【正文】 一 、 免疫學診斷 (一 )免疫診斷試劑 免疫學診斷是應用已知診斷試劑 (抗體或抗原 )，對患病動物進行抗原或抗體的測定，從而診斷疾病。 診斷抗原 ：是利用細菌或病毒經(jīng)過培養(yǎng)后，將菌體 (病毒 )滅活 (或?qū)⒕w裂解 )后制成。 診斷血清： 是用抗原免疫動物而制成的，一般采用給動物多次注射抗原，然后采集免疫動物血液，分離血清，加入一定防腐劑而制成。 免疫血清經(jīng)過提純后得到 IgG，再用酶、熒光染料、放射性同位素標記，制成標記抗體。 (二 )常用免疫血清學診斷技術 常用免疫血清學診斷技術的類型 （ 1） 凝聚性反應 ：凝集試驗和沉淀試驗 （ 2） 標記抗體技術 ：熒光抗體技術、酶標抗體技術等 （ 3） 有補體參與的反應 ：如補體結合反應 （ 4） 中和反應 ：如病毒中和試驗、毒素中和試驗 凝集試驗 酶標抗體技術 A. 凝集反應 當顆粒性抗原與其相應抗血清混合時 ， 在一定濃度的電解質(zhì)環(huán)境中 ， 抗原凝集成大小不等的凝集塊 ， 叫 凝集反應 。 凝集反應廣泛地應用于疾病的診斷和各種抗原性質(zhì)的分析。即可用已知免疫血清來檢查未知抗原，亦可用已知抗原檢測特異性抗體。 凝集試驗的種類 （ 1）直接凝集試驗： 顆粒性抗原 （ 2）間接凝集試驗： 可溶性抗原 （ 3）病毒的血凝與血凝抑制試驗 （ 4）乳膠凝集試驗 可溶性抗原與相應抗體混合，在電解質(zhì)存在下，兩者比例適合，即可有沉淀物出現(xiàn)，叫 沉淀反應 (Precipitation)。 由于沉淀反應抗原多系膠體溶液。沉淀物主要是由抗體蛋白所組成。 為了求得抗原與抗體的適宜比例 ， 保證有足夠的抗體 ， 而且抗原分子小 ，具有較大的反應面積 ， 因此操作上通常是稀釋抗原 ， 不稀釋抗體 。 沉淀反應的種類有 環(huán)狀沉淀試驗 、 絮狀沉淀試驗 、 瓊脂擴散試驗 及 免疫電泳試驗 等 。 B. 沉淀試驗 C. 酶標抗體技術 (Enzymelabelled antibody technique) 是根據(jù)抗原抗體反應的特異性和酶催化反應的高敏感性而建立起來的免疫檢測技術。 原理： 酶標記抗體，既不影響抗體的免疫反應性，也不改變酶的催化活性；加入酶底物后，酶可使其（供氫體）由無色的還原型轉(zhuǎn)化為有色的氧化型。這種有色反應的顏色變化與樣本中抗原或抗體的量成正比，且能用分光光度計進行測定。 最常用的是： 辣根過氧化物酶 和 堿性磷酸酶 D. 熒光抗體標記技術 (Fluoresentlabelled antibody technique） 是應用熒光素對抗體或抗原進行標記，然后用熒光顯微鏡觀察所標記的熒光以分析相應抗原或抗體的一種方法。 原理 : 熒光素在超低濃度時可被短波光源激發(fā)，在熒光顯微鏡下可觀察到熒光。 熒光素 : 能產(chǎn)生明顯熒光并作染料用的有機化學物質(zhì)，稱為熒光素，如異硫氰酸熒光素 (FITC)、四乙基羅丹明 (RB200)和四甲基異硫氰酸羅丹明 (TMRITC)。 操作過程： （ 1）標本制備：涂片、壓片；冰凍切片、石蠟切片等 （ 2）熒光抗體染色：有直接法和間接法 （ 3）熒光顯微鏡觀察：光源為高壓汞燈；要滴加緩沖甘油 免疫血清型學診斷技術的特點 (1) 特異性與交叉性 (2) 可逆性，分子表面結合 (3) 比例適當性 (4) 存在二階段性， 即結合階段和可見階段 (三 )免疫診斷技術的應用 ： 利用抗原抗體反應的特異性和敏感性來診斷疾病 。用已知抗原診斷液 ， 檢查患病動物血清中是否存在有相應的特異性抗體 ， 借以診斷傳染病 。 亦可用已知診斷血清或標記抗體 ， 檢查動物體內(nèi)及排泄物中是否存在特異性抗原 ， 用以檢查病原體的存在 。 ： 用已知抗血清或不同型的單因子血清，對分離的病原菌進行鑒定，以確診該病原。用單因子血清分析細菌的抗原組分，確定細菌的類型，如用 沙門氏菌 的單因子血清分析待檢沙門氏菌的菌體抗原及鞭毛抗原的種類，從而確定該菌屬何種 沙門氏菌 。 二 ． 免疫預防 1. 生物制品 ： 利用微生物、寄生蟲或其代謝產(chǎn)物制成的用于預防、診斷或治療傳 染病或寄生蟲病的制劑。 包括： 疫苗、診斷試劑 和 免疫血清 。 下面主要介紹 疫苗。 2. 動物機體獲得對某種傳染病免疫力的途徑 天然主動免疫： 自然感染病愈 (免疫時間長 ) 人工主動免疫： 接種疫苗 (較長 ) 天然被動免疫： 幼畜從初乳獲得母源抗體 (短 )； 幼魚從母卵中獲得母源抗體 (短 ) 人工被動免疫： 人工注射免疫血清或高免蛋黃 (短 ) 疫苗的種類 疫苗的概念：給動物進行人工主動免疫的生物制品 疫 苗 種 類 滅活疫苗 弱毒疫苗 類毒素 多價苗 多聯(lián)苗等 傳統(tǒng)疫苗 新型疫苗 亞單位疫苗 基因工程疫苗 抗獨特型抗體 合成肽苗等 A. 弱毒疫苗 研制： (1) 從自然界中篩選弱毒株如新城疫 Ⅱ 系弱毒苗； (2) 將強毒株致弱后成為無致病性的弱毒株 特點： （ 1）注射后可在動物體內(nèi)短期繁殖； （ 2）可誘導體液免疫和細胞免疫，刺激機體產(chǎn)生干擾素； （ 3）用量少，不需要佐劑，成本低，接種方便； （ 4）研制較長，需凍干冷藏保存， 有毒力返強潛在危險 。 （ 1）傳統(tǒng)疫苗 B. 滅活疫苗 研制 ： 選擇毒力強、免疫原性好的毒株大量培養(yǎng)，加 %左右甲醛滅 活，保留免疫原性 +佐劑。 特點： （ 1）研制時間較短，安全，可常溫保存； （ 2）只產(chǎn)生體液免疫，免疫效果比弱毒疫苗差； （ 3）用量較大，須加入適當?shù)淖魟? SARS病毒滅活疫苗 C. 類毒素 (外毒素的滅活苗 ) 研制： 產(chǎn)毒細菌經(jīng)液體大量培養(yǎng)后去除菌體，提取外毒素，用 %甲醛滅活后成 類毒素，加佐劑即成。 應用： (1)直接作疫苗注射 (2)反復注射免疫馬匹，制備抗毒素血清。 破傷風類毒素 D. 多價苗 同種病原微生物的多種血清型毒株制成的疫苗，如大腸桿菌多價苗等。 E. 多聯(lián)苗 不同種病原微生物聯(lián)合制成的疫苗。 特點： 一針防多種病，節(jié)約人力、物力 注意： 疫苗不能任意混合注射，可能互相干擾。 草魚四聯(lián)苗 草魚出血病毒 熒光假單胞菌 腸型點狀產(chǎn)氣單胞菌 魚害粘球菌 （ 2）新型疫苗 A. 亞單位疫苗： 提取細菌或病毒結構中的有效抗原 +佐劑， 如大腸桿菌菌毛 K88苗等。 特點： 安全，但成本高 B. 基因工程疫苗 a. 基因工程亞單位苗 是用 DNA重組技術，將編碼病原微生物保護性抗原基因?qū)胧荏w菌（如大腸桿菌）或細胞，使其在受體細胞中高效表達，分泌保護性抗原肽鏈，然后提取保護性抗原肽鏈，加入佐劑即制成基因工程亞單位疫苗，如 大腸桿菌菌毛基因工程疫苗 。 基因工程乙肝疫苗 b. 基因工程活載體苗 是用基因工程技術將保護性抗原基因 （ 目的基因 ） 轉(zhuǎn)移到載體中 ， 使之表達 。痘病毒 、 腺病毒和皰疹病毒等都可以用作載體 。 國外已研制出 以腺病毒為載體的乙肝疫苗 和 以皰疹病毒為載體的新城疫疫苗 等 。 腺病毒載體乙肝疫苗 c. 基因缺失苗： 是用基因工程技術將強毒株毒力相關的基因切除構建的活疫苗 。 此種疫苗安全性好 ， 不易返祖；其免疫接種與強毒感染相似 ， 機體可對病毒的多種抗原產(chǎn)生免疫應答；免疫力堅實 ， 免疫期長 ， 尤其是適于局部接種 ， 誘導產(chǎn)生黏膜免疫力 ，因而是較理想的疫苗 。 目前已有多種基因缺失疫苗問世 ， 豬偽狂犬病基因缺失疫苗 已商品化并普遍使用 。 豬偽狂犬病基因缺失疫苗 魚類疫苗的免疫途徑 A、注射免疫接種 B、浸泡免疫接種 C、噴霧免疫接種 D、口服免疫接種 確保疫苗免疫效果的措施 （ 1）熟悉疫苗種類和功效 （ 2）正確選擇疫苗 （ 3）制定科學的免疫程序 （ 4）定期抽查免疫后抗體水平 （ 5）配合良好的飼養(yǎng)管理 三 、 免疫治療 高免疫血清及免疫球蛋白的應用 注射高免血清或病愈動物血清，能起到治療作用。 如：用抗毒素治療；用抗病毒高免血清治療病毒病。 用弱毒疫苗緊急接種治療病毒病 原則：早期、大量、重復應用和防止過敏反應 第六節(jié)復習思考題 1．診斷試劑的種類與應用 。 2．免疫血清學診斷技術的類型。 3．凝集反應與沉淀反應的概念。 4．酶標抗體技術的原理及常用標記酶。 5．熒光抗體技術的原理及常用熒光素。 6. 免疫血清學診斷技術的特點 7．生物制品的概念； 8．動物機體獲得免疫力的途徑； 9．疫苗的種類及其特點； 10．確保疫苗免疫效果的措施； 11．疫苗免疫失敗的可能原因。 謝謝大家