【正文】 聚合酶 αδ ? 進行性因子 β夾子 PCNA ? 定位因子 γ復合物 RFC ? 引物合成酶 引物酶 聚合酶 α ? 去除引物 聚合酶 Ⅰ RNaseH1/MF1 ? 滯后鏈修復 聚合酶 Ⅰ 連接酶 聚合酶 ε連接酶 Ⅰ ? 解螺旋酶 DnaB T抗原 ? 消除張力 拓撲異構(gòu)酶 拓撲異構(gòu)酶 ? 單鏈結(jié)合 SSB RPA DNA復制的調(diào)控 大腸桿菌染色體 DNA的復制調(diào)控 染色體復制與細胞分裂是 同步 的，但不偶連。 復制的起始與復制子的起始物位點和調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的相互作用有關(guān)。起始物位點的突變可使復制停止導致細胞死亡。 大腸桿菌染色體復制的調(diào)控機制 在復制子上。 復制子的調(diào)控由復制起始因子和起始位點兩部分組成。 大腸桿菌 DNA復制的起始點序列 oriC與起始因子 dnaA、 dnaH等的相互作用，啟動復制。 GATCTNTTNTTT TCTGGATA A T TtGG A TAA R 1 R 3 L M R 1 2 3 4 2 3 6 2 8 0 8 8 1 8 6 1 9 4 2 3 1 2 3 9 2 6 0 2 6 8 R 2 R 4 A A T A t G T G A A A T A G G T G T 1 3 －聚體 9 －聚體 2 4 5 b p 圖 1 1 2 7 E . c o l i 復制 起點 O r i C 的結(jié)構(gòu) 質(zhì)粒 ColE1 DNA復制的調(diào)控 質(zhì)粒 ColE1DNA復制從 RNA的轉(zhuǎn)錄 開始。 RNA轉(zhuǎn)錄的起始于 ori上游 555bp處。 轉(zhuǎn)錄合成的 RNA引物有兩種調(diào)控： （ 1） RNAⅠ （與 RNA引物互補的 108b的 RNA分子） 阻止 RNaseH產(chǎn)生 RNA引物的 3/OH末端； （ 2）附近基因編碼的蛋白質(zhì) Rop蛋白 —抑制引物的形成 。 R n as e H R N A Ⅱ ( R N A 引物 ) O ri － 6 0 0 － 4 0 0 － 2 0 0 0 2 0 0 4 0 0 6 0 0 R N A Ⅰ R o p 圖 1 1 6 9 C o l E1 質(zhì)粒的復制調(diào)控 RNAⅠ 的調(diào)控 真核生物 DNA復制的調(diào)控 ? 有三個水平的 調(diào)控 ： 細胞生活周期水平的調(diào)控 細胞周期分為：間期 G S、 G2 分裂期 M 染色體復制水平的調(diào)控 復制子水平的調(diào)控 細胞周期 細胞周期的調(diào)控 發(fā)現(xiàn)了細胞周期的控制機制。 ? CDK—— 細胞周期蛋白依賴酶 ? cyclin—— 細胞周期蛋白質(zhì) ? CDK分子可以比作引擎，細胞周期蛋白可以比作齒輪箱以控制引 擎處于空轉(zhuǎn)狀態(tài)或者驅(qū)動細胞繼續(xù)細胞周期。細胞周期蛋白依賴激酶分子和細胞周期蛋白驅(qū)動細胞從一個階段到下一個階段。 ? 他們識別出了所有真核生物中調(diào)節(jié)細胞周期的關(guān)鍵分子，真核生物包括酵母菌，植物，動物和人。這些發(fā)現(xiàn)可為人類找到診療癌癥的新方法。 DNA的修復 ? DNA復制時，會出現(xiàn) 堿基 錯配現(xiàn)象，或因環(huán)境因素使 DNA損傷等。在細胞內(nèi)有DNA修復系統(tǒng)?？杀ＷC DNA損傷的修復。 ? 修復系統(tǒng)有： 錯配修復 堿基切除修復 核苷酸切除修復 直接修復 1． 錯配修復（ mismatch Repair） ? 錯配修復對 DNA復制忠實性的貢獻力達 102103，DNA子鏈中的錯配幾乎完全都被修正，充分反映了母鏈的重要性。 2. 堿基切除修復（ BaseExcision Repair） ? DNA gylcosylases能特異性識別常見的 DNA損傷（如胞嘧啶或腺嘌呤去氨?；a(chǎn)物）并將受損害堿基切除。去掉堿基后的核苷酸被稱為 AP位點（ apurinic or apyrimidinic）。細胞中最常見的Uracil Glycosylase就能特異性切除細胞中的去氨基胞嘧啶。 3. 核苷酸切除修復（ nucleotideexcision repair） ? ? 當 DNA鏈上相應位置的核苷酸發(fā)生損傷，導致雙鏈之間無法形成氫鍵，由核苷酸切除修復系統(tǒng)負責進行修復。 （ Direct repair） 錯配修復 找錯配堿基 錯配修復過程 DNA的轉(zhuǎn)座或移位 轉(zhuǎn)座因子或轉(zhuǎn)位因子概念 發(fā)現(xiàn)： 20世紀 40年代由美國的女遺傳學家meclintock在玉米中發(fā)現(xiàn)的。 60年代又在酵母和細菌中發(fā)現(xiàn)。 概念：指基因組中可移動的控制因子。 用 Tn表示。 最初叫插入序列（ Inserted seguence) 又稱 IS因子。 轉(zhuǎn)位因子結(jié)構(gòu)特點和類型 ? 結(jié)構(gòu)特點： 兩端有末端重復序列（ TIR）； 絕大多數(shù)轉(zhuǎn)位因子含有開放閱讀框（ ORF），可能是轉(zhuǎn)座酶的基因，其功能是促進轉(zhuǎn)位因子的轉(zhuǎn)位。 靶序列在轉(zhuǎn)位因子的兩側(cè)形成正向重復序列。 ? 轉(zhuǎn)位因子的類型 原核生物細菌的轉(zhuǎn)位因子根據(jù)結(jié)構(gòu)的大小分： 插入序列，一般小于 2022bp 復合轉(zhuǎn)位子 TnA型轉(zhuǎn)位子 細菌的插入序列 細菌的插入序列是細菌染色體和質(zhì)粒的正常組分。 組成 ：由一段 DNA序列和兩端重復序列組成。 特點 ： 只含有與轉(zhuǎn)位有關(guān)的基因，不含有其他基因。 末端序列長度一般在 15~25bp之間。 ? 復合轉(zhuǎn)位子 ? 復合轉(zhuǎn)位子是一類復雜的轉(zhuǎn)位子。 組成 ：有兩個重復序列夾著一個或多個結(jié)構(gòu)基因組成。 特點 ： 除含有轉(zhuǎn)位有關(guān)的功能基因外，還含有其它的基因如抗藥性基因、抗金屬離子基因、抗毒素基因。 結(jié)構(gòu)較復雜，有 2022~20220bp ? 復合轉(zhuǎn)位子基因特征 ? TnA型轉(zhuǎn)位子 ? 組成 ：含有約 5000bp的轉(zhuǎn)位子有關(guān)基因和抗藥性基因。 ? 特點 ：兩端沒有 IS序列，通常含有末端反向重復序列。例如 Tn3 ? 轉(zhuǎn)座作用的機理 轉(zhuǎn)座時插入的靶序列（受體分子的短序列）的 DNA會被復制，使插入的轉(zhuǎn)座子位于重復的靶序列之間。 靶序列復制的機制可能起源于特定的內(nèi)切酶所造成的粘性 DNA末端。 轉(zhuǎn)座有復制性和非復制性兩大類。 復制性轉(zhuǎn)座是整個轉(zhuǎn)座子被復制，所移動和轉(zhuǎn)位的是原轉(zhuǎn)座子的拷貝。 非復制性轉(zhuǎn)座是原始轉(zhuǎn)座子實體直接移位。 ? 轉(zhuǎn)座作用的遺傳學效應 轉(zhuǎn)座子印發(fā)了許多遺傳變異。 其遺傳學效應主要有： （ 1）引起插入突變。 （ 2）產(chǎn)生新基因。 （ 3）產(chǎn)生染色體畸變。 （ 4）引起的生物進化 . 轉(zhuǎn)座引起插入突變 真核生物中的轉(zhuǎn)座子 玉米中的控制因子 發(fā)現(xiàn)： 類型：玉米細胞內(nèi)的控制因子可歸納為兩大類： ? 自主性因子 ：具有自主剪接和轉(zhuǎn)座的功能 ? 非自主性因子 ：單獨存在時穩(wěn)定，不能轉(zhuǎn)座；當基因組中存在與非自主性因子同家族的自主性因子時才能具備轉(zhuǎn)做功能，成為與自主性因子相同的轉(zhuǎn)座子。 Transposons in Eucaryote AcDs : CC bzbz II BzBz CI Bzbz 無色 青銅色 無色 理論上： 實際上： 穩(wěn)定的紫色突變、 不穩(wěn)定的斑點突變 Ds+Ds+ DsDs Ds+Ds C: 色素基因 I： 色素抑制基因 Bz： 紫紅色 Bz： 青銅色 Ds+：染色體上存在解離因子 Ds因子的存在： 使染色體斷裂，導致 I 基因的缺失 → 穩(wěn)定的紫色突變（ Ac因子不存在時突變穩(wěn)定） 紫色 插入 解離 紫色 Ds因子的移動（存在 Ac因子） 插入到 C基因中 → 無色；從 C基因解離 → 紫色 青銅色 插入 無色 果蠅中的轉(zhuǎn)座子 Copia轉(zhuǎn)座子 第二章 思考題 ? 解釋名詞 ? HMG蛋白 ? C值矛盾 ? 衛(wèi)星 DNA ? 復制子 ? 轉(zhuǎn)座子 ? Klenow大片段 第二章 思考題 ? 染色體的組蛋白有那些特征？ ? 原核生物和真核生物的基因組有何差異？ ? 環(huán)狀雙鏈 DNA的復制依中間物的結(jié)構(gòu)可分為那幾類？ ? DNA修復與修復酶有何關(guān)系？ ? 原核生物與真核生物 DNA復制如何調(diào)控？