東北師范大學20xx年基因工程試卷b卷-資料下載頁
2025-10-15 05:00本頁面
【導讀】課程名稱：«基因工程»，質(zhì)粒作為載體的特點。穩(wěn)定遺傳，從而使受體獲得新性狀的技術(shù)體系。指基因工程中攜帶外源基因進入受體細胞的運載工具，它的本質(zhì)是DNA復制子。融合蛋白一種是通過DNA重組技術(shù)得到的兩個基因重組后的表達產(chǎn)物。單獨存在的α及W片段均無β半乳糖苷酶活性，只有宿主細胞與克隆載體同。時共表達兩片段時，宿主細胞內(nèi)才有β半乳糖苷酶活性，使特異性作用物變?yōu)樗{色化合物，2）引物3′端決定引物的特異性，3′端與模板DNA一定要配對。設計引物時應當避免在。第3位簡并性而影響擴增特異性。4)引物與非特異擴增序列的同源性不要超過70%或有連續(xù)8個互補堿基同源。間不應多于4個連續(xù)堿基的同源性或互補性。a、被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補的DNA引物。93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，到達平臺期所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。
【正文】 NA 片段的連接 ③基因工程載體的研究與應用 論述題 1 題 1. PCR 反應的體系、基本原理、基本操作過程。 PCR 的反應體系 a、被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補的 DNA 引物（約 20 個堿基左右）。 b、具有熱穩(wěn)定性的酶如： TagDNA 聚合酶。 c、 dNTP d、作為模板的目的 DNA 序列 PCR 技術(shù)的基本原理 類似于 DNA 的 天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。 PCR 由變性 退火 延伸三個基本反應步驟構(gòu)成：①模板 DNA 的變性：模板 DNA 經(jīng)加 熱至93℃左右一定時間后，使模板 DNA 雙鏈或經(jīng) PCR 擴增形成的雙鏈 DNA 解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應作準備；②模板 DNA 與引 物的退火 (復性 )：模板 DNA 經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至 55℃左右，引物與模板 DNA 單鏈的互補序列配對結(jié)合；③引物的延伸： DNA 模板 引物結(jié)合 物在 TaqDNA 聚合酶的作用下，以 dNTP 為反應原料 ，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復制原理，合成一條新的與模板 DNA 鏈互補的半保留復制鏈重復循環(huán)變性 退火 延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需 2～ 4 分鐘， 2～ 3 小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。到達平臺期 (Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。
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