【導(dǎo)讀】第二章《基因工程》復(fù)習(xí)題。A修復(fù)自身的遺傳缺陷B促進(jìn)自身的基因重組。C強(qiáng)化自身的核酸代謝D提高自身的防御能力。A基因工程及分離工程B基因工程及發(fā)酵工程。A.含有多種限制性內(nèi)切酶識別及切割順序的人工DNA片段。末端4堿基突出的載體質(zhì)粒上，又必須保證連接區(qū)域的堿基對數(shù)目。A.連接反應(yīng)的最佳溫度為37℃。B.連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于10%. 用SmaI酶切后凝膠電泳上出現(xiàn)四條長度不同的帶子，其長度總和與。⑤利用DNA轉(zhuǎn)錄⑥人工合成。2個成對的限制性酶切點(diǎn)。以利于進(jìn)行有效的轉(zhuǎn)錄。2．通過限制性核酸內(nèi)切酶和DN

　　

【正文】 DNA 克隆 D． RNA 克隆 E．蛋白質(zhì)復(fù)制 PCR 反應(yīng)體系的物質(zhì)包括： ( BD ) A． RNA 引物 B． Taq DNA 聚合酶 C． RNA 聚合酶 34 D． DNA 模板 E． ddNTP ，屬于直接選擇法的是： ( BCD ) A．免疫化學(xué)法 B．原位雜交法 C． Southern 印跡 D．補(bǔ)救標(biāo)志篩選 E．抗藥性標(biāo)志篩選 ，屬于非直接選擇法的是： ( AE ) A．免疫化學(xué)法 B．原位雜交法 C． Southern 印跡 D．補(bǔ)救標(biāo)志篩選 E．酶聯(lián)免疫篩選 DNA 時可產(chǎn)生： ( ABCE ) A． 5’粘性末端 B． 3’粘性末端 C．平末端 D．單鏈缺口 E．粘性末端 ： ( ABCDE ) A．化學(xué)合成 B． PCR 合成 C． cDNA 文庫 D．基因組文庫 E．組織細(xì)胞中染色體 DNA 直接提取 ： ( ABD ) A．目的基因 B．目的 DNA C．目的 RNA D． target DNA E．外源 RNA 10．重組 DNA 技術(shù)中常用的工具酶有： ( ABCDE ) A．限制性核酸內(nèi)切酶 B． DNA 聚合酶 Ⅰ C． DNA 連接酶 D．反轉(zhuǎn)錄酶 E．末端轉(zhuǎn)移酶 35 11．作為基因工程的載體必須具備的條件是： ( ABCD ) A．能獨(dú)立自主復(fù)制 B．易轉(zhuǎn)化 C．易檢測（含有抗藥性基因等） D．具有限制性內(nèi)切核酸酶的位點(diǎn) E．易提取獲得 五、填空題 1．基因工程的 一個理想的 載體必須具備的條件有 __至少有一個復(fù)制起點(diǎn) ____、___有克隆位點(diǎn)、具備轉(zhuǎn)化的功能、遺傳標(biāo)記基因 ___、 ___具有較高的裝載能力___。 2．基因工程常用的載體 DNA 分子有 ______、 ______和 ______。 3．一個完整的 DNA 克隆過程應(yīng)包括 ______的獲取、 ______的選擇與構(gòu)建、 ______與載體的拼接、重組體導(dǎo)入 ______、篩選與鑒定出 ______。 4．目的基因獲取的途徑或來源有 ______、 ______、 ______、 ______。 5．基因工程過程中重組體直接篩選法的方式有 ______、 ______、 ______。 6．當(dāng)細(xì)胞與細(xì)胞或細(xì)菌通過菌毛相互接觸時， ______就可以從一個細(xì)胞（細(xì) 菌）轉(zhuǎn)移到另一細(xì)胞（細(xì)菌），這種類型的 DNA 轉(zhuǎn)移稱為 ______作用。 7．重組 DNA 技術(shù)中常用的工具酶有 ______、 ______、 ______、 ______。 沒的活性有： 5’ 3’聚合 酶活性； 3’ 5’外切酶活性 9. 人工化學(xué)合成 DNA 新形成的核苷酸的合成方向是 ’ 3’ 5’ ，合 成的 DNA5’末端 是 OH。 3’ 末端 是 OH 36 PCR 擴(kuò)增 DNA 時，反應(yīng)體系應(yīng)加入模板 DNA， Taq 酶、一對引物、 d NTP和緩沖液。 基因 工程， 酶 工程， 細(xì)胞 工程， 發(fā)酵 工程。 6． 使 DNA的結(jié)構(gòu)分析問題從根本上得到了解決的兩項(xiàng)關(guān)鍵性工程技術(shù)分別是 DNA分子的體外切割與連接技術(shù) 和 DNA分子的核酸序列分析技術(shù)。 7．基因工程的工具酶主要有 限制性核酸 內(nèi)切酶 和 DNA 連接酶 。 8． 基因克隆載體主要有 質(zhì)粒 、 噬菌體 、 病毒 三大類。 9． 基因克隆載體 應(yīng)具備的條件是 有 克隆位點(diǎn)（外源 DNA 插入點(diǎn)） ，能攜帶外源 DNA 進(jìn)入受體細(xì)胞， 能自主復(fù)制 ； 具有選擇標(biāo)記， 便于重組體的篩選和鑒定； 10． 將外源性重組 DNA 導(dǎo)入受體細(xì)胞的途徑有 轉(zhuǎn)化（或轉(zhuǎn)染） 、 雜交 、 轉(zhuǎn)導(dǎo) 、 細(xì)胞融合 、 顯微注射 等方式。 11． 目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞成功的關(guān)鍵是：選用合適的 克隆載體 、選用合適的 受體細(xì)胞 、選用合適的 基因轉(zhuǎn)移方法 。 12． 基因克隆受體細(xì)胞有 原核細(xì)胞 和 真核細(xì)胞 。 13． 克隆基因的進(jìn)一步鑒定常采用 限制性 內(nèi)切酶分析 、 分子雜交 、 PCR 擴(kuò)增 、 DNA 側(cè)序 等方法。 18．限制性酶的發(fā)現(xiàn)標(biāo)志著 DNA 重組時代的開始。（√ ） 年世界上第一個基因重組藥物 —— 人胰島素在美國問世產(chǎn)生了巨大的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。（√ ） ，可以將基因治療分為基因置換治療和基因增強(qiáng)治療。（ √ ） 和 體細(xì)胞基因治療。（ √ ） 年世界上第一個基因重組藥物 —— 人干擾素在美國問世產(chǎn)生了巨大的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。（ ） 23. 根據(jù)基因操作的 目的不同，可以將基因治療分為性細(xì)胞基因治療 和 體細(xì)胞基因治療。（ ） 24. 單克隆抗體技術(shù)是動物細(xì)胞工程技術(shù)。（ √ ） 25．用同一種限制酶切割含有目的基因的外源 DNA 和載體 DNA，產(chǎn)生的 DNA 片段的粘性末端是相同的（ √ ） 26．用同一種限制酶切割含有目的基因的外源 DNA 和載體 DNA，產(chǎn)生不同的 DNA 片段的粘性末端（ ） 27．基因工程、細(xì)胞工程、發(fā)酵工程和酶工程它們之間是相互關(guān)聯(lián)和交叉滲透（ √ ） 37 六、名詞解釋 （ palindrome） DNA（ target DNA） （ alpha plementatlon） DNA 文庫（ genomic DNA library） 文庫（ cDNA library） 克?。?DNA cloning 七、簡答題 ？簡述基因克隆的步驟。 ？ DNA 技術(shù)中獲取目的基因的途 徑。 mRNA 分子，你怎樣才能使它翻譯出相應(yīng)的蛋白質(zhì)？簡述其過程。 ？ 八、論述題 α 互補(bǔ)篩選重組體質(zhì)粒細(xì)菌的原理。 ？ 1．． 何何 謂謂 基基 因因 工工 程程 ？？ 簡簡 述述 人類基因組計(jì)劃在醫(yī)藥方面的意義 和和 應(yīng)用。 38 答： 基因工程 —— 在體外將不同生物的基因（ DNA）和載體 (質(zhì)粒、噬菌體、病毒 )DNA 連接，構(gòu)成遺傳物質(zhì)的新組合（重組 DNA） ，然后轉(zhuǎn)入微生物或細(xì)胞內(nèi) (寄主細(xì)胞進(jìn)行克隆 )，使轉(zhuǎn)入的基因在宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生所需要的蛋白質(zhì)而能持續(xù)穩(wěn)定地繁殖，并通過工程化為人類提供有用產(chǎn)品和服務(wù)的技術(shù)。 人類基因組計(jì)劃在醫(yī)藥方面的意義有基因治療、基因制藥、基因芯片； 基基 因因 工工 程程 在醫(yī)藥科學(xué)中的應(yīng)用： （ 1）發(fā)現(xiàn)疾病基因 （ 2）發(fā)展生物制藥 —— 蛋白質(zhì) — 肽類藥物的生產(chǎn) （ 3）基因診斷和 基因治療 （ 4）遺傳病的預(yù)防 5． DNA 結(jié)構(gòu)分析靠哪兩項(xiàng)關(guān)鍵技術(shù)？簡述基因操作常用的工具酶及其作用。 答： 使 DNA的結(jié)構(gòu)分析問題從根本上得到了解決的兩項(xiàng)關(guān)鍵性工程技術(shù)是： （ 1） DNA分子的體外切割與連接技術(shù)； （ 2） DNA分子的核酸序列分析技術(shù)。 基因操作常用的工具酶有 限制性內(nèi)切酶和 DNA 連接酶；兩者所起的作用是： 限制性核酸內(nèi)切酶 (簡稱限制酶 )分別對載體 DNA和目的基因進(jìn)行切斷，以便于重組。 DNA 連接酶將目的基因（外源 DNA）和載體 DNA 分子連接起來，形成重組 DNA 分子。 何謂基因克隆載體？基因 克隆載體至少具備哪三個條件？常用有哪幾類載體？ 答：基因克隆載體是能承載外源 DNA片段（目的基因）并將其帶入受體細(xì)胞的傳遞者。 基因克隆載體具備條件： （ 1）有克隆位點(diǎn)（外源 DNA 插入點(diǎn)），常具有多個單一酶切位點(diǎn)（多克隆位點(diǎn)）； （ 2）能攜帶外源 DNA 進(jìn)入受體細(xì)胞， 能自主復(fù)制； （ 3） 具有兩個以上的遺傳標(biāo)記物， 便于重組體的篩選和鑒定； （ 4）易從宿主細(xì)胞回收 常用的載體 (vector)主要有三大類：質(zhì)粒、噬菌體 、 病毒。 39