【正文】 ? 正協(xié)同效應(yīng)的變構(gòu)酶其速度 底物濃度曲線呈 S形，負(fù)協(xié)同效應(yīng)的變構(gòu)酶其速度 底物濃度曲線為類似雙曲線。 ? 由于 變構(gòu)酶動(dòng)力學(xué) 不符合 米氏酶 的動(dòng)力學(xué)，所以當(dāng)反應(yīng)速度達(dá)到最大速度一半時(shí)的底物的濃度，不能用 Km表示，而代之以 。 ? 非共價(jià)鍵 特異結(jié)合，可以改變調(diào)節(jié)亞基的構(gòu)象，進(jìn)而改變催化亞基的構(gòu)象，從而改變酶活性。凡使酶活性增強(qiáng)的變構(gòu)劑稱 變構(gòu)激活劑 (allosteric activitor)，它能使上述 S型曲線左移，飽和量的變構(gòu)激活劑可將 S形曲線轉(zhuǎn)變?yōu)榫匦坞p曲線。凡使酶活性減弱的變構(gòu)劑稱 變構(gòu)抑制劑(allosteric inhibitor)，能使 S形曲線右移。 變構(gòu)激活劑 使 S型曲線左移， 變構(gòu)抑制劑 使 S形曲線右移。 ? 分子 與 酶 結(jié)合之后，影響另一相同的效應(yīng)物分子與酶的另一部位結(jié)合稱為同促效應(yīng)； ? 若一分子效應(yīng)物和酶結(jié)合之后，影響到另一不同的效應(yīng)物分子與酶的另一部位結(jié)合則稱為 異促效應(yīng) 變構(gòu)調(diào)節(jié)舉例 R CCc A M P非 活 性 型活 性 型CCRRR（三）生理意義 S形曲線中段 ，底物濃度稍有降低，酶的活性明顯下降，多酶體系催化的代謝通路可因此而被關(guān)閉；反之，底物濃度稍有升高，則酶活性迅速上升，代謝通路又被打開，因此可以通過 細(xì)胞內(nèi)底物濃度的變化 來靈敏地控制代謝速度。 常是代謝通路的終產(chǎn)物，變構(gòu)酶常處于代謝通路的入口，通過 反饋抑制 ，可以及早地調(diào)節(jié)整個(gè)代謝通路，減少不必要的底物消耗。 （三） 酶的共價(jià)修飾調(diào)節(jié) ? 共價(jià)修飾 (covalent modification) 在其他酶的催化下 ， 酶蛋白肽鏈上的一些基團(tuán)可與某種化學(xué)基團(tuán)發(fā)生可逆的共價(jià)結(jié)合 ， 從而改變酶的活性 ， 此過程稱為共價(jià)修飾 。 ? 常見類型 磷酸化與脫磷酸化（最常見） 乙?；兔撘阴；? 甲基化和脫甲基化 腺苷化和脫腺苷化 － SH與－ S－ S互變 酶的磷酸化與脫磷酸化 酶蛋白 Ser Thr Tyr OH 酶蛋白 Ser Thr Tyr O P ATP ADP Pi H2O 蛋白激酶 蛋白磷酸酶 共價(jià)修飾調(diào)節(jié)的特點(diǎn) ①受共價(jià)修飾的酶存在有（高）活性和無（低）活性兩種形式； ②具有級(jí)聯(lián)效應(yīng)； ③是體內(nèi)經(jīng)濟(jì)、有效的快速調(diào)節(jié)方式。 共價(jià)修飾酶通常有 活性 與 非活性 兩種形式，兩種形式之間轉(zhuǎn)換的正、逆反應(yīng)是由不同的酶催化產(chǎn)生。如骨骼肌中的 糖原磷酸化酶 有高活性的磷酸化形式與低活性的脫磷酸化形式兩種，從脫磷酸化形式轉(zhuǎn)化成磷酸化形式是由磷酸化酶 b激酶催化，反之，則是有由磷酸化酶磷酸酶催化。 目前已發(fā)現(xiàn)有幾百種酶被翻譯后都需要進(jìn)行 共價(jià)修飾 ，其中一部分處于 分支途徑 ，對(duì)其代謝流量起調(diào)節(jié)作用的關(guān)鍵酶，屬于這種 酶促共價(jià)修飾系統(tǒng) 。由于這種調(diào)節(jié)的生理意義廣泛，反應(yīng)靈敏，節(jié)約能源，機(jī)制多樣，在體內(nèi)顯得十分靈活，加之它們常受激素甚至神經(jīng)的指令，導(dǎo)致級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)，所以日益引人注目。 級(jí)聯(lián)效應(yīng) 第五節(jié) 酶的活力測(cè)定、酶的制備及 應(yīng)用 一、酶活力的測(cè)定 指酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力，通常用最適條件下酶所催化的化學(xué)反應(yīng)的速度來衡量。 酶促反應(yīng)的速度越快，表示酶的活力越高。反之，則低。 2. 酶活力的表示法 酶活力的大小用 酶活力單位 來表示。 常用的酶活力單位有三種： （ 1） . 國際單位： 在標(biāo)準(zhǔn)條件（ 25℃ 、最適 pH、最適底物濃度）下，酶在 1分鐘內(nèi)轉(zhuǎn)化 1umol底物所需的酶量叫做 1個(gè)酶的活力單位 （ IU）。 這種單位是由國際酶學(xué)委員會(huì)規(guī)定的。 (2). Kat單位： ? 在最適條件下，酶在 1秒鐘內(nèi)轉(zhuǎn)化 1mol底物所需的酶量叫做 1個(gè)酶的活力單位（ 1個(gè) Kat）。 ? 1 Kat = 60 106 IU 這是 1972年由國際酶學(xué)委員會(huì)規(guī)定的一種新單位。 （ 3）自定義的活力單位： 把酶習(xí)慣上或測(cè)定時(shí)使用的反應(yīng)速度的單位定義為酶的活力單位。有的甚至直接用測(cè)得的物理量，如以單位時(shí)間內(nèi)消光值的變化 (DA/t) 表示酶活力單位。 這種方法簡(jiǎn)單方便，省去了許多計(jì)算，但只能進(jìn)行酶活力的相對(duì)比較。 3. 比活力 指每毫克酶蛋白所含的酶活力單位數(shù) 。即 比活力是酶制劑純度的一個(gè)常用指標(biāo)。比活力越大，表示酶越純。 酶活力的測(cè)定方法 分光光度法、熒光法、同位素法、電化 學(xué)法 等 ?要求 ：快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確 ?一般包括兩個(gè)階段： 首先在一定條件下，酶與底物反應(yīng)一段時(shí)間； 再測(cè)定反應(yīng)液中底物或產(chǎn)物的消耗量或生成量。 ?一般經(jīng)如下幾個(gè)步驟： ? 選擇適宜的一定濃度的底物 ? 確定酶促反應(yīng)的條件 ? 將一定量的酶液和底物溶液混合 ? 反應(yīng)到一定時(shí)間（因要測(cè)定酶促反應(yīng)初速度），取出反應(yīng)液終止反應(yīng) ? 測(cè)定產(chǎn)物的生成量。 測(cè)定酶活力時(shí)應(yīng)注意幾點(diǎn) ?（ 1）應(yīng)測(cè)反應(yīng)初速度（ initial velocity or initial speed） ?（ 2）酶的反應(yīng)速度一般用單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)物的增加量來表示。 ?（ 3）測(cè)酶活力時(shí)應(yīng)使反應(yīng)溫度、 pH、離子強(qiáng)度和底物濃度等因素保持恒定。 ?（ 4）測(cè)定酶反應(yīng)速度時(shí)，應(yīng)使[S][E]。 二、酶的制備 工業(yè)上大多采用微生物發(fā)酵法來獲得大量的酶制劑 . 分離純化酶的方法：鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法、吸附法。 三 、酶的分離純化 1．選材：酶含量高的材料 2．破碎細(xì)胞： 機(jī)械破壁，化學(xué)破壁 酶破壁 溫度破壁等 3．抽提： 緩沖液 4．去核酸、去多糖 5．純化： 提取蛋白質(zhì)方法 6．保存： 低溫干燥保存 酶的特殊性，在提純過程中要注意 : ? 1．全部操作在低溫 0～ 4℃ 。 ? 2．在分離提純過程中，不能劇烈攪拌。 ? 3．在提純?nèi)軇┲屑右恍┍Ｗo(hù)劑，如少量EDTA、少量 β巰基乙醇。 ? 4．在分離提純過程中要不斷測(cè)定酶活力和蛋白質(zhì)濃度，從而求得比活力，還要計(jì)算總活力。 四、酶的應(yīng)用 ? 固定化酶： 將一種可溶性酶與不溶性的有機(jī)或無機(jī)基質(zhì)結(jié)合，或者將其包埋到特殊的具有選擇透過膜內(nèi)來提高酶的穩(wěn)定性，以便重復(fù)和持續(xù)利用。 ? 固定化酶的性質(zhì) ： （ 1）酶的穩(wěn)定性提高；（ 2）最適 PH值改變；（ 3）酶的活性和催化底物有所變化；（ 4）最適溫度有所提高； ? 固定化酶的作用： （ 1）酶固定化后，不易破損可以反復(fù)多次使用；（ 2）酶不易游離到產(chǎn)品中，產(chǎn)品易于純化；（ 3）便于產(chǎn)業(yè)化、連續(xù)化、自動(dòng)化。 固定化酶的制備 ?① 吸附法 ?② 包埋法 ?③ 偶聯(lián)法 五、同工酶 ?同工酶 (isoenzyme)是指催化的化學(xué)反應(yīng)相同，酶蛋白的分子組成形式、理化性質(zhì)乃至免疫學(xué)性質(zhì)不同的一組酶 ?這類酶存在于生物的同一種屬或同一個(gè)體的不同組織、甚至同一組織或細(xì)胞中。 ?如乳酸脫氫酶（ lactate dehydrogenase, LDH），具有多種分子組成形式： LDH5（ M4）、 LDH4（ M3H）、 LDH3（ M2H2）、 LDH2（ MH3）、 LDH1（ H4）。 同工酶也是研究代謝調(diào)節(jié)、分子遺傳、生物進(jìn)化、個(gè)體發(fā)育、細(xì)胞分化和癌變的有力工具，在酶學(xué)、生物學(xué)、和醫(yī)學(xué)中均 占有重要地位 。