【正文】 m1倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的大試管或燒 瓶中(內(nèi)有倒管)，以無菌操作各加入己充分混勻的水樣100m1。在10支裝有已滅菌的5mL三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管中（內(nèi)有倒管），以無菌操作加入充分混勻的水樣10m1, 混勻后置于37℃恒溫箱培養(yǎng)24h。 ②平板分離：經(jīng)初發(fā)酵試驗培養(yǎng)24h后。發(fā)酵試升頗色變黃為產(chǎn)酸，小玻璃倒管內(nèi)有氣泡為產(chǎn)氣，將產(chǎn)酸產(chǎn)氣發(fā)酵管，分別用接種環(huán)劃線接種于品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基或伊紅美藍培養(yǎng)基上，置37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)18—2 4h，挑選符合下列特征的菌落，取苗落的一小部分進行涂片、革蘭氏染色、鏡檢。 品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上的菌落； 紫紅色，具有金屬光澤的菌落: 深紅色，不帶或略帶金屬光澤的菌落； 淡紅色，中心色較深的菌落。 伊紅美蘭培養(yǎng)基上的菌落 深紫黑色，具有金屬光澤的菌落: 紫黑色，不帶或略帶金屬光澤的菌落。 淡紫紅色，中心色較深的菌落。 ③復(fù)發(fā)酵試驗:上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無芽胞的桿菌，則挑選該菌落的 另一部分接種于普通濃度乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中(內(nèi)有倒管)，每管可接種分離自同一初發(fā)酵 管(瓶)的最典型菌落} 1—3個，然后置于37℃恒箱中培養(yǎng)24h有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，即證實有大腸菌群菌存在。根據(jù)證實有大腸菌群存在的陽性管(瓶)數(shù)查表81，報告每升水中的大腸菌群數(shù)。 (2)水源水 ①將水樣作1:10稀釋。 ②于各裝有5mL三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的五個試管中〔內(nèi)有倒管〕，各加10m1水 樣。于各裝有10mL乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的五個試管中〔內(nèi)有倒管〕，各加1 ml水樣。于各裝 有l(wèi) mL乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的五個試管中(內(nèi)有倒管)，各加入]1ml 1:10稀釋的水樣。共計15管，一個稀釋度，將各管充分混勻，置于37℃恒溫箱培養(yǎng)24h。 ③平板分離和復(fù)發(fā)酵試驗的檢驗步驟同(1)“生活飲用水”檢驗方法。 ④根據(jù)證實總大腸菌群存在的陽性管數(shù)查表，即求得每l00mL水樣中存在的總大腸菌群數(shù)。 (3)地表水和廢水 ①地表水中較清潔水的初發(fā)酵試驗步驟同（2）飲用水源水檢驗方法。有嚴(yán)重污染的地表水和廢水初發(fā)酵試驗的接種水樣應(yīng)作1:l0， l : 100, 1:1000或更高的稀釋，檢驗步驟同(2)飲用水源水檢驗方法。 ②如果接種的水樣量不足10mL，1mL，而是較低的或較高的三個濃度的水樣量，也可查表求得MPN指數(shù)，在經(jīng)下面的公式換算成每100mL的MPN值。 MPN值=MPN指數(shù) 我國目前1L為報告單位, MPN值再乘10，即為IL水樣中的總大腸菌群數(shù)。圖81 總大腸菌群檢驗流程圖 、評分標(biāo)準(zhǔn)序號 考核內(nèi)容 配分評分標(biāo)準(zhǔn) 考核記錄 扣分 得分1培養(yǎng)基的制備 20 出現(xiàn)一次操作錯誤扣5分 2生活飲用水的測定 40 出現(xiàn)一次操作錯誤扣5分 3水源水的測定 40 出現(xiàn)一次操作錯誤扣5分 4分?jǐn)?shù)總計 100 水中堿度的測定1. 實訓(xùn)課時：3 2. 實訓(xùn)內(nèi)容及目的 水的堿度是指水中所含能與強酸定量作用的物質(zhì)總量: 水中堿度的來源較多，地表水的堿度基木上是碳酸鹽、重碳酸鹽及氫氧化物含量的總堿度的測定值也包含它們所起的作用。廢水及其他復(fù)雜體系的水體中，還含有有機堿類、金屬水解性鹽類等。均為堿度組成部分。在這些情況下，堿度就成為一種水的綜合性指標(biāo)，代表能被強酸滴定物質(zhì)的總和。 堿度的測定值因使用的指示劑終點pH值不同而有很人的差異，只有當(dāng)試樣中的化學(xué)組成已知時，才能解釋為具體的物質(zhì)。對于天然水和未污染的地表水，為酚酞堿度，~，為甲基橙堿度。通過計算，可求出相應(yīng)的碳酸鹽、重碳酸鹽和氫氧根離子的含量。對于廢水、污水，則山于組分復(fù)雜，這種計算無實際意義，往往需要根據(jù)水中物質(zhì)的組分確定其與酸作用達到終點時的pH值。然后，用酸滴定以便獲得分析者感興趣的參數(shù)，并作出解釋。 堿度指標(biāo)常用于評價水體的緩沖能力及金屬在其中的溶解性和毒性，是對水和廢水處 理過程控制的判斷性指標(biāo)。若堿度是由過量的堿金屬鹽類所形成，則堿度又是確定這種水是否適宜于灌溉的重要依據(jù)。 用標(biāo)準(zhǔn)酸滴定水中堿度是各種方法的基礎(chǔ)。有兩種常用的方法，即酸堿指示劑滴定法和電位滴定法。電位滴定法根據(jù)電位滴定曲線在終點時的突躍，確定特定pH值下的堿度， 它不受水樣濁度、色度的影響，適用范圍較廣。用指示劑判斷滴定終點的方法簡便快速， 適用于控制性試驗及例行分析。二法均可根據(jù)需要和條件選用。樣品采集后應(yīng)在40C保存，分析前不應(yīng)打開瓶塞，不能過濾、稀釋或濃縮。樣品應(yīng)于采集后的當(dāng)天進行分析，特別是當(dāng)樣品中含有可水解鹽類或含有可氧化態(tài)陽離子時，應(yīng)及時分析。 水樣用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液滴定至規(guī)定的pH值，其終點可由加入的酸堿指示劑在該pH值時顏色的變化來判斷。 當(dāng)?shù)味ㄖ练犹甘緞┯杉t色變?yōu)闊o色時，指示水中氫氧根離子(OH)(CO23)均被轉(zhuǎn)為重碳酸鹽( HC03 )，反應(yīng)如下: OH_ +H+ → H2O CO23 + H+ → HC03 當(dāng)?shù)味ㄖ良谆戎甘緞┯山埸S色變成枯紅色時，溶液灼pH值為}.4 .4~，指示水中的重碳酸鹽(包括原有的和由碳酸鹽轉(zhuǎn)化成的)已被中和，反應(yīng)如下: HC0—3 +H+ →H2O+CO2 ↑ 根據(jù)上述兩個終點到達時所消耗的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的量，可以計算出水中碳酸鹽、重碳酸鹽及總堿度。 上述計算方法不適用于污水及復(fù)雜體系中碳酸鹽和重碳酸鹽的計算。 水樣渾濁、有色均干擾測定，遇此情況，可用電位滴定法測定。能使指示劑褪色的氧化還原性物質(zhì)也干擾測定。例如水樣中余氯可破壞指示劑(含余氯時，可加入1~2滴 )。 此法適用于不含有上述干擾物質(zhì)的水樣。曾取地表水水樣15個進行測定，~，%一l .40%。%一102% ①酸式滴定管，25mol。 ②錐形瓶，250mol。 無二氧化碳水:用子制備標(biāo)準(zhǔn)溶液及稀釋用的蒸餾水或去離子水，臨用前煮沸 15min，冷卻至室溫。，電導(dǎo)率小于2 uS/cm 酚酞指示液: g酚酞溶于50m1 95%乙醇中，用水稀釋至l 00mI。 甲基橙指示劑:。 碳酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(1/): (于250℃烘干4h)的 基準(zhǔn)試劑無水碳酸鈉( Na2C03 ) ,溶于少量無二氧化碳水中，移入1 000ml容量瓶中，用水 稀釋至標(biāo)線，搖勻。貯于聚乙烯瓶中，保存時間不要超過一周。 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（）:（p=），并用蒸餾水稀釋至1000m1,。其準(zhǔn)確濃度按下法標(biāo)定: ，加無二氧化碳水稀釋下約l 00ml，加入3滴甲基橙指示液，用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至由桔黃色剛變成桔紅色，記錄鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液用量。按下式計算其準(zhǔn)確濃度: C= 式中：C—鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(mol/l)。 V一鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液用量(ml) 1分取100ml水樣于250m1錐形瓶中，加入4滴酚酞指示劑，搖勻。當(dāng)溶液呈紅色時，用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至剛剛褪至無色，記錄鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液用量。若加酚酞指示劑后溶液無色，則不需用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，并按著進行②項操作。 2向上述錐形瓶中加入3滴甲基橙指示劑，搖勻。繼續(xù)用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液由桔黃色剛剛變?yōu)榻奂t色為止。記錄鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液用量。 對于多數(shù)天然水樣，堿性化合物在水中所產(chǎn)生的堿度，有五種情形。為說明方便，另 以酚酞作指示劑時，滴定至顏色變化所消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的量為PmL，以甲基橙作指示劑 時鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液用量為MmI，則鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液總消耗量為T=M+P 第一種情形，P =T或M=0時: P代表全部氫氧化物及碳酸鹽的一半，由于M=0，表示不含有碳酸鹽，亦不含重碳酸鹽。因此，P=T=氫氧化物: 第二種情形，Pl/2 T時: 說明M0，有碳酸鹽存在，且碳酸鹽=2M=2 (TP )。而且由于PM,=T2 （TP） =2PT。 第三種情形，P=1/2T，即P=M時: M代表碳酸鹽的一半，說明水中僅有碳酸鹽。碳酸鹽=2P=2M=T。 第四種情形，P } 112T時: 此時，MP, 碳酸鹽==T一P 第五種情形，p=0時: 此時，水中只有重碳酸鹽存在。重碳酸鹽=T=M 以上五種情形的堿度，示于表319中。 按下述公式計算各種情況下總堿度、碳酸鹽、重碳酸鹽的含量。 (1) 總堿度〔以Ca0計，Mg/L〕=*)(+ 總堿度(以CaCO3計，mgl/L)=*)(+ 式中:C一一鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(mo1/L): (l/2Ca0)摩爾質(zhì)量(g/mol) ——碳酸鈣(l/2CaCO3 )摩爾質(zhì)量（g/mol ) . (2)當(dāng)P=T時，M=0 碳酸鹽(CO32)=0 重碳酸鹽=（HC0—3）=0 (3)當(dāng)P1/2T 時 碳酸鹽堿度(以Ca0計，mg/L)=*)(?1000 碳酸鹽堿度(以CaCO3計，mg/L)=*)(?1000 碳酸鹽堿度(1/2 CO32－，mol/L)=VPTC)(?1000 重碳酸鹽(HC03－)=0 (4)當(dāng)P二1/2T時，P =M 碳酸鹽堿度(以CaO計，mg/L)=1000 碳酸鹽堿度(以CaCO3計，mg/l) =1000 碳酸鹽堿度(1/2 CO32－mol/l)=1000VCP 重碳酸鹽(HC03－)=0 (5)當(dāng)P1/2T時 碳酸鹽堿度(以CaO計，mg/l)= 1000 碳酸鹽堿度〔以CaCO3,mg/l〕=1000 碳酸鹽堿度(1/2CO3 ,mol/l)= 1000VCP 重碳酸鹽堿度(以Ga0計，mg/L)= )2(?1000 重碳酸鹽堿度(以CaCO3計，mg/l.)= )2(?1000 重碳酸盆堿度(HCO3，mo1/L)= VPTC)2(?1000 (6)當(dāng)P=O時 碳酸鹽(CO32－)=0 重碳酸鹽堿度(以CaO計，rng/L)= 1000 重碳酸鹽堿度(以CaCO3計，mg/L )= 1000 重碳酸鹽堿度(HCO3，mol/L)= 1000VCM 五個實驗室對人工配制的統(tǒng)一標(biāo)樣進行方法驗證的結(jié)果如下:,時，%。% 。%。% %。 1若水樣中含有游離二氧化碳，則不存在碳酸鹽，可直接以甲基橙作指示劑進行滴定。 2當(dāng)水樣中總堿度小于20rng/L時， mol/L酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，或改用l0ml 容量的微量滴定管，以提高測定精度。 、評分標(biāo)準(zhǔn)序號 考核內(nèi)容 配分 評分標(biāo)準(zhǔn) 考核記錄 扣分 得分 1 樣品保存 10 出現(xiàn)一次操作錯誤扣5分 2 酸堿指示劑滴定 40 出現(xiàn)一次操作錯誤扣5分 3 樣品測定 50 出現(xiàn)一次操作錯誤扣5分 4 分?jǐn)?shù)總計 100 26 / 26