【正文】 物堿為衡量指標，結(jié)果附子總生物堿提取轉(zhuǎn)移率可達 85% 左右。附子和甘草合煎可達到減毒增效作用，烏頭堿轉(zhuǎn)為次烏頭堿，毒性大大降低，而藥效增強；與甘草合并煎煮，甘草酸類有利于與附子生物堿成鹽，增加水中溶解度，有利于附子生物堿的提出?！　?c. 粗提物經(jīng)醇沉純化，所得提取物（中間體）與紅參提取物（中間體）制得的人參四類注射劑不僅透明度佳，久置不沉淀，而藥理試驗效果滿意，毒性很低?！　∮秩鐝那Ы鹛伲?Slophania sinica Diels ）根提取生物堿 1 四氫巴馬?。?Telrahyro palamatine ），使用 2% 硫酸作浸出輔助劑，經(jīng)滲漉工藝制得含生物堿硫酸鹽的水溶液，經(jīng)濃氨水調(diào)節(jié) pH 值至 10 左右，讓生物堿沉淀，收集沉淀干燥后得粗生物堿，粗生物用乙醇回流，濃縮，冷藏即可得到較純的四氫巴馬丁?！　≡偃鐝难雍刂刑崛⊙雍乜偵飰A，是用 14% 氨水浸潤延胡素粉末，使生物堿鹽全部轉(zhuǎn)成堿基，然后用乙醚 乙醇（ 80:20 ）復合溶劑滲漉，回收溶劑后，干燥，所得粗生物再用乙醚回流，回收乙醚，干燥即得較純的總生物堿?！　? 含多糖類中藥材提取、分離純化輔料的選擇　　一般來說，含多糖（ Polysaccharides ）中藥材的提取溶劑只能用水或 30% 以下濃度的稀醇提取。含多糖中藥材的提取，一般情況是用水作溶劑煎煮提取 2 ～ 3 次，但有時亦不盡然，當含多糖的中藥還含有其他難以用水提出的有效成分或用較高濃度乙醇才能提出的有效成分或有效部位，則首先用適宜濃度的乙醇將醇溶性有效成分或有效部位提出后，再用水煎煮提取多糖。例如人參含有人參皂苷，也含有多糖，但人參總皂苷更易溶于乙醇，故首先用 75% 乙醇回流提取人參總皂苷，藥渣再用水煎煮提取人參多糖。兩種溶劑分別提取，有利于人參總皂苷和人參多糖的進一步分離純化，人參總皂苷和人參多糖的提取轉(zhuǎn)移率均可達 90% 以上。黃芪、淫羊藿除含多糖外，還含苷類和黃酮，但黃芪苷類和黃酮以及淫羊藿苷類和黃酮均可溶于熱水，因此，這兩種藥材可用水作溶劑煎煮提取，提取液濃縮后采用醇沉法即可將多糖沉淀分離。醇沉溶液含苷類和黃酮，可采用進一步醇沉、丁醇萃取、聚酰胺柱層析等工藝進一步分離純化。　　多糖的純化，一般采用多次醇沉法，常采用 3 次醇沉法即可達到純化目的，第一次醇沉后一定要干燥，使同時被沉淀的蛋白質(zhì)、膠質(zhì)等雜質(zhì)變性固化，再用水溶解后冷藏或離心，除去水不溶性雜質(zhì)，濃縮后再用乙醇反復沉淀。使用的乙醇濃度，隨多糖的分子量而定，如黃芪多糖的分子量高，可使用 75 ～ 80% 乙醇沉淀，最后一次沉淀用無水乙醇浸洗 1 ～ 2 次即得。人參多糖、麥冬多糖、淫羊藿多糖的分子量相對較低，醇沉時的乙醇濃度應高到 85 ～ 90% ?！　〉谝淮未汲恋玫降拇侄嗵牵稍?，溶解、冷藏、澄清或離心除去沉淀后，澄清濃縮后用葡聚糖凝膠柱層析或聚酰胺吸附、干燥，上柱，用水洗脫，洗脫液濃縮，再用乙醇沉淀，沉淀用無水乙醇浸洗 1 ～ 2 次，即得。這種葡聚糖凝膠或聚酰胺吸附除雜質(zhì)的工藝，所得多糖中間體純度比多次醇沉法高，可將蛋白質(zhì)、脂類等雜質(zhì)除盡，含量高 5 ～ 8 個百分點，顏色淺，為白色或類白色，易于過濾澄明。　　 2 、浸出輔助劑類輔料的選用　　有利于溶劑（主要是水或乙醇）將藥材中有效成分或有效部位提出，增加其提取轉(zhuǎn)移率的輔料稱為浸出輔助劑，是研制某些中藥注射劑必不可少的一類輔料，包括酸類，如鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸、乙酸、檸檬酸、酒石酸、蘋果酸等；堿類，如濃氨溶液、氫氧化鈉、碳酸鈉、氫氧化鈣等；脫脂類，如石蠟、石油醚、乙醚、丙酮等?！　≡谥兴幱行С煞只蛴行Р课坏奶崛≈?，當使用水或乙醇作溶劑均難以將其提出時，應分析原因，如果是由于藥材富含蠟質(zhì)、脂肪、樹脂，影響水或乙醇的浸潤滲透，可采用石蠟、石油醚、乙醚脫脂后再用水或乙醇提取，或直接用乙酸乙酯或丙酮提??；如果某些有效成分或有效部位成鹽后可增加溶解性，可加入適宜適量的酸或堿，使其成鹽，增加其提取轉(zhuǎn)移率。如烏頭總生物堿的提取，加入適量的鹽酸成鹽，可大大提高總生物堿的提取轉(zhuǎn)移率，又如用甘草提取甘草酸類，加入適量的氨水亦可大大提高甘草酸類的提取轉(zhuǎn)移率，再如由黃連藥材提取小檗堿，用 % 硫酸水溶液提取使提取轉(zhuǎn)移率高達 95% 。如果是由于在提取過程中，有效成分或有效部位不穩(wěn)定，可根據(jù)情況使用穩(wěn)定劑，如使用適宜適量的抗氧劑和抗氧增效劑或水解阻止劑。如人參、遠志藥材提取其皂苷時，加入稍過量的氨溶液，使 pH 在弱堿性可防止酸性皂苷的水解，又如在提取銀杏葉中的黃酮和內(nèi)酯時，加入適量的蛋氨酸并同時加入適量的枸櫞酸可阻止其白果內(nèi)酯的水解，使內(nèi)酯峰的比例與葉中天然比例基本一致。　　 3 、絮凝澄清劑類輔料的選用　　絮凝澄清劑在中藥提取液的分離純化工藝中得到廣泛的應用，當中藥提取液十分混濁，難用醇沉工藝、離心工藝或冷藏工藝澄清時，或者為了節(jié)省資源，可選用 ZTC1+1 、科陽 1+1 、 101 果汁澄清劑、甲殼糖等天然澄清劑，這類澄清劑屬于天然多糖類，無毒安全，在中藥注射劑研制中，用于澄清藥液，除去淀粉、蛋白質(zhì)、樹脂、鞣質(zhì)等雜質(zhì)非常有效，對有效成分或有效部位幾乎無影響，節(jié)省醇沉或減少醇沉次數(shù)。例如，在丹參注射液或丹紅注射液的制備工藝中，醇提后水沉時比較困難，用 ZTC1+1 天然澄清劑效果十分理想，在 4 ～ 6 小時內(nèi)即可澄清，對丹參酮、丹參酚類等有效成分幾乎無影響，而且可除去大部分鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，藥液濃縮后再經(jīng)堿性醇沉淀處理則可完全除去鞣質(zhì)等雜質(zhì)，所得丹參或丹紅提取物（中間體）制備的注射液久置不會變色，也不會產(chǎn)生沉淀?！　? 、吸附劑類輔料的選用　　欲研制成功一種中藥注射劑，需要最大限度地保留有效成分，盡可能除去蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂等無效成分，即達到良好的分離純化，提高提取物（中間體）的純度，在中藥粗提物的分離純化工藝中，選用適宜適量的吸附劑進行分離純化往往可達到預想的效果。在中藥粗提物的分離純化工藝中使用的吸附劑有活性炭、硅膠、氧化鋁、分子篩、凝膠聚酰胺、交聯(lián)聚維酮、大孔樹脂等。在研制銀杏內(nèi)酯注射劑中，采用活性炭、硅膠柱層析工藝，可將內(nèi)酯進一步純化，純化后的萜類內(nèi)酯純度可達 85% 以上，符合 SFDA 有效部位投料其純度必須達到 80% 以上的要求?！　【埘０罚猃?6 ）也是經(jīng)常使用的優(yōu)良吸附劑，優(yōu)點是性質(zhì)穩(wěn)定，無有害殘留物，可重復使用多次。聚酰胺分子中存在眾多酰胺鍵，可與酚類、酸類、醌類、黃酮類等多種化合物形成氫鍵而吸附，在水中形成氫鍵的能力強，吸附強，在有機溶劑中則較弱，在酸性溶劑中強，堿性溶劑中最弱。利用上述性質(zhì)可采用不同溶劑吸附，不同溶劑或不同 pH 值溶劑洗脫，即可達到分離純化目的。我公司在研制銀杏葉注射劑中，銀杏葉粗提物采用聚酰胺吸附，分別用 35% 和 65% 乙醇洗脫，不但可除去銀杏葉粗提物中的烷基酚酸類等多種有害雜質(zhì)，而且可將銀杏黃酮和內(nèi)酯洗下來，從而達到十分理想的分離純化目的。在研制含有多糖中藥的注射劑時，如含黃芪的注射劑、含人參的注射劑，其中多糖采用聚酰胺柱層析，用水作洗脫劑，可將多糖中的蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)等雜質(zhì)除去，大大提高了多糖的純度 , 人參多糖含量可達 75% ，黃芪多糖含量可達 65% 。大孔樹脂的優(yōu)點是品種多 , 比表面積大，吸附力強，選擇性高，可用于多種有效成分或有效部位的分離純化，其缺點是可帶進毒性大的甲苯、二甲苯等殘留物。因此，大孔樹脂應進行預處理，洗去殘留物檢查合格后方可使用。大孔樹脂型號不同，其極性不同，不同型號適用于不同有效成分或有效部位的分離純化。如用 D101 樹脂柱層析純化黃芪甲苷，用乙醇洗脫，其純度可達 80% 以上；用 D101 或 LD601 樹脂柱層析純化人參皂苷，所得人參總皂苷純度可達 80% 以上?！　∧z柱層析分離是被分離物質(zhì)的溶液流經(jīng)凝膠柱時，因分子量的大小不同而被分離的一種純化技術(shù)，其原理是可逆的分子篩作用，大分子物質(zhì)由于直徑較大，不易進入凝膠顆粒的微孔中，只能分布于凝膠顆粒間隙中，向下移動的速度快，小分子則相反，在向下移動的過程中，要等待它們從凝膠內(nèi)擴散至顆粒間隙后才能進入另一凝膠顆粒內(nèi)，如此不斷地進入和擴散的結(jié)果，使小分子物質(zhì)下移速度落后于大分子物質(zhì)，從而達到分離目的，在中藥分離純化中最常用的是葡聚糖凝膠，其次為聚丙烯酰胺凝膠、瓊脂糖凝膠。主要用于大分子有效成分和有效部位的分離純化。我公司在制備含有天然多糖的中藥注射劑，其多糖的純化除選用聚酰胺樹脂外，也選用葡萄糖凝膠，如牛膝多糖、當歸多糖、淫羊霍多糖、天花粉多糖等選用葡聚糖凝膠 SephadexG150 ， SephadexG75 柱層析，水洗脫，乙醇沉淀分離純化，多糖純度大大提高。某些苷類化合物，如甘草苷類也可用葡聚糖凝柱層析純化，提高總甘草苷類純度。 24 / 24