【正文】 和LC50（半數致死濃度）的計算等可參照急性經口毒性試驗()。 在預試驗的基礎上，如20只動物（雌雄各半）一次2h吸入染毒濃度10000mg/m3，在14d內無死亡，可判定LC50大于10000mg/m3。 消毒劑的毒性評價： LC50 2h大于10000mg/m3 者屬實際無毒； LC50 2h為1001 mg/m3～10000mg/m3 者屬低毒； LC50 2h為101 mg/m3～1000mg/m3 者屬中等毒； LC50 2h為10 mg/m3～100mg/m3 者屬高毒； LC50 2h小于10mg/m3 者屬劇毒。 皮膚刺激試驗 目的 檢測消毒劑對實驗動物皮膚的刺激/腐蝕作用和強度。 實驗動物 每次試驗至少需 3 只皮膚完好的健康家兔或豚鼠。 操作程序(1)在試驗前24h，用脫毛劑將家兔或豚鼠背部脊柱兩側的毛去掉，不得損傷皮膚。去毛范圍，左、右各約3cm3cm。(2)次日將受試物(（g） 的一側去毛完整皮膚上，或滴于同樣大小的2層~4 層紗布上并敷貼在一側去毛皮膚表面，然后用一層無刺激塑料膜或油紙覆蓋，再用無刺激膠布固定。另一側去毛皮膚作為空白對照(或溶劑對照)。敷貼時間為 4h。試驗結束后，用溫水或無刺激性溶劑除去殘留受試物。(3)分別于去除受試物后1h、24h和48h觀察皮膚局部反應，并按表211進行刺激反應評分。 一次破損皮膚刺激試驗（1）涂受試物前，用75％酒精清潔、消毒暴露皮膚，待酒精揮發(fā)后，用滅菌刀片或注射針頭在皮區(qū)內劃一個“井”形的破損傷口，并在該破損皮區(qū)內染毒。注意皮膚破損僅達表皮，不要傷及真皮。（2）手術前的皮膚準備，手術后受試物涂抹和局部皮膚反應的觀察，評分方法同。注意鑒別感染和原發(fā)性刺激反應的區(qū)別，若有感染可疑，應進行重復測試。（1） （1）。（2）次日將受試物[ (2)]（g）涂在一側皮膚上，另一側涂溶劑作為對照，在涂抹后4h，用水或無刺激的適宜溶劑清洗，除去殘留物。每天涂抹一次，連續(xù)涂抹14d。在每次涂抹后24h觀察結果，按表211評分。為了便于受試物的涂抹和結果觀察，必要時應剪毛。對照區(qū)的處理方法同試驗區(qū)。 評價規(guī)定在各個觀察時間點，按照表211對動物的皮膚紅斑與水腫形成情況進行評分，并分別按時間點將3只動物的評分相加，除以動物數，獲得不同時間點的皮膚刺激反應積分均值(刺激指數)。取其中最高皮膚刺激指數，按表212 評定該受試物對動物皮膚刺激強度的級別。按下列公式計算每天每只動物平均積分（刺激指數），并以表212判定皮膚刺激強度。 ∑（每只動物14d的紅斑和水腫總積分） 每天每只動物平均積分= 受試動物數14表211 皮膚刺激反應的評分標準 皮膚刺激反應 皮膚刺激反應評分 紅斑形成： 無 0 勉強可見 1 明顯 2 嚴重 3 紫紅色紅斑，并有焦痂 4 水腫形成: 無 0 勉強可見 1 皮膚隆起，輪廓清楚 2 水腫隆起約1mm 3 水腫隆起超過1mm 4 表212 皮膚刺激強度分級皮膚刺激指數 刺激強度級別 0～＜ 無刺激性 ～＜ 輕刺激性 ～＜ 中等刺激性 ～ 強刺激性 急性眼刺激試驗 目的 檢測消毒劑對實驗動物眼睛的急性刺激和腐蝕作用。 實驗動物 使用3只家兔。試驗前檢查家兔雙眼，有異常者不能用于試驗。 操作程序 （1）受試物一般為黏膜消毒或空氣消毒應用液的5 倍濃度的溶液或原液。，滴入家兔一側眼結膜囊內。另一側眼以生理鹽水作為正常對照。 （2）滴受試物后，將眼被動閉合4s，30s后用生理鹽水沖洗。于滴眼后1h、24h、48h、72h、7d、14d和21d，肉眼觀察家兔眼結膜、虹膜和角膜的損傷與恢復情況。如果72h內未出現刺激反應，或第7d或第14d，眼睛刺激反應完全恢復，即可提前終止試驗。必要時，用2% 熒光素鈉溶液或裂隙燈、放大鏡檢查角膜及虹膜變化。 評價規(guī)定按表213對家兔眼角膜、虹膜和結膜的急性刺激反應進行評分，并分別計算每只動物在三個不同觀察時間（24h、48h和72h）角膜損害、虹膜損害、結膜充血和結膜水腫四方面的“平均評分”（即每只動物的24h、48h和72h評分之和除以觀察數3）。分別以動物眼角膜、虹膜和結膜充血、水腫的平均評分和恢復時間進行，按表21表215眼刺激反應分級標準判定受試物對眼睛的刺激強度。表213 家兔急性眼刺激反應的評分標準 眼損害表現 評 分 角膜損害： 無潰瘍形成或混濁 0 散在或彌漫性混濁，虹膜清晰可見 1 半透明區(qū)易分辨，虹膜模糊不清 2 出現灰白色半透明區(qū)，虹膜細節(jié)不清，瞳孔大小勉強可見 3 角膜不透明，混濁，虹膜無法辨認 4 虹膜損害：正常 0 皺褶明顯加深，充血，腫脹，角膜周圍有中度充血，瞳孔對光仍有反應 1 出血、肉眼可見破壞，或瞳孔對光無反應 2 結膜（瞼結膜、球結膜）充血 血管正常 0 血管充血呈鮮紅色 1 血管充血呈深紅色，血管不易分辨 2 彌漫性充血呈紫紅色 3 結膜（瞼結膜、球結膜）水腫 無水腫 0 輕微水腫(包括瞬膜) 1 明顯水腫，伴有部分眼瞼外翻 2 水腫至眼瞼近半閉合 3 水腫至眼瞼大半閉合 4 表214 眼刺激性反應分級標準可逆性損傷無刺激性 3只動物的平均評分：角膜損害＜虹膜損害＜結膜充血＜2和結膜水腫＜2或3只動物中至少有2只動物的平均評分符合上述標準。另外1只動物的刺激反應在21d內完全恢復。輕刺激性 3只動物中有2只動物的平均評分：角膜損害≥1；虹膜損害≥1；結膜充血≥2；結膜水腫≥2，且7d內全部動物的刺激反應完全恢復。刺激性** 3只動物中有2只動物的平均評分：角膜損害≥1；虹膜損害≥1；結膜充血≥2；結膜水腫≥2，且21d內全部動物的刺激反應完全恢復。不可逆性損傷腐蝕性*** 至少有1只動物的角膜、虹膜或結膜的刺激反應在21d的觀察期內未完全恢復或/和在3只動物中有2只動物的平均評分：角膜損害≥3；虹膜損害≥。 注：完全恢復是指動物的眼刺激反應評分：角膜損害=0，虹膜損害=0，結膜充血=0或1， 結膜水腫=0或1。 ** 刺激性：接觸受試物后所產生的可逆性炎性反應。 *** 腐蝕性：接觸受試物后所產生的不可逆性組織損傷。表215 眼刺激性反應分級標準平均評分動物數（只）恢復時間（d）*損傷類型角膜損害＜1和虹膜損害＜1和結膜充血＜2和結膜水腫＜2≥2≤21無刺激性角膜損害≥1或虹膜損害≥1或結膜充血≥2或結膜水腫≥2≥2≤7輕刺激性≤21刺激性角膜損害≥3或虹膜損害≥≥2腐蝕性**角膜損害≥1或虹膜損害≥1或結膜充血≥1或結膜水腫≥1≥1＞21 *:恢復時間:為動物刺激反應評分恢復至角膜損害=0，虹膜損害=0，結膜充血=0或1，結膜水腫=0或1的時間。 **：腐蝕性：至少有1只動物于21d尚存在角膜粘連或血管翳，也可判為腐蝕性。 檢測消毒劑對實驗動物陰道黏膜的刺激作用和強度。 選用健康、初成年的雌性白色家兔，同一品系，~。試驗前應檢查動物陰道口有無分泌物、充血、水腫和其它損傷情況。如有炎癥或（和）損傷，應棄用。最好選擇動物的非動情期做試驗。 分為染毒組和對照組，每組3只。表216 陰道黏膜刺激反應評分標準陰道組織反應反應評分 A．上皮組織 正常，完好無損0 細胞變性或變扁平1 組織變形2 局部糜爛3 廣泛糜爛4 B．白細胞浸潤（每個高倍視野） 無0 極少 ＜25個1 輕度 26~50個2 中度 51~100個3 重度 ＞100個4 C．血管充血 無0 極少1 輕度2 中度3 重度伴血管破裂4 D．水腫 無0 極少1 輕度2 中度3 重度4刺激反應積分=A+B+C+D(1)稀釋使用的消毒劑采用黏膜消毒時應用液5倍濃度的溶液作為受試液。若應用液為原液的消毒劑則用原液作受試液。對照組采用生理鹽水。(2)將長度為8cm左右的鈍頭軟管與2ml的注射器連接。注射器和導管注滿受試液備用。每只動物各準備一套。(3)一次陰道黏膜刺激試驗的染毒方法：將動物仰面固定，暴露出會陰和陰道口。將導管用受試液或對照液濕潤后輕柔地插入陰道（4cm~5cm），并用注射器緩慢注入2ml受試液，抽出導管，完成染毒。對照組動物用生理鹽水作同樣處理。(4)多次陰道黏膜刺激試驗的染毒方法： （3））的染毒方法，每隔24h重復染毒一