【正文】 和LC50（半數(shù)致死濃度）的計(jì)算等可參照急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)()。 在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，如20只動(dòng)物（雌雄各半）一次2h吸入染毒濃度10000mg/m3，在14d內(nèi)無死亡，可判定LC50大于10000mg/m3。 消毒劑的毒性評(píng)價(jià)： LC50 2h大于10000mg/m3 者屬實(shí)際無毒； LC50 2h為1001 mg/m3～10000mg/m3 者屬低毒； LC50 2h為101 mg/m3～1000mg/m3 者屬中等毒； LC50 2h為10 mg/m3～100mg/m3 者屬高毒； LC50 2h小于10mg/m3 者屬劇毒。 皮膚刺激試驗(yàn) 目的 檢測(cè)消毒劑對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮膚的刺激/腐蝕作用和強(qiáng)度。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 每次試驗(yàn)至少需 3 只皮膚完好的健康家兔或豚鼠。 操作程序(1)在試驗(yàn)前24h，用脫毛劑將家兔或豚鼠背部脊柱兩側(cè)的毛去掉，不得損傷皮膚。去毛范圍，左、右各約3cm3cm。(2)次日將受試物(（g） 的一側(cè)去毛完整皮膚上，或滴于同樣大小的2層~4 層紗布上并敷貼在一側(cè)去毛皮膚表面，然后用一層無刺激塑料膜或油紙覆蓋，再用無刺激膠布固定。另一側(cè)去毛皮膚作為空白對(duì)照(或溶劑對(duì)照)。敷貼時(shí)間為 4h。試驗(yàn)結(jié)束后，用溫水或無刺激性溶劑除去殘留受試物。(3)分別于去除受試物后1h、24h和48h觀察皮膚局部反應(yīng)，并按表211進(jìn)行刺激反應(yīng)評(píng)分。 一次破損皮膚刺激試驗(yàn)（1）涂受試物前，用75％酒精清潔、消毒暴露皮膚，待酒精揮發(fā)后，用滅菌刀片或注射針頭在皮區(qū)內(nèi)劃一個(gè)“井”形的破損傷口，并在該破損皮區(qū)內(nèi)染毒。注意皮膚破損僅達(dá)表皮，不要傷及真皮。（2）手術(shù)前的皮膚準(zhǔn)備，手術(shù)后受試物涂抹和局部皮膚反應(yīng)的觀察，評(píng)分方法同。注意鑒別感染和原發(fā)性刺激反應(yīng)的區(qū)別，若有感染可疑，應(yīng)進(jìn)行重復(fù)測(cè)試。（1） （1）。（2）次日將受試物[ (2)]（g）涂在一側(cè)皮膚上，另一側(cè)涂溶劑作為對(duì)照，在涂抹后4h，用水或無刺激的適宜溶劑清洗，除去殘留物。每天涂抹一次，連續(xù)涂抹14d。在每次涂抹后24h觀察結(jié)果，按表211評(píng)分。為了便于受試物的涂抹和結(jié)果觀察，必要時(shí)應(yīng)剪毛。對(duì)照區(qū)的處理方法同試驗(yàn)區(qū)。 評(píng)價(jià)規(guī)定在各個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)，按照表211對(duì)動(dòng)物的皮膚紅斑與水腫形成情況進(jìn)行評(píng)分，并分別按時(shí)間點(diǎn)將3只動(dòng)物的評(píng)分相加，除以動(dòng)物數(shù)，獲得不同時(shí)間點(diǎn)的皮膚刺激反應(yīng)積分均值(刺激指數(shù))。取其中最高皮膚刺激指數(shù)，按表212 評(píng)定該受試物對(duì)動(dòng)物皮膚刺激強(qiáng)度的級(jí)別。按下列公式計(jì)算每天每只動(dòng)物平均積分（刺激指數(shù)），并以表212判定皮膚刺激強(qiáng)度。 ∑（每只動(dòng)物14d的紅斑和水腫總積分） 每天每只動(dòng)物平均積分= 受試動(dòng)物數(shù)14表211 皮膚刺激反應(yīng)的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 皮膚刺激反應(yīng) 皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分 紅斑形成： 無 0 勉強(qiáng)可見 1 明顯 2 嚴(yán)重 3 紫紅色紅斑，并有焦痂 4 水腫形成: 無 0 勉強(qiáng)可見 1 皮膚隆起，輪廓清楚 2 水腫隆起約1mm 3 水腫隆起超過1mm 4 表212 皮膚刺激強(qiáng)度分級(jí)皮膚刺激指數(shù) 刺激強(qiáng)度級(jí)別 0～＜ 無刺激性 ～＜ 輕刺激性 ～＜ 中等刺激性 ～ 強(qiáng)刺激性 急性眼刺激試驗(yàn) 目的 檢測(cè)消毒劑對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物眼睛的急性刺激和腐蝕作用。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 使用3只家兔。試驗(yàn)前檢查家兔雙眼，有異常者不能用于試驗(yàn)。 操作程序 （1）受試物一般為黏膜消毒或空氣消毒應(yīng)用液的5 倍濃度的溶液或原液。，滴入家兔一側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)。另一側(cè)眼以生理鹽水作為正常對(duì)照。 （2）滴受試物后，將眼被動(dòng)閉合4s，30s后用生理鹽水沖洗。于滴眼后1h、24h、48h、72h、7d、14d和21d，肉眼觀察家兔眼結(jié)膜、虹膜和角膜的損傷與恢復(fù)情況。如果72h內(nèi)未出現(xiàn)刺激反應(yīng)，或第7d或第14d，眼睛刺激反應(yīng)完全恢復(fù)，即可提前終止試驗(yàn)。必要時(shí)，用2% 熒光素鈉溶液或裂隙燈、放大鏡檢查角膜及虹膜變化。 評(píng)價(jià)規(guī)定按表213對(duì)家兔眼角膜、虹膜和結(jié)膜的急性刺激反應(yīng)進(jìn)行評(píng)分，并分別計(jì)算每只動(dòng)物在三個(gè)不同觀察時(shí)間（24h、48h和72h）角膜損害、虹膜損害、結(jié)膜充血和結(jié)膜水腫四方面的“平均評(píng)分”（即每只動(dòng)物的24h、48h和72h評(píng)分之和除以觀察數(shù)3）。分別以動(dòng)物眼角膜、虹膜和結(jié)膜充血、水腫的平均評(píng)分和恢復(fù)時(shí)間進(jìn)行，按表21表215眼刺激反應(yīng)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)判定受試物對(duì)眼睛的刺激強(qiáng)度。表213 家兔急性眼刺激反應(yīng)的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 眼損害表現(xiàn) 評(píng) 分 角膜損害： 無潰瘍形成或混濁 0 散在或彌漫性混濁，虹膜清晰可見 1 半透明區(qū)易分辨，虹膜模糊不清 2 出現(xiàn)灰白色半透明區(qū)，虹膜細(xì)節(jié)不清，瞳孔大小勉強(qiáng)可見 3 角膜不透明，混濁，虹膜無法辨認(rèn) 4 虹膜損害：正常 0 皺褶明顯加深，充血，腫脹，角膜周圍有中度充血，瞳孔對(duì)光仍有反應(yīng) 1 出血、肉眼可見破壞，或瞳孔對(duì)光無反應(yīng) 2 結(jié)膜（瞼結(jié)膜、球結(jié)膜）充血 血管正常 0 血管充血呈鮮紅色 1 血管充血呈深紅色，血管不易分辨 2 彌漫性充血呈紫紅色 3 結(jié)膜（瞼結(jié)膜、球結(jié)膜）水腫 無水腫 0 輕微水腫(包括瞬膜) 1 明顯水腫，伴有部分眼瞼外翻 2 水腫至眼瞼近半閉合 3 水腫至眼瞼大半閉合 4 表214 眼刺激性反應(yīng)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)可逆性損傷無刺激性 3只動(dòng)物的平均評(píng)分：角膜損害＜虹膜損害＜結(jié)膜充血＜2和結(jié)膜水腫＜2或3只動(dòng)物中至少有2只動(dòng)物的平均評(píng)分符合上述標(biāo)準(zhǔn)。另外1只動(dòng)物的刺激反應(yīng)在21d內(nèi)完全恢復(fù)。輕刺激性 3只動(dòng)物中有2只動(dòng)物的平均評(píng)分：角膜損害≥1；虹膜損害≥1；結(jié)膜充血≥2；結(jié)膜水腫≥2，且7d內(nèi)全部動(dòng)物的刺激反應(yīng)完全恢復(fù)。刺激性** 3只動(dòng)物中有2只動(dòng)物的平均評(píng)分：角膜損害≥1；虹膜損害≥1；結(jié)膜充血≥2；結(jié)膜水腫≥2，且21d內(nèi)全部動(dòng)物的刺激反應(yīng)完全恢復(fù)。不可逆性損傷腐蝕性*** 至少有1只動(dòng)物的角膜、虹膜或結(jié)膜的刺激反應(yīng)在21d的觀察期內(nèi)未完全恢復(fù)或/和在3只動(dòng)物中有2只動(dòng)物的平均評(píng)分：角膜損害≥3；虹膜損害≥。 注：完全恢復(fù)是指動(dòng)物的眼刺激反應(yīng)評(píng)分：角膜損害=0，虹膜損害=0，結(jié)膜充血=0或1， 結(jié)膜水腫=0或1。 ** 刺激性：接觸受試物后所產(chǎn)生的可逆性炎性反應(yīng)。 *** 腐蝕性：接觸受試物后所產(chǎn)生的不可逆性組織損傷。表215 眼刺激性反應(yīng)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)平均評(píng)分動(dòng)物數(shù)（只）恢復(fù)時(shí)間（d）*損傷類型角膜損害＜1和虹膜損害＜1和結(jié)膜充血＜2和結(jié)膜水腫＜2≥2≤21無刺激性角膜損害≥1或虹膜損害≥1或結(jié)膜充血≥2或結(jié)膜水腫≥2≥2≤7輕刺激性≤21刺激性角膜損害≥3或虹膜損害≥≥2腐蝕性**角膜損害≥1或虹膜損害≥1或結(jié)膜充血≥1或結(jié)膜水腫≥1≥1＞21 *:恢復(fù)時(shí)間:為動(dòng)物刺激反應(yīng)評(píng)分恢復(fù)至角膜損害=0，虹膜損害=0，結(jié)膜充血=0或1，結(jié)膜水腫=0或1的時(shí)間。 **：腐蝕性：至少有1只動(dòng)物于21d尚存在角膜粘連或血管翳，也可判為腐蝕性。 檢測(cè)消毒劑對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物陰道黏膜的刺激作用和強(qiáng)度。 選用健康、初成年的雌性白色家兔，同一品系，~。試驗(yàn)前應(yīng)檢查動(dòng)物陰道口有無分泌物、充血、水腫和其它損傷情況。如有炎癥或（和）損傷，應(yīng)棄用。最好選擇動(dòng)物的非動(dòng)情期做試驗(yàn)。 分為染毒組和對(duì)照組，每組3只。表216 陰道黏膜刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)陰道組織反應(yīng)反應(yīng)評(píng)分 A．上皮組織 正常，完好無損0 細(xì)胞變性或變扁平1 組織變形2 局部糜爛3 廣泛糜爛4 B．白細(xì)胞浸潤(rùn)（每個(gè)高倍視野） 無0 極少 ＜25個(gè)1 輕度 26~50個(gè)2 中度 51~100個(gè)3 重度 ＞100個(gè)4 C．血管充血 無0 極少1 輕度2 中度3 重度伴血管破裂4 D．水腫 無0 極少1 輕度2 中度3 重度4刺激反應(yīng)積分=A+B+C+D(1)稀釋使用的消毒劑采用黏膜消毒時(shí)應(yīng)用液5倍濃度的溶液作為受試液。若應(yīng)用液為原液的消毒劑則用原液作受試液。對(duì)照組采用生理鹽水。(2)將長(zhǎng)度為8cm左右的鈍頭軟管與2ml的注射器連接。注射器和導(dǎo)管注滿受試液備用。每只動(dòng)物各準(zhǔn)備一套。(3)一次陰道黏膜刺激試驗(yàn)的染毒方法：將動(dòng)物仰面固定，暴露出會(huì)陰和陰道口。將導(dǎo)管用受試液或?qū)φ找簼駶?rùn)后輕柔地插入陰道（4cm~5cm），并用注射器緩慢注入2ml受試液，抽出導(dǎo)管，完成染毒。對(duì)照組動(dòng)物用生理鹽水作同樣處理。(4)多次陰道黏膜刺激試驗(yàn)的染毒方法： （3））的染毒方法，每隔24h重復(fù)染毒一