大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備-資料下載頁
2025-05-26 06:24本頁面
【正文】 ℃ 振蕩培養(yǎng)約 4560min ， 使受體菌恢復正常生長狀態(tài) ， 并使轉(zhuǎn)化體表達抗生素基因產(chǎn)物 (Ampr)。 3) 平板培養(yǎng)（有時需要稀釋） (1)取各樣品培養(yǎng)液 ，分別接種于含抗菌素 LB平板培養(yǎng)基上，涂勻（如果用玻璃棒涂抹，酒精燈燒過后稍微涼一下再用，不要過燙）。 (2) 菌液完全被培養(yǎng)基吸收后 ，倒置培養(yǎng)皿，于 37℃ 恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜 (1216小時 )，待菌落生長良好而又未互相重疊時停止培養(yǎng)，對于可以藍白斑篩選的質(zhì)粒和菌株來說，此時應該能清楚地看到藍色和白色菌落。 用 CaCl2法制備的感受態(tài)細胞，可使每微克超螺旋質(zhì)粒 DNA產(chǎn)生 5?1062?107個轉(zhuǎn)化菌落。在實際工作中，每微克有 105以上的轉(zhuǎn)化菌落足以滿足一般的克隆實驗。 4) 檢出轉(zhuǎn)化體和計算轉(zhuǎn)化率 統(tǒng)計每個培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)，各實驗組培養(yǎng)皿內(nèi)菌落生長狀況應如表所示 : 組 含抗菌素的平板 結(jié)果說明 轉(zhuǎn)化實驗組 白色 菌落和少量藍色菌落 說明有重組質(zhì)粒導入 細胞中（有時還需要酶切進一步鑒定 〕 插入 DNA片段對照組 無菌落或極少量白色菌落 說明插入片段比較純或有少量模板 DAN存在 質(zhì)粒對照組 藍色菌落 可以判斷感受態(tài)細胞的效率 各實驗組在培養(yǎng)皿內(nèi)菌落生長狀況及結(jié)果分析 轉(zhuǎn)化體總數(shù)＝菌落數(shù) （ 轉(zhuǎn)化反應原液總體積 /涂板菌液體積 ） 插入頻率＝藍色菌落數(shù) /白色菌落數(shù) 轉(zhuǎn)化頻率＝轉(zhuǎn)化體總數(shù) /加入質(zhì)粒 DNA的量 （ 計算出每微克的轉(zhuǎn)化菌落數(shù) ）
黨政相關相關推薦
鄂ICP備17016276號-1