【正文】 ：（1）含糖培養(yǎng)基：113℃， 20~30min（2）一般培養(yǎng)基：121℃，15~30min濕熱比干熱滅菌好的原因：1 細(xì)菌蛋白質(zhì)在有水的情況下易于凝固變性 2 濕熱穿透力強(qiáng)3 濕熱蒸氣有潛熱存在，水蒸氣凝固成水釋放潛熱，迅速提高被滅菌物體的溫度(三) 化學(xué)方法抗微生物劑抗性強(qiáng)弱的指標(biāo)（minimum inhibitory concentration（MIC））：評(píng)定某化學(xué)藥物藥效強(qiáng)弱的指標(biāo)，指在一定條件下，某化學(xué)藥劑抑制特定微生物的最低濃度。（50% lethal dose,LD50)：評(píng)定某化學(xué)藥物毒性強(qiáng)弱的指標(biāo)，指在一定條件下，某化學(xué)藥劑殺死50%試驗(yàn)動(dòng)物的劑量。第六章 微生物的遺傳與變異 [基本要求]1．了解：DNA損傷的修復(fù)；突變株的類型及實(shí)際應(yīng)用。2．掌握：遺傳、變異的概念；遺傳物質(zhì)在微生物中的存在形式；基因符號(hào)及有關(guān)術(shù)語(yǔ)；轉(zhuǎn)座因子概念。3．重點(diǎn)掌握：質(zhì)粒的概念、基本特性及重要質(zhì)粒；基因突變的概念，特性，分子機(jī)制；轉(zhuǎn)化、接合、轉(zhuǎn)導(dǎo)的概念、條件和過(guò)程；營(yíng)養(yǎng)缺陷突變株及應(yīng)用。遺傳：親代與子代相似親代將自身的一整套遺傳物質(zhì)穩(wěn)定地傳遞給子代的功能。變異：生物體在外因或內(nèi)因的作用下，引起遺傳物質(zhì)結(jié)構(gòu)或數(shù)量的改變，亦即遺傳型的改變。遺傳型（genotype）：又稱基因型，生物個(gè)體含有的全部遺傳基因所攜帶的遺傳信息。表型（phenotype）：又稱表現(xiàn)型，指生物體所具有的外表特征和內(nèi)在特性的總和，是其遺傳型在合適環(huán)境下通過(guò)代謝和發(fā)育而得到的具體表現(xiàn)。表型由遺傳型所決定，但也和環(huán)境有關(guān)。遺傳性變異（基因型變異）：微生物的基因型發(fā)生改變，可遺傳。表型飾變：相同基因型的微生物在不同環(huán)境下表現(xiàn)不同的表型，是暫時(shí)的、非遺傳性的改變。通常表現(xiàn)為全部個(gè)體的行為。(橘生淮南則為橘，生于淮北則為枳。)；粘質(zhì)沙雷氏菌，25℃培養(yǎng)時(shí)產(chǎn)生深紅色的靈桿菌素。 第一節(jié)遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)一、核物質(zhì)——染色質(zhì)、染色體真核生物的遺傳物質(zhì)：DNA→核小體→纖絲→螺線管→超螺旋體→染色體①核小體由約200bp DNA（2nm）和5種組蛋白構(gòu)成；②核小體排列成串珠狀染色質(zhì)纖絲（10nm）；③染色質(zhì)纖絲形成30nm的螺線管（solennoid）；④螺線管組成伸展的大環(huán)狀結(jié)構(gòu)（300nm）；⑤大環(huán)狀結(jié)構(gòu)構(gòu)成復(fù)雜的染色質(zhì)形態(tài)。染色質(zhì)：纖維狀結(jié)構(gòu)，也叫染色絲，由最基本的單位（核小體）成串排列而成。真核細(xì)胞染色體在細(xì)胞生活周期中，大部分時(shí)間是以染色質(zhì)的形式存在。二、原核生物的質(zhì)粒1.定義和特點(diǎn)質(zhì)粒：一種獨(dú)立于染色體外，能進(jìn)行自主復(fù)制的細(xì)胞質(zhì)遺傳因子，主要存在于各種微生物細(xì)胞中。特點(diǎn)如下：A 共價(jià)，閉合，環(huán)狀，雙鏈cccdsDNA，常見(jiàn)的有超螺旋、開(kāi)環(huán)兩種存在形式； B 自我復(fù)制（嚴(yán)緊型質(zhì)粒，松弛型質(zhì)粒）； C 不相容性（干擾近緣質(zhì)粒）；D 非細(xì)胞生長(zhǎng)所必需；E 質(zhì)?？勺孕邢Щ蛉斯とコ?；F 可轉(zhuǎn)移性，質(zhì)?？蓮囊粋€(gè)細(xì)菌轉(zhuǎn)移到另一個(gè)細(xì)菌。（接合型質(zhì)粒）2.質(zhì)粒的主要類型（1）致育因子（Fertility factor，F(xiàn)因子）：又稱F質(zhì)粒，其大小約100kb，這是最早發(fā)現(xiàn)的一種與大腸桿菌的有性生殖現(xiàn)象（接合作用）有關(guān)的質(zhì)粒。攜帶F質(zhì)粒的菌株稱為F+菌株（相當(dāng)于雄性），無(wú)F質(zhì)粒的菌株稱為F菌株（相當(dāng)于雌性）。F因子能以游離狀態(tài)(F+)和以與染色體相結(jié)合的狀態(tài)(Hfr)存在于細(xì)胞中，所以又稱之為附加體(episome)。（2）抗性因子（Resistance factor，R因子）：包括抗藥性和抗重金屬二大類?？剐再|(zhì)粒在細(xì)菌間的傳遞（接合型抗藥質(zhì)粒）是細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性的重要原因之一。（3）Col質(zhì)粒：該質(zhì)粒含有編碼大腸菌素的基因，大腸菌素是一種細(xì)菌蛋白，只殺死近緣且不含Col質(zhì)粒的菌株（抑制近親），而宿主不受其產(chǎn)生的細(xì)菌素的影響。 （4）代謝質(zhì)粒： 攜帶有能降解某些基質(zhì)的酶的基因，尤其對(duì)一些有毒化合物進(jìn)行降解，在環(huán)保方面有重要意義。因此這類質(zhì)粒也常被稱為降解質(zhì)粒。三、轉(zhuǎn)座因子（transposable element）又稱跳躍基因，位于染色體或質(zhì)粒上的一段能改變自身位置的DNA序列，廣泛分布于原核和真核細(xì)胞中。包括插入序列IS，Tn轉(zhuǎn)座子，轉(zhuǎn)座噬菌體。第二節(jié)基因突變和誘變育種1.營(yíng)養(yǎng)缺陷型（auxotroph）某一野生型菌株因發(fā)生基因突變而喪失合成一種或幾種生長(zhǎng)因子(堿基或氨基酸)的能力，只有從周圍環(huán)境或培養(yǎng)基中獲得這些營(yíng)養(yǎng)或其前體物（precursor）才能正常生長(zhǎng)繁殖的變異類型，稱為營(yíng)養(yǎng)缺陷型。營(yíng)養(yǎng)缺陷型的表示方法：167。 基因型：所需營(yíng)養(yǎng)物的前三個(gè)英文小寫斜體字母表示：hisC（組氨酸缺陷型，其中的大寫字母C同一表型中不同基因的突變）167。 表型：所需營(yíng)養(yǎng)物的前三個(gè)英文字母，但第1個(gè)字母大寫，且不用斜體：HisC在具體使用時(shí)多用hisC和hisC+ ，分別表示缺陷型和野生型。缺陷型在選擇培養(yǎng)基（一般為基本培養(yǎng)基）上不生長(zhǎng),為負(fù)選擇標(biāo)記。2.抗性突變型（resistant mutant）指野生型菌株因發(fā)生基因突變，對(duì)某化學(xué)藥物或致死物理因子，產(chǎn)生抗性的變異類型。表示方法：strr：“r”的上標(biāo)表示抗性；strs：“s”的上標(biāo)表示對(duì)鏈霉素敏感。3.條件致死突變型（conditional lethal mutant）某菌株或病毒經(jīng)基因突變后，在某種條件下可正常地生長(zhǎng)、繁殖并呈現(xiàn)其固有的表型，而在另一種條件下卻無(wú)法生長(zhǎng)、繁殖，這種突變類型稱為條件致死突變型。Ts突變株即溫度敏感突變株（temperature sensitive mutant，Ts mutant）是一類典型的條件致死突變株。4.形態(tài)突變型（morphological mutant）指由于突變而引起的個(gè)體或菌落形態(tài)的變異。5.產(chǎn)量突變型（metabolite quantitative mutant）基因突變后，在代謝產(chǎn)物產(chǎn)量上明顯有別于原始菌株的突變株，稱為產(chǎn)量突變型。誘變劑與致癌物質(zhì)——Ames試驗(yàn)具體操作：檢測(cè)鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhmurium)組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株(his)的回復(fù)突變率，his菌株在不含組氨酸的培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)，或只有極少數(shù)的自發(fā)回復(fù)突變子生長(zhǎng)，如果回復(fù)突變率因某種化學(xué)誘變劑(或待測(cè)物)的作用而增加，那么這種化學(xué)藥物可判斷為具有致癌性。 第三節(jié)基因重組凡把兩個(gè)不同性狀個(gè)體內(nèi)的遺傳基因轉(zhuǎn)移到一起，經(jīng)過(guò)遺傳分子間的重新組合，形成新遺傳型個(gè)體的方式，稱為基因重組（gene rebination）或遺傳重組（genetic rebination），簡(jiǎn)稱重組。一、原核生物的基因重組（一）轉(zhuǎn)化（transformation）受體菌（recipient cell）直接吸收供體菌（donor cell）的DNA片段而獲得后者部分遺傳性狀的現(xiàn)象，稱為轉(zhuǎn)化。通過(guò)轉(zhuǎn)化方式而形成的雜種后代，稱轉(zhuǎn)化子（transformant）。感受態(tài)（petence）：指受體細(xì)胞最易接受外源DNA片段并能實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化的一種生理狀態(tài)。感受態(tài)細(xì)胞（petent cell）具有攝取外源DNA能力的細(xì)胞。Ca2＋、Mg2＋。調(diào)節(jié)感受態(tài)的一類特異蛋白稱感受態(tài)因子。（二）轉(zhuǎn)染（transfection）指用提純的病毒核酸（DNA或RNA）去感染其宿主細(xì)胞或其原生質(zhì)體，可增殖出一群正常病毒后代的現(xiàn)象。噬菌體DNA被感受態(tài)細(xì)胞攝取，而非感染途徑，產(chǎn)生有活性的病毒顆粒，現(xiàn)在把DNA轉(zhuǎn)移至動(dòng)物細(xì)胞的過(guò)程也稱轉(zhuǎn)染。（三）接合（conjugation，mating）供體菌和受體菌通過(guò)細(xì)胞直接接觸，遺傳物質(zhì)自供體菌轉(zhuǎn)移入受體菌，使后者獲得前者的部分遺傳性狀，這種基因轉(zhuǎn)移方式稱為接合。F因子的四種細(xì)胞形式252。F菌株，不含F(xiàn)因子，沒(méi)有性菌毛，但可以通過(guò)接合作用接收F因子而變成雄性菌株（F+）；252。F+菌株，F(xiàn)因子獨(dú)立存在，細(xì)胞表面有性菌毛。252。Hfr菌株，F(xiàn)因子插入到染色體DNA上，細(xì)胞表面有性菌毛。252。F′菌株，Hfr菌株內(nèi)的F因子因不正常切割而脫離染色體時(shí)，形成游離的但攜帶一小段染色體基因的F因子，特稱為F′因細(xì)胞表面同樣有性菌毛。（四）轉(zhuǎn)導(dǎo)（transduction）以噬菌體為媒介，將供體菌的DNA片段攜帶到受體細(xì)胞，通過(guò)交換與整合，從而使受體菌獲得供體菌的部分遺傳性狀。能將一個(gè)細(xì)菌宿主的部分染色體或質(zhì)粒DNA帶到另一個(gè)細(xì)菌的噬菌體稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體。細(xì)菌轉(zhuǎn)導(dǎo)的二種類型：普遍轉(zhuǎn)導(dǎo)：通過(guò)極少數(shù)完全缺陷噬菌體對(duì)供體菌任何小片段DNA進(jìn)行“誤包”，而將其遺傳性狀傳遞給受體菌的現(xiàn)象，稱為普遍轉(zhuǎn)導(dǎo)。局限轉(zhuǎn)導(dǎo)：局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)顆粒攜帶特定的染色體片段并將固定的個(gè)別基因?qū)胧荏w，故稱為局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)。溶源轉(zhuǎn)變：一個(gè)與轉(zhuǎn)導(dǎo)相似又不同的現(xiàn)象。溫和噬菌體感染細(xì)胞后使之發(fā)生溶源化，因噬菌體的基因整合到宿主染色體上，而使后者獲得了新性狀的現(xiàn)象。溶源轉(zhuǎn)變與轉(zhuǎn)導(dǎo)的不同？a）不攜帶任何供體菌的基因；b）這種噬菌體是完整的，而不是缺陷的；