炭疽檢驗(yàn)技術(shù)ppt課件-資料下載頁
2025-05-01 12:06本頁面
【正文】 in， 72℃ 1 min， 30個(gè)循環(huán)； ? 最后 72℃ 5 min。 （五）炭疽病原學(xué)檢查 —— PCR鑒定試驗(yàn) ? 標(biāo)本采集和樣品處理 ? 血清中抗炭疽芽胞和毒素 IgG水平檢測 （酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn) ELISA） ? 血清中抗炭疽莢膜抗體膠體金檢測 炭疽血清學(xué)檢查 ?根據(jù)血清學(xué)檢驗(yàn)的結(jié)果可以對病人做出追溯診斷，由于診斷必須由雙份血清做出，需要特別強(qiáng)調(diào)急性期血清的采取。 ?首份血清應(yīng)在檢視病人時(shí)采取，通常應(yīng)一次采取血液標(biāo)本供涂片鏡檢，細(xì)菌分離培養(yǎng)，血清學(xué)檢查及常規(guī)的血液檢查使用。血清分離后置 4℃ 保存，待獲得恢復(fù)期血清后，一同進(jìn)行抗體檢查。 ?恢復(fù)期血清應(yīng)在發(fā)病后 15日左右采取。 （一）炭疽血清學(xué)檢查 —— 標(biāo)本采集和樣品處理 （二）炭疽血清學(xué)檢查 —— 抗炭疽芽胞和毒素 IgG水平 ELISA測定 抗炭疽芽胞和毒素 IgG水平 ELISA測定程序 包被抗原 ： 所用各孔加入檢測用炭疽標(biāo)準(zhǔn)芽胞抗原液或檢測用炭疽毒素抗原液 100 μl，酶標(biāo)板貼上封口膜，置 4℃ 過夜。次日，甩干孔內(nèi)溶液，每孔加洗滌緩沖液 100 μl，甩干，反復(fù)洗滌 3次，每次 3 min。 ↓ 待檢血清反應(yīng) ： 每種待測血清使用兩行，以增加測定結(jié)果的可分析性。 兩行的 1~12孔各加生理氯化鈉溶液 100 μl。在第 1孔加待測血清 100 μl，從第 1孔以倍比稀釋法向后至第 12孔進(jìn)行稀釋混勻。酶標(biāo)板貼上封口膜，置 37℃ 60 min。甩干孔內(nèi)溶液，每孔加洗滌緩沖液 100 μl，甩干，反復(fù)洗滌 3次，每次 3 min。 (同時(shí)做空白、正常血清孔對照 ) ↓ 酶標(biāo)抗體反應(yīng) ： 于各反應(yīng)孔中加入新鮮稀釋的工作濃度的辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊（兔）抗人 IgG或辣根過氧化物酶標(biāo)記 SPA 100 μl，酶標(biāo)板貼上封口膜，置 37℃ 60 min。甩干孔內(nèi)溶液，每孔加洗滌緩沖液 100 μl，甩干，反復(fù)洗滌 3次，每次 3 min。 ↓ 顯色反應(yīng) ： 于各反應(yīng)孔中加入顯色底物 A、 B溶液 50 μl，酶標(biāo)板貼上封口膜，置暗處 20 min。 ↓ 終止顯色 ： 于各反應(yīng)孔中加入顯色終止液 100 μl。 ↓ OD值讀取和結(jié)果判定 ： 在酶標(biāo)儀上，于 450 nm波長處，被檢測孔 OD值達(dá)陰性血清對照孔 OD值 ，可判斷為陽性。 也可用目測判讀，被檢測孔顯示與陰性對照孔具有明顯區(qū)別的黃褐色時(shí)，可判為陽性。 （二）炭疽血清學(xué)檢查 —— 抗炭疽芽胞和毒素 IgG水平 ELISA測定 注意事項(xiàng)： ?標(biāo)本采集時(shí)應(yīng)盡量 避免溶血 ，因紅細(xì)胞破裂可釋放過氧化物酶活性物質(zhì) ,以 HRP為標(biāo)記的 ELISA 測定中，溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色；菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,長菌的標(biāo)本 同樣的道理易產(chǎn)生 假陽性 。 ?抗凝不完全的標(biāo)本因纖維蛋白原的干擾而造成假陽性，建議盡量 不用抗凝血 尤其是用肝素抗凝劑。 ?標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過長易導(dǎo)致血清 IgG聚合，一般血清置 4℃ 冰箱 5天 內(nèi)完成測試。如需保存 一周以上 則要 20℃ 冷凍 保存，融解時(shí)應(yīng)上下顛倒充分混勻，同時(shí)避免氣泡。 （三）炭疽血清學(xué)檢查 —— 血清中抗炭疽莢膜抗體膠體金檢測 檢測對象為抗莢膜抗體， 疫苗株不帶有莢膜，因此可以鑒別免疫接種與感染。 可以檢測循環(huán)總抗體，即 IgG、 IgM均可檢出。 檢測方法：將人活動物血清標(biāo)本 1： 40稀釋后，取150ul加入加樣孔， 2分鐘后開始觀察， 15分鐘終止觀察。 陰性 陽性 Thank You ！
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