利用實(shí)時(shí)定量pcr和2－ct法分析基因相對表達(dá)量-生物在-資料下載頁
2025-04-04 23:14本頁面
【正文】 析基因表達(dá)的時(shí)候首先要問的一個(gè)問題就是：數(shù)據(jù)最後會(huì)以一個(gè)什么樣的形式得到。如果需要知道絕對的拷貝數(shù)，就必須用絕對定量的方法，否則只需要給出基因表達(dá)相對量就足夠了。相對定量可能比絕對定量要更容易一些，因?yàn)樗恍枰鳂?biāo)準(zhǔn)曲線。本文所給出的公式對于每個(gè)用相對定量的方法分析基因表達(dá)差異的研究人員都足夠了。下面，我們總結(jié)一下實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和評估中的一些重要步驟：選擇一個(gè)內(nèi)標(biāo)基因。確定內(nèi)標(biāo)的有效性，確保它不會(huì)受到實(shí)驗(yàn)處理的影響。通過PCR 擴(kuò)增目標(biāo)基因和內(nèi)標(biāo)基因RNA 或cDNA 的一系列梯度稀釋模板確保它們的擴(kuò)增效率相同。最後通過2－△CT 計(jì)算將統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化成線性形式而不是原始CT值。參考文獻(xiàn)1. Murphy, L. D., Herzog, C. E., Rudick, J. B., Fojo, A. T., and Bates, S. E. (1990) Biochemistry 29, 10351–10356.2. Noonan, K. E., Beck, C., Holzmayer, T. A., Chin, J. E., Wunder,J. S., Andrulis, I. L., Gazdar, A. F., Willman, C. L., Griffith, B.,VonHoff, D. D., and Robinson, I. B. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. to a linear form using 2 2 C T more accurately depicts the USA 87, 7160–7164.3. Horikoshi, T., et al. (1992) Cancer Res. 52, 108–116.4. Heid, C. A., Stevens, J., Livak, K. J., and Williams, P. M. (1996) Genome Res. 6, 986–994.5. Winer, J., Jung, C. K., Shackel, I., and Williams, P. M. (1999) Anal. Biochem. 270, 41–9.6. Schmittgen, T. D., Zakrajsek, B. A., Mills, A. G., Gorn, V., Singer, M. J., and Reed, M. W. (2000) Anal. Biochem. 285, 194–204. 7. Schmittgen, T. D., and Zakrajsek, B. A. (2000) J. Biochem. 46, 69–81.8. Chen, C. Y., and Shyu, A. B. (1994) Mol. Cell. Biol. 14, 8471–8482.9. Iyer, V. R., et al. (1999) Science 283, 83–87.10. Giulietti, A., Overbergh, L., Valckx, D., Decallone, B., Bouillon, R., and Mathieu, C. (2001) Methods 25, 386–401.11. Niesters, H. G. M. (2001) Methods 25, 419–429.10 /
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