應(yīng)用生物化學(xué)ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-04-29 00:30本頁(yè)面
【正文】 耗鹽量過(guò)大，蛋白質(zhì)回收率也低。一般為 %%的蛋白質(zhì)濃度較適中。216。 （２）離子強(qiáng)度和離子類(lèi)型對(duì)鹽析的影響： 離子強(qiáng)度越大，蛋白質(zhì)的溶解度越低，越容易產(chǎn)生鹽析現(xiàn)象；離子半徑小而價(jià)數(shù)高的離子在鹽析方面影響較強(qiáng)，離子半徑大而價(jià)數(shù)低的離子對(duì)鹽析影響弱。216。 （３）ＰＨ對(duì)鹽析的影響： 蛋白質(zhì)所帶凈電荷越多，溶解度越大；在凈電荷為零時(shí)，溶解度最低。一般將ＰＨ值調(diào)到蛋白質(zhì)等電點(diǎn)附近，這樣有利于鹽析。（二）、有機(jī)溶劑沉淀法n 原理 ：n 有機(jī)溶劑對(duì)許多溶于水的小分子生化物質(zhì)以及核酸、多糖、蛋白質(zhì)等生物大分子都能發(fā)生沉淀作用。n 對(duì)于具有表面水層的生物大分子來(lái)說(shuō)，有機(jī)溶劑可 破壞溶質(zhì)分子表面的水膜 ，使這些大分子脫水而相互聚集析出。不同溶質(zhì)要求不同濃度的有機(jī)溶劑，因此可用有機(jī)溶劑進(jìn)行分步沉淀。有機(jī)溶劑n 優(yōu)點(diǎn) ： 有機(jī)溶劑沉淀法分辨能力比鹽析法高，沉淀不用脫鹽，過(guò)濾比較容易。n 缺點(diǎn)： 對(duì)某些具有生物活性的大分子，容易引起變性失活，操作常在低溫下進(jìn)行；分離效果差，共沉作用大；離子強(qiáng)度及離子種類(lèi)對(duì)其也有影響。（三）、透析濃縮法n 原理：n 天然或人工半透膜只允許小分子通過(guò)而阻礙大分子通過(guò)。當(dāng)膜的兩側(cè)存在小分子濃度梯度差時(shí)，小分子就從高濃度一側(cè)向低濃度一側(cè)擴(kuò)散，直至達(dá)到平衡，如果能不斷去除擴(kuò)散出來(lái)的小分子，從而達(dá)到分離純化的目的。n影響透析的因素 半透膜的通透性： 半透膜的通透性取決于膜孔徑的大小，在能阻礙大分子擴(kuò)散的前提下，孔徑越大，透析速度越快。 透析外液的更換 溫度： 溫度越高，透析速度越快。 壓力： 用跨膜的壓力梯度可加速大分子的分離速度。（四）、等電點(diǎn)沉淀法n 原理：n 利用兩性電解質(zhì)在等電點(diǎn)處溶解度最小的性質(zhì)。不同的兩性電解質(zhì)其等電點(diǎn)不同，其在電中性時(shí)溶解度不相同。因而等電點(diǎn)沉淀法可用于某些兩性電解質(zhì)的分離如氨基酸、蛋白質(zhì)、核苷酸等。n 為了增加沉淀效果，往往在等電點(diǎn)時(shí)再加上其他沉淀因素，所以等電點(diǎn)沉淀法一般不單獨(dú)使用，常和鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法一起使用，以提高其沉淀能
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