疫共沉淀原理及注意事項-資料下載頁
2025-04-30 02:36本頁面
【正文】 PMSF, %Tween 20 注意的問題： ?使用 對照抗體 ：（陰性和陽性） 陰性： ?單克隆抗體：同一種屬的 IgG ?兔多克隆抗體：正常兔 IgG 陽性：細(xì)胞內(nèi)某種蛋白的抗體（做膜蛋白 A，用膜蛋白 B） 未檢測到目得蛋白或蛋白很少 可能原因 處理方法 ? ： 添加蛋白酶抑制劑；所有操作保持 4℃ 以下冰上操作并防止凍融 ? ：調(diào)整抗體濃度，必要時設(shè)立濃度梯度，摸索最佳濃度 ? ： 選用適合于 IP和 /或 IB的相應(yīng)抗體 ? agarose珠子結(jié)合： 選用適合于 IP的相應(yīng)珠子，正確保存防止變質(zhì)或干燥 ? ：改變 tag融合表達(dá)部位 ? ： 改用低嚴(yán)謹(jǐn)度裂解液 目得蛋白高背景： ? 可能原因 處理方法 ? 非特異蛋白結(jié)合 在無血清培養(yǎng)液中裂解細(xì)胞； 在免疫沉淀前用 protein (G/A)珠子預(yù)洗， 免疫沉淀后增加漂洗次數(shù)和嚴(yán)謹(jǐn)度（高鹽或去垢劑） ? 裂解液嚴(yán)謹(jǐn)度太低 改用高嚴(yán)謹(jǐn)度裂解液 ? 實驗儀器或液體被污染 使用潔凈的儀器或液體 ? 轉(zhuǎn)移膜上的非特異吸附 戴手套， 用鑷子夾取， 不要接觸膜轉(zhuǎn)移面 試劑 ?RIPA Buffer ?蛋白酶抑制劑（ aprotinin、 leupeptin、pepstatin）、 PMSF。 ?洗滌緩沖液 PBS ?Protein A agarose瓊脂糖 ?抗體 儀器、耗材 搖床、 EP管、低溫離心機(jī)、 、制冰機(jī)、移液器、吸頭、水浴鍋、細(xì)胞刮子（乙醇洗干凈風(fēng)干）
語文相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1