【正文】 一 、 免疫學(xué)診斷 (一 )免疫診斷試劑 免疫學(xué)診斷是應(yīng)用已知診斷試劑 (抗體或抗原 )，對(duì)患病動(dòng)物進(jìn)行抗原或抗體的測(cè)定，從而診斷疾病。 診斷抗原 ：是利用細(xì)菌或病毒經(jīng)過培養(yǎng)后，將菌體 (病毒 )滅活 (或?qū)⒕w裂解 )后制成。 診斷血清： 是用抗原免疫動(dòng)物而制成的，一般采用給動(dòng)物多次注射抗原，然后采集免疫動(dòng)物血液，分離血清，加入一定防腐劑而制成。 免疫血清經(jīng)過提純后得到 IgG，再用酶、熒光染料、放射性同位素標(biāo)記，制成標(biāo)記抗體。 (二 )常用免疫血清學(xué)診斷技術(shù) 常用免疫血清學(xué)診斷技術(shù)的類型 （ 1） 凝聚性反應(yīng) ：凝集試驗(yàn)和沉淀試驗(yàn) （ 2） 標(biāo)記抗體技術(shù) ：熒光抗體技術(shù)、酶標(biāo)抗體技術(shù)等 （ 3） 有補(bǔ)體參與的反應(yīng) ：如補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng) （ 4） 中和反應(yīng) ：如病毒中和試驗(yàn)、毒素中和試驗(yàn) 凝集試驗(yàn) 酶標(biāo)抗體技術(shù) A. 凝集反應(yīng) 當(dāng)顆粒性抗原與其相應(yīng)抗血清混合時(shí) ， 在一定濃度的電解質(zhì)環(huán)境中 ， 抗原凝集成大小不等的凝集塊 ， 叫 凝集反應(yīng) 。 凝集反應(yīng)廣泛地應(yīng)用于疾病的診斷和各種抗原性質(zhì)的分析。即可用已知免疫血清來檢查未知抗原，亦可用已知抗原檢測(cè)特異性抗體。 凝集試驗(yàn)的種類 （ 1）直接凝集試驗(yàn)： 顆粒性抗原 （ 2）間接凝集試驗(yàn)： 可溶性抗原 （ 3）病毒的血凝與血凝抑制試驗(yàn) （ 4）乳膠凝集試驗(yàn) 可溶性抗原與相應(yīng)抗體混合，在電解質(zhì)存在下，兩者比例適合，即可有沉淀物出現(xiàn)，叫 沉淀反應(yīng) (Precipitation)。 由于沉淀反應(yīng)抗原多系膠體溶液。沉淀物主要是由抗體蛋白所組成。 為了求得抗原與抗體的適宜比例 ， 保證有足夠的抗體 ， 而且抗原分子小 ，具有較大的反應(yīng)面積 ， 因此操作上通常是稀釋抗原 ， 不稀釋抗體 。 沉淀反應(yīng)的種類有 環(huán)狀沉淀試驗(yàn) 、 絮狀沉淀試驗(yàn) 、 瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) 及 免疫電泳試驗(yàn) 等 。 B. 沉淀試驗(yàn) C. 酶標(biāo)抗體技術(shù) (Enzymelabelled antibody technique) 是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶催化反應(yīng)的高敏感性而建立起來的免疫檢測(cè)技術(shù)。 原理： 酶標(biāo)記抗體，既不影響抗體的免疫反應(yīng)性，也不改變酶的催化活性；加入酶底物后，酶可使其（供氫體）由無色的還原型轉(zhuǎn)化為有色的氧化型。這種有色反應(yīng)的顏色變化與樣本中抗原或抗體的量成正比，且能用分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定。 最常用的是： 辣根過氧化物酶 和 堿性磷酸酶 D. 熒光抗體標(biāo)記技術(shù) (Fluoresentlabelled antibody technique） 是應(yīng)用熒光素對(duì)抗體或抗原進(jìn)行標(biāo)記，然后用熒光顯微鏡觀察所標(biāo)記的熒光以分析相應(yīng)抗原或抗體的一種方法。 原理 : 熒光素在超低濃度時(shí)可被短波光源激發(fā)，在熒光顯微鏡下可觀察到熒光。 熒光素 : 能產(chǎn)生明顯熒光并作染料用的有機(jī)化學(xué)物質(zhì)，稱為熒光素，如異硫氰酸熒光素 (FITC)、四乙基羅丹明 (RB200)和四甲基異硫氰酸羅丹明 (TMRITC)。 操作過程： （ 1）標(biāo)本制備：涂片、壓片；冰凍切片、石蠟切片等 （ 2）熒光抗體染色：有直接法和間接法 （ 3）熒光顯微鏡觀察：光源為高壓汞燈；要滴加緩沖甘油 免疫血清型學(xué)診斷技術(shù)的特點(diǎn) (1) 特異性與交叉性 (2) 可逆性，分子表面結(jié)合 (3) 比例適當(dāng)性 (4) 存在二階段性， 即結(jié)合階段和可見階段 (三 )免疫診斷技術(shù)的應(yīng)用 ： 利用抗原抗體反應(yīng)的特異性和敏感性來診斷疾病 。用已知抗原診斷液 ， 檢查患病動(dòng)物血清中是否存在有相應(yīng)的特異性抗體 ， 借以診斷傳染病 。 亦可用已知診斷血清或標(biāo)記抗體 ， 檢查動(dòng)物體內(nèi)及排泄物中是否存在特異性抗原 ， 用以檢查病原體的存在 。 ： 用已知抗血清或不同型的單因子血清，對(duì)分離的病原菌進(jìn)行鑒定，以確診該病原。用單因子血清分析細(xì)菌的抗原組分，確定細(xì)菌的類型，如用 沙門氏菌 的單因子血清分析待檢沙門氏菌的菌體抗原及鞭毛抗原的種類，從而確定該菌屬何種 沙門氏菌 。 二 ． 免疫預(yù)防 1. 生物制品 ： 利用微生物、寄生蟲或其代謝產(chǎn)物制成的用于預(yù)防、診斷或治療傳 染病或寄生蟲病的制劑。 包括： 疫苗、診斷試劑 和 免疫血清 。 下面主要介紹 疫苗。 2. 動(dòng)物機(jī)體獲得對(duì)某種傳染病免疫力的途徑 天然主動(dòng)免疫： 自然感染病愈 (免疫時(shí)間長(zhǎng) ) 人工主動(dòng)免疫： 接種疫苗 (較長(zhǎng) ) 天然被動(dòng)免疫： 幼畜從初乳獲得母源抗體 (短 )； 幼魚從母卵中獲得母源抗體 (短 ) 人工被動(dòng)免疫： 人工注射免疫血清或高免蛋黃 (短 ) 疫苗的種類 疫苗的概念：給動(dòng)物進(jìn)行人工主動(dòng)免疫的生物制品 疫 苗 種 類 滅活疫苗 弱毒疫苗 類毒素 多價(jià)苗 多聯(lián)苗等 傳統(tǒng)疫苗 新型疫苗 亞單位疫苗 基因工程疫苗 抗獨(dú)特型抗體 合成肽苗等 A. 弱毒疫苗 研制： (1) 從自然界中篩選弱毒株如新城疫 Ⅱ 系弱毒苗； (2) 將強(qiáng)毒株致弱后成為無致病性的弱毒株 特點(diǎn)： （ 1）注射后可在動(dòng)物體內(nèi)短期繁殖； （ 2）可誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫，刺激機(jī)體產(chǎn)生干擾素； （ 3）用量少，不需要佐劑，成本低，接種方便； （ 4）研制較長(zhǎng)，需凍干冷藏保存， 有毒力返強(qiáng)潛在危險(xiǎn) 。 （ 1）傳統(tǒng)疫苗 B. 滅活疫苗 研制 ： 選擇毒力強(qiáng)、免疫原性好的毒株大量培養(yǎng)，加 %左右甲醛滅 活，保留免疫原性 +佐劑。 特點(diǎn)： （ 1）研制時(shí)間較短，安全，可常溫保存； （ 2）只產(chǎn)生體液免疫，免疫效果比弱毒疫苗差； （ 3）用量較大，須加入適當(dāng)?shù)淖魟? SARS病毒滅活疫苗 C. 類毒素 (外毒素的滅活苗 ) 研制： 產(chǎn)毒細(xì)菌經(jīng)液體大量培養(yǎng)后去除菌體，提取外毒素，用 %甲醛滅活后成 類毒素，加佐劑即成。 應(yīng)用： (1)直接作疫苗注射 (2)反復(fù)注射免疫馬匹，制備抗毒素血清。 破傷風(fēng)類毒素 D. 多價(jià)苗 同種病原微生物的多種血清型毒株制成的疫苗，如大腸桿菌多價(jià)苗等。 E. 多聯(lián)苗 不同種病原微生物聯(lián)合制成的疫苗。 特點(diǎn)： 一針防多種病，節(jié)約人力、物力 注意： 疫苗不能任意混合注射，可能互相干擾。 草魚四聯(lián)苗 草魚出血病毒 熒光假單胞菌 腸型點(diǎn)狀產(chǎn)氣單胞菌 魚害粘球菌 （ 2）新型疫苗 A. 亞單位疫苗： 提取細(xì)菌或病毒結(jié)構(gòu)中的有效抗原 +佐劑， 如大腸桿菌菌毛 K88苗等。 特點(diǎn)： 安全，但成本高 B. 基因工程疫苗 a. 基因工程亞單位苗 是用 DNA重組技術(shù)，將編碼病原微生物保護(hù)性抗原基因?qū)胧荏w菌（如大腸桿菌）或細(xì)胞，使其在受體細(xì)胞中高效表達(dá)，分泌保護(hù)性抗原肽鏈，然后提取保護(hù)性抗原肽鏈，加入佐劑即制成基因工程亞單位疫苗，如 大腸桿菌菌毛基因工程疫苗 。 基因工程乙肝疫苗 b. 基因工程活載體苗 是用基因工程技術(shù)將保護(hù)性抗原基因 （ 目的基因 ） 轉(zhuǎn)移到載體中 ， 使之表達(dá) 。痘病毒 、 腺病毒和皰疹病毒等都可以用作載體 。 國(guó)外已研制出 以腺病毒為載體的乙肝疫苗 和 以皰疹病毒為載體的新城疫疫苗 等 。 腺病毒載體乙肝疫苗 c. 基因缺失苗： 是用基因工程技術(shù)將強(qiáng)毒株毒力相關(guān)的基因切除構(gòu)建的活疫苗 。 此種疫苗安全性好 ， 不易返祖；其免疫接種與強(qiáng)毒感染相似 ， 機(jī)體可對(duì)病毒的多種抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答；免疫力堅(jiān)實(shí) ， 免疫期長(zhǎng) ， 尤其是適于局部接種 ， 誘導(dǎo)產(chǎn)生黏膜免疫力 ，因而是較理想的疫苗 。 目前已有多種基因缺失疫苗問世 ， 豬偽狂犬病基因缺失疫苗 已商品化并普遍使用 。 豬偽狂犬病基因缺失疫苗 魚類疫苗的免疫途徑 A、注射免疫接種 B、浸泡免疫接種 C、噴霧免疫接種 D、口服免疫接種 確保疫苗免疫效果的措施 （ 1）熟悉疫苗種類和功效 （ 2）正確選擇疫苗 （ 3）制定科學(xué)的免疫程序 （ 4）定期抽查免疫后抗體水平 （ 5）配合良好的飼養(yǎng)管理 三 、 免疫治療 高免疫血清及免疫球蛋白的應(yīng)用 注射高免血清或病愈動(dòng)物血清，能起到治療作用。 如：用抗毒素治療；用抗病毒高免血清治療病毒病。 用弱毒疫苗緊急接種治療病毒病 原則：早期、大量、重復(fù)應(yīng)用和防止過敏反應(yīng) 第六節(jié)復(fù)習(xí)思考題 1．診斷試劑的種類與應(yīng)用 。 2．免疫血清學(xué)診斷技術(shù)的類型。 3．凝集反應(yīng)與沉淀反應(yīng)的概念。 4．酶標(biāo)抗體技術(shù)的原理及常用標(biāo)記酶。 5．熒光抗體技術(shù)的原理及常用熒光素。 6. 免疫血清學(xué)診斷技術(shù)的特點(diǎn) 7．生物制品的概念； 8．動(dòng)物機(jī)體獲得免疫力的途徑； 9．疫苗的種類及其特點(diǎn)； 10．確保疫苗免疫效果的措施； 11．疫苗免疫失敗的可能原因。 謝謝大家