【正文】 ml注入平皿中，立即傾注相應瓊脂培養(yǎng)，待凝，在相應溫度倒置培養(yǎng)，每株試驗菌平行制備2個平皿，測定所加的試驗菌數。（3）供試品對照組: 各取1：10供試液1ml、 ml、 ml，按試驗組操作，不加菌液，測定樣品本底菌。培養(yǎng)、點計菌落數，計算各試驗菌株的回收率。各菌株回收率（%）=（試驗組平均菌落數供試品對照組平均菌落數）/菌液組平均菌落數，結果見表7。表7計數驗證菌各菌株回收率（%）結果驗證菌株大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽胞桿菌白色念珠菌黑曲霉 驗證次數 方法1231231231231231ml/皿758999779790658489989486728784759899961008473911008198999610090849092由表中可見，白色念珠菌和黑曲霉2個菌株的回收試驗，用常規(guī)法1 ml/皿供試液時，3次試驗的回收率均可達到70%以上，表明本品霉菌及酵母菌計數可用常規(guī)平皿法。而大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽胞桿菌3個菌株的回收率試驗， ml/皿，3次驗證的回收率才能均達到70%以上，因此本品的細菌計數可用培養(yǎng)基稀釋法檢查。（ ml/皿）。2 控制菌檢查法的驗證本品為口服中藥材制劑?？刂凭鷳獧z查大腸埃希菌和大腸菌群。（1）大腸埃希菌查法的驗證　 取1︰10供試液10ml及1ml大腸埃希菌菌液加入100ml的BL增菌培養(yǎng)基中，按大腸埃希菌的檢查法進行驗證。（2）大腸菌群查法的驗證　 取1︰10供試液1ml及1ml大腸埃希菌菌液加入不少于15ml的乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基中，按大腸菌群的檢查法進行驗證。表8 控制菌驗證結果控制菌驗證菌種名稱菌種代數驗證加菌數（CFU）方法結果結論大腸埃希菌大腸埃希菌 387常規(guī)法（100ml）檢出方法成立大腸菌群大腸埃希菌 387常規(guī)法（15ml）檢出方法成立由上表可見，均檢出試驗菌大腸埃希菌，表明本品可用常規(guī)法檢查大腸埃希菌和大腸菌群。6 浸出物照醇溶性浸出物測定法項下的熱浸法（《中國藥典》2010年版一部附錄X A）測定，用70%乙醇作溶劑。實測樣品3批，%～%，%（見表9）。參考《中國藥典》2010年版一部，%。表9 醇溶性浸出物(乙醇)序號批號取樣（g）浸出物（%）平均值（%）120090201 220090202 320090203 平均值（%）7 特征圖譜 照高效液相色譜法（《中國藥典》2010版一部附錄 VI D）測定。色譜條件 色譜柱：Acquity BEH C18 ( mm 150 mm, )；以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按下表中的規(guī)定進行梯度洗脫； ml/min；檢測波長為203nm；柱溫為30℃。時間（分鐘） 流動相A（%） 流動相B（%）0～8 17 838～22 17→40 83→60參照物溶液的制備 取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品和人參皂苷Rb1對照品適量，分別加50%甲醇制成每1ml含人參皂苷Rg1 、人參皂苷Re 1mg的溶液，即得。供試品溶液的制備 取本品粉末（過三號篩）約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水飽和的正丁醇50ml，稱定重量，放冷，再稱定重量，用水飽和正丁醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液25ml，置蒸發(fā)皿中，蒸干，殘渣加50%甲醇適量使溶解，轉移至10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法 精密吸取參照物溶液與供試品溶液各5181。l，注入超高效液相色譜儀，測定，記錄色譜圖，即得。特征圖譜中，應有7個特征峰，其中3個峰應分別與相應的參照物峰保留時間相同。7654321對照特征圖譜峰1：人參皂苷Rg1 峰2：人參皂苷Re 峰3：人參皂苷Rb1對照特征圖譜峰1：人參皂苷Rg1 峰2：人參皂苷Re 峰3：人參皂苷Rb1西洋參破壁飲片人參皂苷Rg1人參皂苷Re人參皂苷Rb18 含量測定 本方法參照《中國藥典》2010年版一部西洋參項下【含量測定】方法制定，由于本品實質為藥材破壁粉，方法驗證考察其重復性和回收率，結果重復性RSD%≤%，%～%，RSD%＜%；十批樣品含量見表10，結果表明該方法基本可行。表10 十批樣品含量批號總量（%）平均值（%）20090201 20090202 20090203 2009020420090205200902062009020720090208200902092009010圖11 人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品、人參皂苷Rb1對照品混合溶液圖譜圖12 西洋參破壁飲片樣品圖譜9 性味與歸經參照《中國藥典》2010年版一部西洋參項下擬定。10 功能與主治參照《中國藥典》2010年版一部西洋參項下擬定。11 用法與用量見正文。12 注意參照《中國藥典》2010年版一部西洋參項下擬定。13 貯藏 見正文。附錄 中藥破壁飲片通則中藥破壁飲片是將符合《中國藥典》要求并具有細胞結構的植物類中藥飲片，經現代粉碎技術加工至D90﹤45181。m（300目以上）的粉體，加水或不同濃度的乙醇粘合成型，制成30~100目的原飲片全成分的均勻干燥顆粒狀飲片。中藥破壁飲片可直接沖服、供中醫(yī)臨床調劑或作為中成藥生產的配方原料。中藥破壁飲片在生產與貯藏期間應符合下列有關規(guī)定。一、 中藥破壁飲片的投料應為植物類中藥飲片，原則上動物類與礦物類不宜制成破壁飲片，毒性藥材飲片不宜制成破壁飲片。二、 除另有規(guī)定外，供中藥破壁飲片生產的原料飲片應符合《中國藥典》一部、相應省藥材標準或飲片炮制規(guī)范相應品種項下的規(guī)定，飲片的炮制應符合《中國藥典》一部附錄Ⅱ D 炮制通則的相關規(guī)定。三、 中藥破壁飲片生產過程應針對各品種的不同特性，采取合理的工藝，從而盡量避免其有效成分損失或發(fā)生變化。四、 中藥破壁飲片加工生產過程應選用合適儀器設備，以盡量避免在生產過程引入有害物質；并在符合規(guī)定的潔凈度環(huán)境中生產，必要時可采取適宜的防護措施，以盡量減少生產過程中引入無關雜質。五、 中藥破壁飲片應干燥、顆粒均勻，色澤一致，無吸潮、結塊、潮解等現象。六、 中藥破壁飲片應密封，在干燥處貯存，防止受潮。除另有規(guī)定外，中藥破壁飲片應進行以下相應檢查：【粒度】 除另有規(guī)定外，照粒度測定法（《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅺ B第二法，雙篩分法）測定，不能通過一號篩與能通過五號篩的總和，不得過15%。 【水分】 照水分測定法（《中國藥典》一部附錄Ⅸ H）測定，應符合各品種項下的規(guī)定?！旧珴删鶆蚨取?取供試品適量，置光滑紙上，平鋪，在明亮處觀察，色澤應均勻一致?！玖椒植肌?，加水30ml，超聲處理，并時時振搖3分鐘，使顆粒分散成混懸于水中的超微粉體，用激光粒度分析儀測定粉體粒徑，D90不得大于45um（D90值表示粒徑小于或等于此值的顆粒占所有顆粒數量的90%，而粒徑大于這個值的顆粒占10%）?！疚雌票诩毎薅取?，加入水合氯醛試液–水(1∶1) ml，超聲處理至完全溶散，吸取所有溶液裝片，每片以不溢出、無氣泡、顆粒分布均勻為度，在100倍顯微鏡下檢視，大于100μm且完整的細胞的顆粒數目（如多個完整的細胞連成一片，且整片也超過100μm的，以整片為一個計算）不得超過各品種項下規(guī)定的個數?！狙b量差異】 單劑量包裝的中藥破壁飲片，照下述方法檢查，應符合規(guī)定。檢查法 取供試品10袋，分別稱定每袋內容物的重量，每袋裝量與標示裝量相比較，按表中的規(guī)定，超出裝量差異限度的不得多于2袋，并不得有1袋超出限度1倍。標示裝量裝量差異限度1g及1g以下177。10%177。8%177。7%6g以上177。5%【裝量】 多劑量包裝的中藥破壁飲片，照最低裝量檢查法（《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅻ C）檢查，應符合規(guī)定。【微生物限度】 除另有規(guī)定外，照微生物限度檢查法（《中國藥典》2010年版一部附錄ⅩⅢ C）檢查，應符合規(guī)定。中藥破壁飲片為口服給藥，均含藥材原粉，其微生物限度標準如下：細菌數 每1g不得過10 000cfu；霉菌和酵母菌數 每1g不得過100cfu；大腸埃希菌 每1g不得檢出；大腸菌群 每1g應小于100個。 霉變、長螨者 以不合格論。附：粒徑分布測定法粒徑分布測定法本方法是通過等效散射光能分布來測量粉粒的大小，全面地反映粉粒的粗細特征，并通過工作站進行數據分析處理。此方法與經典測量如篩分，沉降法和圖像分析等方法相比較，具有速度快、重復性好、準確性好、操作簡便等特點。本方法適用于中藥破壁飲片粒徑分布測定。一 儀器設備激光粒度分析儀主要技術參數：測量范圍：—500μm激光器：HeNe氣體激光器，輸出功率2mw。二 分散介質 應能使樣品分散的懸浮介質，又不讓樣品在其中分解或發(fā)生化學反應。常用水為分散介質。三 試驗條件 溫度1030℃，相對濕度小于85%四 實驗步驟1 供試品處理稱取一定量供試品，加入分散介質，超聲處理使供試品粉粒分散均勻（超聲時間視樣品情況而定）。2 測定法 打開電源，預熱半小時左右，待激光功率穩(wěn)定。 背景測量 鼠標點擊“背景測量”按鈕，待按鈕上的“背景測量”文字變成“樣品測量”，即完成了背景測量。 樣品測量 把處理好的樣品混懸液倒入進樣系統，點操作鍵，開始分析樣品。 讀取結果五 注意事項，應待激光功率穩(wěn)定后開始測定。%～25%之間。 每測完一個樣品，應及時清洗樣品池。42 /