農(nóng)產(chǎn)品分析ppt課件-資料下載頁
2025-05-06 07:24本頁面
【正文】 酮古樂糖酸濃度成正比，可以比色定量。 操作步驟 ? 稱樣 → 加等量 2%草酸 → 于高速搗碎機(jī)搗碎 → 取勻漿 20g→用 1%草酸定容 100ml→ 過濾 → 取濾液 10ml→ 加 1%草酸10ml→ 加少量活性炭 → 搖 1分鐘 → 靜置過濾 → 各取濾液 2ml于樣品管和樣品空白管 → 各管 加入 1滴硫脲溶液 → 于樣品管中 加入 2,4二硝基苯肼 → 分別于兩個(gè)管加蓋 → 于37℃ 保溫箱 3小時(shí) → 取出后樣品管放入冰水中 → 樣品空白管取出后冷至室溫 → 在樣品空白管加入 2,4二硝基苯肼 → → 樣品管和空白管都于 冰浴中 → 滴加 9︰ 1H2SO4 2ml于各管中 → 邊滴邊搖 → 防止溫度升高炭化后呈黑色 → 冰浴中取出 → 室溫下 放置 30分鐘后 ，在 540nm測(cè) 消光值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的含量。 ? 注意事項(xiàng) ? （ 1）本法為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法，適用于蔬菜、水果及其制品中總抗壞血酸的測(cè)定。 ? （ 2）硫脲可防止 Vc被氧化，且可幫助脎的形成，最終溶液中硫脲的濃度應(yīng)一致，否則影響色度。 ? （ 3）加入 H2SO4(9︰ 1)溶液后試管從冰水中取出，溶液顏色會(huì)繼續(xù)變深，所以必須準(zhǔn)確加入H2SO4后． 30min內(nèi)比色 (糖存在造成顯色不穩(wěn)定 , 顏色會(huì)逐漸加深 )。 ? (4)活性炭對(duì)抗壞血酸的氧化作用，是基于其表面吸附的氧進(jìn)行界面反應(yīng)，加入量過低，氧化不充分，測(cè)定結(jié)果偏低，加入量過高，對(duì)抗壞血酸有吸附作用，使結(jié)果也偏低。 ? 活性炭須 充分酸化 ，才能有 較強(qiáng)的氧化能力 ，且具有 除色素 的雙重作用。 1mol/LHCl,100g于750ml，煮沸 12h，沸水洗滌至無 Fe2+，烘干 。 ? (5) 2， 4二硝基苯肼和氧化型 Vc藕聯(lián)形成脎在脫水氧化環(huán)境 下才穩(wěn)定。 ? (6)溶液中其他的酮和酮衍生物和 2， 4二硝基苯肼也形成脎，故 須作空白試驗(yàn) （指沒有 Vc參與下形成脎的量）。 ? (7)硫脲可防止抗壞血酸繼續(xù)氧化，同時(shí)促進(jìn)脎的形成。 最后溶液中硫脲的濃度要一致 ，否則影響測(cè)定結(jié)果。 ? (8)測(cè)定波長(zhǎng)一般在 495～ 540nm，樣品雜質(zhì)多時(shí)在 540nm較合適，但靈敏度較最大吸收波長(zhǎng)(520nm)下的靈敏度降低 30％。 ? (9)加 9:1硫酸溶液時(shí)，為防止溶液中的糖炭化而變黑色，需 邊滴加邊搖 試管。 二、維生素 B B2 測(cè)定 ? VB1又叫硫胺素， VB1是一種重要的維持人體代謝平衡的物質(zhì) ,缺乏時(shí)可能引起腳氣病、多發(fā)性神經(jīng)炎等疾病。 ? VB1存在于糙米、酵母、谷類、肝、肉類、豆類及其它動(dòng)植物組織中，動(dòng)物組織不如植物含量豐富。 ? 測(cè)定維生素 B1的方法有重量法、滴定法、熒光法、電位法及示波電位滴定法等。 ? 世界各國(guó)都用熒光法測(cè)定。 （一） VB1的性質(zhì) ? ⑴ VB1在中性、堿性下不穩(wěn)定，易分解； ? ⑵ VB1在酸性條件下穩(wěn)定，即使加熱酸性也穩(wěn)定； ? ⑶ VB1為白色結(jié)晶，微溶于 C2H5OH，不溶于乙醚或 CHCl3，易溶于水。 （二） VB2（核黃素）的性質(zhì) ? 維生素 B2在中性水里溶解極少，呈黃綠色的熒光，在強(qiáng)酸性和強(qiáng)堿性溶液中則充分溶解。 ? 橙黃色針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)為 282℃ 的，耐熱，對(duì)空氣、氧氣穩(wěn)定。 ? 測(cè)定維生素 B2的方法有光黃素?zé)晒夥?、核黃素?zé)晒夥ā⒏咝б合嗌V法。 光黃素?zé)晒夥?靈敏度和精密度都較高，適用于測(cè)定農(nóng)產(chǎn)品中的維生素 B2。高效液相色譜法測(cè)定維生素具有簡(jiǎn)便、快速，可同時(shí)進(jìn)行多種水溶性維生素測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)，是近年發(fā)展較快的測(cè)定方法。 （三）維生素 B1和 B2的測(cè)定 （液相色譜法） ? 方法原理：樣品在稀鹽酸溶液中經(jīng)消化，用淀粉酶 和 木瓜酶分解 樣液中的淀粉和蛋白質(zhì)后，即得到 維生素 B2的測(cè)定樣液。 ? 此溶液在 堿性鐵氰化鉀 溶液中 氧化 后用 異丁醇提取 所得 即 維生素 B1測(cè)定樣液。 ? 然后用 YWGCl8柱 ,乙腈－磷酸鹽緩沖溶液作流動(dòng)相， 以 熒光檢測(cè)器 進(jìn)行液相色譜法測(cè)定，求出樣品中維生素 B1和維生素 B2的含量。 操作步驟 ? (1)樣品處理。固體樣品粉碎過 20目篩，果蔬、肉類及水產(chǎn)品經(jīng)搗碎備用。 ? 稱取試樣 (維生素 B1和 B2含量不低于 ) 于 50ml棕色容量瓶中，加入 molL1鹽酸溶液 35ml，在超聲波浴中超聲3min或轉(zhuǎn)動(dòng)搖勻，在高壓滅菌鍋內(nèi) 121℃ 保持 20～ 30min或置于沸水浴中加熱 30min，然后輕搖數(shù)次，取出，冷卻至 40℃ 以下，分別加混合酶液各 ，搖勻，置于 37℃ 下過夜或 42～ 43℃ 加熱 4h，冷卻，用水定容。樣液經(jīng)每分鐘 3000轉(zhuǎn)速度離心過濾，取約 10ml，濾液備用。然后取濾液直接進(jìn)行維生素 B2測(cè)定。 ? 取上述濾液 5ml于 60ml分液漏斗中，沿分液漏斗壁加堿性鐵氰化鉀溶液 3ml (邊搖邊加 )，繼續(xù)振搖 10s，立即加入異丁醇 8ml，并猛烈振搖 45s．靜置分層后棄去水層。有機(jī)相通過無水硫酸鈉小柱，其收集液為維生素 B1待測(cè)液。 ? (2)標(biāo)準(zhǔn)溶液制備。準(zhǔn)確吸取 2mgL1維生素 Bl和維生素 B2混合工作液 0、 、 、 、 、于 50ml棕色容量瓶中，再加入與樣品等量的 ，以下操作同樣品處理，得到維生素 B2標(biāo)準(zhǔn)系列水溶液和維生素 B1標(biāo)準(zhǔn)系列異丁醇溶液。 ? (3)樣品測(cè)定。 ? 注釋 ? （ 1）維生素 B2測(cè)定用消化后的濾液直接進(jìn)樣，處理后的標(biāo)準(zhǔn)和樣品都有雜質(zhì)峰，但能分離維生素 B2，不影響測(cè)定。 ? （ 2）由于維生素 B1被堿性鐵氰化鉀氧化并不是定量產(chǎn)生硫胺素，但在恒定條件下是一個(gè)恒量。用異丁醇萃取的維生素 B1也是如此。因此 本法采取等體積進(jìn)樣 。 ? （ 3）樣品處理是能否獲得滿意結(jié)果的關(guān)鍵。 ? （ 4）液相色譜儀有： ； ? （ 5） VB1和 VB2測(cè)定時(shí)所用的流動(dòng)相不同。 ? VB1： 流動(dòng)相 A，以磷酸鹽緩沖液 80份（ 磷酸緩沖液， pH＝ ）和乙腈 20份相混而成； ? VB2： 流動(dòng)相 B，以磷酸鹽緩沖液 82份和乙腈 18份混合而成。 ? （ 6）堿性鐵氰化鉀溶液 。吸取 150g/L氫氧化鈉溶液 97mL加入 10g/L鐵氰化鉀 3mL混合而成。 ? 混合酶溶液 （淀粉酶和木瓜酶各 3g，用 2mol/L醋酸鈉稀釋至 100mL） ? （ 7） 測(cè)時(shí)儀器條件（參考） ? VB1： 激發(fā)波長(zhǎng) 435nm，狹縫為 10nm，發(fā)射波長(zhǎng)為375nm，狹縫為 ，靈敏度 10。 ? VB2： 激發(fā)波長(zhǎng) 440nm，發(fā)射波長(zhǎng)為 565nm,狹縫為，靈敏度 3,其他同 VB1。
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