【正文】 DNA的自身環(huán)化。4．重組體的篩選常用的方法有哪些？簡述各種方法的原理。A表型篩選法：DNA體外重組所用的載體常常攜帶一個或幾個可供選擇的遺傳標(biāo)記或標(biāo)記基因，當(dāng)外源基因插入載體并轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞后，使受體細(xì)胞可獲得或缺失這些標(biāo)記表型，可以通過插入失活篩選陽性克隆。B抗藥性標(biāo)志的篩選：如果克隆載體帶有某種抗藥性標(biāo)志基因，轉(zhuǎn)化后只有含這種抗藥基因的轉(zhuǎn)化子細(xì)菌才能在含該抗藥菌素的平板上幸存并形成菌落，[ 這樣就可將轉(zhuǎn)化菌與非轉(zhuǎn)化菌區(qū)別開來。CB半乳糖苷酶系篩選：很多D藍(lán)白篩選5. 何謂基因家族？基因家族有哪一些類型？基物分類，基因家族可分為兩類：一類是編碼RNA的如SnRNA rRNA rRNA 另一類是編碼蛋白質(zhì)因家族真核細(xì)胞的基因組中有許多來源相同 結(jié)構(gòu)相似功能相關(guān)的基因常常按功能成套組合，這樣的一套基因稱為基因家族或多基因家族按基因的終產(chǎn)的基因家族按它們在基因組中的分布不同分類 基因家族可分為兩類一類是基因串聯(lián)排列在一起， 形成基因族，tRNA rRNA 組蛋白等基因都屬于這一類另一類家族成員分別在不同的部位，如干擾素 珠蛋白 生長激素。6. 何謂反義RNA？反義RNA對翻譯有何調(diào)控作用？反義RNA又稱mRNA互補(bǔ)RNA，指能與特定mRNA合的RNA片段，反義RNA由反義基因轉(zhuǎn)錄而來作用。A反義RNA與mNA5’端非翻譯區(qū)包括SD序列相結(jié)合，阻止mNA與核糖體小亞基結(jié)合，直接抑制翻譯B反義RNA與mNA5’端編區(qū)起始密碼子AUG結(jié)合，抑制RNA翻譯起始C反義RNA與mRA的非編碼區(qū)互補(bǔ)結(jié)合，使mNA構(gòu)像改變，影響其與核糖體結(jié)合，間接抑制了mNA的翻譯7. 真核生物mRNA5ˊ端加帽和3ˊ端多聚腺苷酸化有何意義？ 5‘加帽意義：保護(hù)轉(zhuǎn)錄體MRNA不受5‘外切酶降解，增強(qiáng)MRNA的穩(wěn)定性，同時有利于MRNA從細(xì)胞核向胞質(zhì)轉(zhuǎn)動，促進(jìn)MRNA與核糖體的結(jié)合5‘加帽意義：保證MRNA在轉(zhuǎn)錄過程中不被降解8. 試述PCR基本技術(shù)過程中引物設(shè)計的原則。A引物的長度。一般15—30BP，常用20MERB引物擴(kuò)增跨度：以500BP為宜，特定重要條件下可擴(kuò)增長至10KP的片段C引物堿基：G+C含量以40—60%為宜，ATGC最好隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌吟或嘧啶核苷酸的成串排列D避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)：避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3‘端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異性的擴(kuò)增條物E引物3‘端的堿基必須與模板嚴(yán)格配對，特別是最末及倒數(shù)第二個堿基，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗F償還物中有或能加 上合適的酶切位點G被擴(kuò)增的靶序列最好有適[宜的酶切點，這對酶切分析或分子克隆很有好處H引物量：，以最低引物量產(chǎn)生所需的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體有機(jī)會I引物的特異性：引物與非特異擴(kuò)增序列的同源性應(yīng)小于70%或少于連續(xù)8個的互補(bǔ)堿基9. 何謂宿主細(xì)胞？分子克隆中常用的宿主細(xì)胞有哪些？宿主細(xì)胞應(yīng)具備哪些條件？宿主細(xì)胞：是基因克隆中重組DNA分子的繁殖場所，能接受并容忍重組體，并使之在體內(nèi)復(fù)制、增殖。常用宿主細(xì)胞：原核細(xì)胞：大腸桿菌、枯草桿菌。真核細(xì)胞：酵母、昆蟲細(xì)胞，動物細(xì)胞、植物細(xì)胞條件：必須是限制性內(nèi)切酶的缺陷型，既R菌株 必須是DNA重組缺陷型株，既REC菌株 必須是感受態(tài)細(xì)胞或能成為感受態(tài)細(xì)胞10. 真核生物的高度重復(fù)序列有哪些？有何作用？A反向重復(fù)序列：常出現(xiàn)在基因的調(diào)控區(qū)內(nèi)，可能與復(fù)制、轉(zhuǎn)錄的調(diào)控有關(guān)B衛(wèi)星DNA：常常位于著絲粒和端粒區(qū)，一種或幾種簡單順序串聯(lián)重復(fù)105107次，而且其堿基序列比較保守，一般不能編碼蛋白質(zhì)或轉(zhuǎn)錄成RNAC ａ－衛(wèi)星DNA：是由較復(fù)雜的重復(fù)單位組成的重復(fù)序列，這種重復(fù)序列為靈長類所特有1損傷修復(fù)有哪些類型？試述各類型的修復(fù)方式。A光修復(fù)：光復(fù)合酶能特異地和嘧啶二聚體結(jié)合，在可見光下催化光化合反應(yīng)，使環(huán)丁烷環(huán)回復(fù)到兩個獨立的嘧啶，這一過程叫光復(fù)合作用。B切除修復(fù)：是細(xì)胞內(nèi)的主要修復(fù)方式。一般DNA的兩條鏈只有一條受損傷，可將損傷部分切除，根據(jù)互補(bǔ)鏈的序列對其進(jìn)行修復(fù)。C重組修復(fù)：當(dāng)DNA分子的操作操作面積較大，還來不及修復(fù)就進(jìn)行復(fù)制時，操作部位因沒有模板指引，復(fù)制出來的子鏈就會出現(xiàn)缺口，這時可利用重組過程進(jìn)行修復(fù)，稱重組修復(fù)或復(fù)制后的修復(fù)。D SOS修復(fù)：是一種旁路系統(tǒng)，為DNA的損傷所誘導(dǎo)。其修復(fù)的結(jié)果是導(dǎo)致突變，是傾向差錯的修復(fù)1逆轉(zhuǎn)錄酶具有那些活性？并闡明其作用方式。A RNA指導(dǎo)的DNA聚合酶活性 RNA酶H活性：水解RNA—DNA雜交體上的RNAB DNA指導(dǎo)的DNA聚合酶活性：合成互補(bǔ)DNA 沒有3‘到5’外切酶活性1何謂順式作用元件？順式作用元件有哪些？在基因表達(dá)中各起何作用？順式作用元件：指某些能影響基因表達(dá)但不編碼新的蛋白質(zhì)和RNA的DNA序列，按照功能分為啟動子、增強(qiáng)子、終止子、沉默子、衰減子、啟動子：是決定RNA聚合酶‖轉(zhuǎn)錄起始點的轉(zhuǎn)錄頻率的關(guān)鍵元件增強(qiáng)子：增強(qiáng)效應(yīng)明顯，對同源和異源基因同樣有效，對各種基因啟動子均有作用沉默子或衰減子：不受距離和方向的限制，并可對異源基因的表達(dá)起作用終止子：指在模板DNA分子的5‘端轉(zhuǎn)錄終止信號1何謂反式作用因子？反式作用因子有哪些結(jié)構(gòu)域？在基因表達(dá)中各起何作用？概念：指能直接或間接地識別或結(jié)合在各順式作用元件8—12BP核心序列上，參與調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄效率的一組蛋白質(zhì)，也稱序列特異性DNA結(jié)合蛋白，這是一類細(xì)胞核內(nèi)蛋白質(zhì)因子。有三個主要功能結(jié)構(gòu)。DNA識別結(jié)合域；轉(zhuǎn)錄活化域和結(jié)合其它蛋白質(zhì)的調(diào)控結(jié)構(gòu)域1何謂鋅指？并闡明鋅指的結(jié)構(gòu)特征。 鋅指指含有一段保守氨酸順序的蛋白質(zhì)與該蛋白的輔基鋅螫合而成的不狀結(jié)構(gòu)，分為鋅、鋅扭和鋅簇結(jié)構(gòu)也有按照與鋅結(jié)合的氨基酸殘基性質(zhì)分為Cys2/Cys2和Cys2/His2指，即兩個半胱氨酸殘基和兩個半胱氨酸殘基或兩個半胱氨酸殘基和兩個組氨酸殘基，通過與位于中心的鋅離子以配位鍵結(jié)合，形成一個穩(wěn)定的指狀結(jié)構(gòu)。它們的共同特點是以鋅作為活性結(jié)構(gòu)的一部分1 引起DNA損傷的因素有哪些？A DNA復(fù)制的錯誤：如果DNA復(fù)制過程中堿基發(fā)生錯誤配對，即可引起DNA的損傷。B DNA的修復(fù)合成 C 堿基的自發(fā)突變。包括脫氨基和堿基丟失D 環(huán)境因素：如環(huán)境中許多物理和化學(xué)因素都是能夠造成DNA分子結(jié)構(gòu)的損傷1DNA損傷的突變有哪些類型？A堿基對的置換B、顛換：原為嘧啶突變后變?yōu)猷堰驶蛟瓰猷堰蔥突變后為嘧啶C移碼突變丟失或插入一個或幾個核苷酸D二聚體的形成E重排。DNA分子內(nèi)部發(fā)生較大片段的交換1何謂操縱子？簡述原核生物操縱子各組分的作用。操縱子：原核生物轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控單位作用：結(jié)構(gòu)基因：編碼蛋白質(zhì) 啟動子：RNA聚合酶識別 操縱基因：控制結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄、是調(diào)節(jié)基因1何謂SD序列？SD序列對翻譯有何影響？SD序列：與細(xì)菌16S rRNA 3，端互補(bǔ)的序列。與蛋白質(zhì)合成過程中起始復(fù)合物生成有關(guān)，nRNA在細(xì)菌中翻譯依賴于是否結(jié)合位點存在以及SD序列與起始密碼子AUG之間的距離。何謂5ˊAUG？5ˊAUG對翻譯有何調(diào)節(jié)作用？ 5‘AUG真核MRNA為模板的翻譯開始于最靠近其5’端的第一個AUG。96%以上的真核MRNA符合第一個AUG規(guī)律。意義人：5‘端AUG可以降低正常AUG啟動翻譯作用，使翻譯維持在較低水平；5’AUG多存在于原癌基因中，是控制原癌基因表達(dá)重要調(diào)控因素。5‘AUG缺失是某些原癌基因翻譯激活的原因。41 /