hplc應(yīng)用mmppt課件-資料下載頁
2025-05-05 12:52本頁面
【正文】 洗脫出來，確定是否會(huì)影響主峰的測定。 ? 3．計(jì)算：由于有些對(duì)照品標(biāo)示含量的方式與樣品標(biāo)示量不同，有些是復(fù)合鹽、有些含水量不同、有些是鹽基不同或有些是采用有效部位標(biāo)示，檢驗(yàn)時(shí)請(qǐng)注意。 樣品測定 ? 4．儀器的使用： ?①柱在線時(shí)，增加流速應(yīng)以 進(jìn)行，一般不超過 ，反之亦然。否則會(huì)使柱床下塌，叉峰。柱不在線時(shí)，要加快流速也需以每次 （或下來），勿急升（降），以免泵損壞。 ?② 安裝柱時(shí)，請(qǐng)注意流向，接口處不要留有空隙。 ?③ 樣品液應(yīng)注意濾過（注射液可不需濾過）后進(jìn)樣，注意樣品溶劑的揮發(fā)性。 HPLC的正確使用和科學(xué)保養(yǎng) ? 保持貯液瓶清潔，對(duì)專用貯液瓶應(yīng)定期清洗；用試劑瓶作貯液瓶時(shí)，要經(jīng)常更換。 ? 定期（如半個(gè)月）在稀硝酸溶液中超聲、清洗過濾器，保持過濾器暢通無阻。 ? 使用 HPLC試劑和新蒸二次蒸餾水作流動(dòng)相，所使用的溶劑其截止波長一定要低于檢測波長，對(duì)不是 HPLC級(jí)的試劑要進(jìn)行過濾（ HPLC試劑出廠前已用 ）。對(duì)流動(dòng)相一定要脫氣。 ? 每天開始使用儀器，注意放空排氣，確保泵頭、流動(dòng)池以及其它流路系統(tǒng)中無氣泡存在。 HPLC的正確使用和科學(xué)保養(yǎng) ? 珍惜保護(hù)色譜柱，避免柱頭突然產(chǎn)生大的波動(dòng)，擾動(dòng)損傷柱床。如避免泵啟動(dòng)過速、升壓過快、樣品閥搬動(dòng)過慢所造成的柱壓大的波動(dòng)。 ? 采用保護(hù)（警戒）柱，延長柱壽命。如污染物堆積于保護(hù)柱柱頭，造成柱壓升高，柱效下降，峰形變差時(shí)，卸下用強(qiáng)溶劑反沖后再用或更換新保護(hù)柱。 ? 避免超負(fù)荷進(jìn)樣，對(duì) 250 ,絕對(duì)進(jìn)樣量應(yīng)不超過 100μg。在靈敏度允許的前提下，應(yīng)盡量將試樣濃度降低，減少絕對(duì)進(jìn)樣量（進(jìn)樣體積可保持不變），這是保持 HPLC柱性能持久良好的重要舉措之一。 ? 經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗柱子，將柱內(nèi)強(qiáng)保留組分及時(shí)洗脫出。反相柱用異丙醇 二氯甲烷（ 1： 1）沖洗，正相（硅膠柱）用純甲醇或異丙醇沖洗，時(shí)間均不少于 1h。 HPLC的正確使用和科學(xué)保養(yǎng) ? 做完試驗(yàn)，及時(shí)用適當(dāng)溶劑沖洗柱子和進(jìn)樣閥，尤其是對(duì)過夜的柱子和進(jìn)樣閥，一定要用足量的水徹底洗凈其中的鹽類、緩沖液，再用甲醇或乙腈沖洗。正相柱保存在非極性有機(jī)溶劑（如己烷）中。 ? 以硅膠為基質(zhì)的柱子，如 C1 C8等，要控制好流動(dòng)相的 pH值，一般不要低于 ，不高于 。 ? 1盡量用流動(dòng)相溶解樣品，一是避免出現(xiàn)拖尾峰、怪峰，二是避免試樣在系統(tǒng)中由于溶解度降低而析出。 ? 1對(duì)于阻塞或受傷嚴(yán)重的柱子，必要時(shí)，可卸下不銹鋼濾板，超聲洗去濾板阻塞物，對(duì)塌陷污染的柱床進(jìn)行清除、填充、修補(bǔ)工作，此舉可使柱效恢復(fù)到一定程度（ 80%），有繼續(xù)使用的價(jià)值。 HPLC的正確使用和科學(xué)保養(yǎng) ?1用 HPLC分析酸堿性物質(zhì)，由于吸附作用（次級(jí)保留）使峰開拖尾。加入改良劑可以大大改善峰形，提高積分的準(zhǔn)確度。一般規(guī)則是：（ 1）分析酸性物質(zhì)，可加入1%有醋酸。（ 2）分析堿性物質(zhì)，可加入1020mmol/L三乙胺。（ 3）酸堿物質(zhì)混為一體，可同時(shí)加入 1%的醋酸和 1020mmol/L三乙胺。 THE END THANK YOU
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