實(shí)驗(yàn)一植物原生質(zhì)體的分離和培養(yǎng)一．教學(xué)目標(biāo)：了解植物原生質(zhì)-資料下載頁
2025-04-17 00:34本頁面
【正文】 行；如果在室溫下，要迅速分離和觀察。 利用熒光顯微鏡對可發(fā)熒光的物質(zhì)進(jìn)行檢測時(shí)，將受到許多因素的影響，如溫度、光、淬滅劑等。因此在熒光觀察時(shí)應(yīng)抓緊時(shí)間, 有必要時(shí)立即拍照。另外，在制作熒光顯微標(biāo)本時(shí)最好使用無熒光載片、蓋片和無熒光油。 實(shí) 驗(yàn) 用 品 一、器材 : 普通離心機(jī)、組織搗碎機(jī)、粗天平、熒光顯微鏡。 : 500ml燒杯2個(gè), 250ml量筒1個(gè), 滴管20支, 10ml刻度離心管20支, 試管架5個(gè)，紗布若干，無熒光載片和蓋片各4片。 二、材料 新鮮菠菜。 三、試劑 ，%吖啶橙(acridine orange)。 實(shí) 驗(yàn) 方 法 一、葉綠體的分離與觀察 1. 選取新鮮的嫩菠菜葉，洗凈擦干后去除葉梗脈，稱30g于150ml ，裝入組織搗碎機(jī)。 2. 利用組織搗碎機(jī)低速(5000r/min)勻槳3~5min。 3. 將勻漿用6層紗布過濾于500ml燒杯中。 4. 取濾液4ml在1000r/min下離心2min。棄去沉淀。 5. 將上清液在3000r/min下離心5min。棄去上清液，沉淀即不葉綠體(混有部分細(xì)胞核)。 6. 、 7. 取葉綠體懸液一滴滴于載玻片上，加蓋玻片后即可在普通光鏡和熒光顯微鏡下觀察。 (1)在普通光鏡下觀察。 (2)在熒光顯微鏡下觀察葉綠體的直接熒光。 (3)在熒光顯微鏡下觀察葉綠體的間接熒光：取葉綠體懸液一滴滴在無熒光載片上，%吖啶橙熒光染料, 加蓋片后即可在熒光顯微鏡下觀察。 二、菠菜葉手切片觀察 用剔須刀片將新鮮的嫩菠菜葉切削出一斜面置于載玻片上，滴加1~，加蓋片后輕壓，置顯微鏡下觀察。 (1)在普通光鏡下觀察。 (2)在熒光顯微鏡下觀察其直接熒光。 (3) 觀察其間接熒光：向所制手切片上滴加1~%吖啶橙染液，染色1min，洗去余液, 加蓋片后即可在熒光顯微鏡下觀察其間接熒光。 實(shí) 驗(yàn) 結(jié) 果 一、葉綠體的分離和觀察 1. 普通光鏡下，可看到葉綠體為綠色橄欖形，在高倍鏡下可看到葉綠體內(nèi)部含有較深的綠色小顆粒，即基粒。 2. 以O(shè)lympus熒光顯微鏡為例，在先用B(bule)激發(fā)濾片、B雙色鏡和O530(orange)陰斷濾片的條件下，葉綠體發(fā)出火紅色熒光。 3. 加入吖啶橙染色后，葉綠體可發(fā)出桔紅色熒光，而其中混有的細(xì)胞核則發(fā)綠色熒光。 二、菠菜葉手切片觀察 1. 在普通光鏡下可以看到三種細(xì)胞 (1)表皮細(xì)胞: 為邊緣呈鋸齒形的鱗片狀細(xì)胞。 (2)保衛(wèi)細(xì)胞: 為構(gòu)成氣孔的成對存在的腎形細(xì)胞；(3)葉肉細(xì)胞: 為排列成柵狀的長形和橢圓形細(xì)胞。葉綠體呈綠色橄欖形，在高倍鏡下還可以看到綠色的基粒。 2. 在熒光顯微鏡下，葉綠體發(fā)出火紅色熒光，但其熒光強(qiáng)度要比游離葉綠體弱, 氣孔發(fā)綠色熒光，兩保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)的火紅色葉綠體則環(huán)繞氣孔排列成一圈。表皮細(xì)胞內(nèi)的葉綠體數(shù)量要比葉肉細(xì)胞少。 3. 用吖啶橙染色后，葉綠體則發(fā)出桔紅色熒光，細(xì)胞核可發(fā)出綠色熒光, 氣孔仍為綠色。 作 業(yè) 1. 在普通光學(xué)顯微鏡下，用目微尺和臺(tái)微尺測量一下葉綠體的長軸和短軸，分別測量5~10個(gè)葉綠體，求其平均值。 2. 在熒光顯微鏡下，觀察葉綠體的自發(fā)熒光時(shí)，更換濾鏡系統(tǒng)，葉綠體的顏色是否有變化？ 3. 游離葉綠體和整體細(xì)胞內(nèi)的葉綠體，在熒光顯微鏡下，其顏色和強(qiáng)度有無差異？為什么？ 思 考 題 1. 葉綠體分離的實(shí)驗(yàn)原理是什么？在分離葉綠體時(shí)應(yīng)注意些什么問題？ 2. 普通光學(xué)顯微鏡與熒光顯微鏡有何異同點(diǎn)？ 11 / 11
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