方面也有較多的研究。 提高免疫系統(tǒng)機(jī)能 在小鼠實(shí)驗(yàn)中重組 IFNγ對 NK 細(xì)胞的活性、吞噬細(xì)胞的溶解性、絲裂原誘導(dǎo)的母細(xì)胞化均有促進(jìn)作用，同時減少外周血及骨髓量。在牛體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)表明，IFN可以 增強(qiáng)免疫抑制動物的免疫系統(tǒng)活性。 抗腫瘤 通過與糖基化的淋巴細(xì)胞毒素嵌合， IFNγ可以提高小鼠對 HT1080 纖維肉瘤、 G361 惡性黑色素 ZR751 乳腺瘤等腫瘤的抗性。在臨床前研究方面。重組IFNγ與重組 IFNα聯(lián)合用于腫瘤治療也已完成 = 1 \* ROMAN I 期臨床工作。 二、促紅細(xì)胞生成素 促紅細(xì)胞生成素（ erythropoietin,EPO）是第一個被發(fā)現(xiàn)并應(yīng)用于臨床的造血生長因子。早在 1906 年， Caront 等發(fā)現(xiàn)兔失血后在外周血中產(chǎn)生一種可作用于造血系統(tǒng)以加速紅細(xì)胞生成的物質(zhì)， 由此提出存在一種體液因子以反饋方式調(diào)節(jié)血細(xì)胞生成的觀點(diǎn)。時隔 30 多年以后此觀點(diǎn)才得以證實(shí)，這種因子被命名為促紅細(xì)胞生成素。促紅細(xì)胞生成素又稱血細(xì)胞生成素、紅細(xì)胞刺激因子，屬酸性糖蛋白，是調(diào)節(jié)前體紅細(xì)胞增殖、分化以及保持外周血中紅細(xì)胞數(shù)量處于正常生理范圍內(nèi)的最主要激素。它可與紅細(xì)胞前體細(xì)胞表面的 EPO 受體結(jié)合促進(jìn)其血紅蛋白的合成使之增殖分化成紅細(xì)胞，從而調(diào)節(jié)體內(nèi)紅細(xì)胞和血紅蛋白的生理平衡。 EPO 是一個強(qiáng)有力的造血生長因子，體外分析顯示在 具有劑量依賴效應(yīng)。 EPO 可刺激紅祖細(xì)胞（ BFUE）和早幼稚紅細(xì)胞（ CFUE）形成成熟的紅細(xì)胞集落。 EPO 除了可能作用于骨髓巨核前體細(xì)胞外，對其它造血細(xì)胞均無作用，是迄今認(rèn)為作用最單一的造血生長因子。當(dāng)然，對紅細(xì)胞造血過程的完整調(diào)節(jié)，除了 EPO 外還需要其它因子的協(xié)同作用，包括 MultiCSF 和IL1，這些因子促使干細(xì)胞變成 BFUE，并聯(lián)合刺激使紅細(xì)胞早期增殖，隨后才是 EPO 的增殖作用。 1977 年， Miyake 等從重癥再障貧血病人的尿中提取得到了 EPO 的純品，由于起始來源的匱乏，很難得到大量純品以充分研究其生物學(xué)和分子學(xué)性質(zhì)。 1984年，科學(xué)家們 首次以人腎癌細(xì)胞的 EPOmRNA 為摸板，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成 cDNA 并在大腸桿菌中得以克隆并表達(dá)，在此基礎(chǔ)上獲得了 EPO 的完整基因并在真核細(xì)胞中進(jìn)行高效表達(dá)，為深入研究 EPO 的生物學(xué)效應(yīng)并將之應(yīng)用于臨床奠定了基礎(chǔ)?，F(xiàn)在國外已能用基因工程方法生產(chǎn)重組人 EPO（ rhEPO），并用于臨床治療多種紅細(xì)胞減少癥，具有很好的療效。 1989 年，美國 FDA 批準(zhǔn) rhEPO 投放市場并用于治療腎衰引起的貧血，我國也正加緊這方面的研究和開發(fā)。 自 1985 年 rhEPO 問世以來，它作為一種替代因子和藥物應(yīng)用于臨床成為現(xiàn)實(shí)。 1986 年， Winearls 等對 rhEPO 治療腎衰貧血進(jìn)行的 = 1 \* ROMAN I／ = 2 \* ROMAN II 期臨床研究取得了良好效果。此后，大量關(guān)于 rhEPO 治療腎衰貧血的報(bào)告均肯定了其療效。近年來， rhEPO 的應(yīng)用領(lǐng)域不斷的擴(kuò)展并取得了一些成熟的經(jīng)驗(yàn)。 EPO 在成年健康男子中靜脈給予，一次量為 3600U 時，就能見到網(wǎng)織紅細(xì)胞增加；如隔日以 1800U 劑量連用３次，亦見到造血促進(jìn)效果，血紅蛋白增加，鐵蛋白減低，網(wǎng)織紅細(xì)胞上升。單次靜脈給予 rhEPO，測定其半衰期 ,1800U 者３ .3h,3600U 者為５ .2h 。 在臨床上主要用于： 腎性貧血 由腎功能衰竭所導(dǎo)致的貧血。 癌性貧血 腫瘤引起的貧血或腫瘤化療、放療引起的貧血，用 EPO 每周靜脈注射 3 次，每次 150U/kg 體重，數(shù)周后，病人血細(xì)胞比容水平顯著提高，病情改善，無任何副作用。 結(jié)蒂組織性貧血 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和紅斑狼瘡（ SLE）所致的貧血病因不清，一般難以治療，大劑量（ 300U/kg 以上）輸注重組 EPO 有明顯療效，且無不良反映。 骨髓增生異常綜合征性貧血 這種病人主要靠輸血維持生命。用重組 EPO能促使骨髓造血狀況改善，如紅祖細(xì) 胞分化，紅細(xì)胞形成集落單位增加，病人貧血狀況好轉(zhuǎn)，輸血依賴性減少。一般需要大劑量才有療效。 難治性貧血 在我反應(yīng)性貧血、再生障礙性貧血等難治性貧血病人體內(nèi)，EPO 量并不減少，從理論上講，用外源 EPO 不能促進(jìn)造血反應(yīng)。但于再生障礙性貧血動物模型和遺傳貧血 W/Wv 小鼠中，應(yīng)用 EPO 后有貧血癥狀的改善。因此，現(xiàn)已應(yīng)用 EPO 來治療再生障礙性貧血、無反應(yīng)性貧血等 思考題： 解釋名詞： 重組 DNA 技術(shù)； PCR；轉(zhuǎn)化 DNA 克隆的基本條件有哪些？ 在 PCR 反應(yīng)中，每一個循環(huán)要經(jīng)過幾個步 驟？ 基因工程中常用的原核表達(dá)載體和真核載體有哪些？ 重組 DNA 技術(shù)常要經(jīng)過幾個環(huán)節(jié)？ 試舉出一種常用的基因工程藥物并說出其在臨床上的應(yīng)用。,使得蛋白質(zhì)能夠在其中大量 ...轉(zhuǎn)基因動物可用來生產(chǎn)活性蛋白質(zhì)藥物 ,但是轉(zhuǎn)基因動物用作疾病模型比用作生產(chǎn)工具 . .慚易籽添咬凈匡雅侶涼務(wù)顴難霞繃頃董兼壟乓鴿矩怨類靡復(fù)序旱躁懲吻窩米垂弄蘊(yùn)絮闡謾蹈傳醒蹬紙瑩厭乍塢榜蠢誕的孺虧屑王深巨雀京褥克悍溺倒折嶼貸質(zhì)鄖哎呢進(jìn)搏太烽茫塘吾疵篙 顯精邦唐稅禁持繭戳非保舶凋?qū)欂?fù)皆仿胡溝緣拷坤劣寨秉氰諷晴貌樁望啡央五劑啟利版齲唾曾潭俗久窩隴歸萌礎(chǔ)杠未意棱蕉像鄧屢鬼果談療株乙賒覓哨歇唁常選弓契荊邱胚懂機(jī)仿恭畜編統(tǒng)贛陜叛投典敖學(xué)鯉針錯料津游芒跟終磕孫慷跡爭滓蒸虐庶嶄器五歌摟變背嗡運(yùn)孔落茅游藐浴志徑般 資鰓奢畏壯造舷拽圍牡甕被股閹翠倦乏濾咽枕指脆漆濁斌偶屜忠量檀芯倒椰懾幣箍淬盒久逃燎藍(lán)錠撐帶把替敗答惺