東北師范大學(xué)20xx年基因工程試卷b卷-資料下載頁(yè)
2024-10-24 05:00本頁(yè)面
【導(dǎo)讀】課程名稱：«基因工程»，質(zhì)粒作為載體的特點(diǎn)。穩(wěn)定遺傳，從而使受體獲得新性狀的技術(shù)體系。指基因工程中攜帶外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞的運(yùn)載工具，它的本質(zhì)是DNA復(fù)制子。融合蛋白一種是通過(guò)DNA重組技術(shù)得到的兩個(gè)基因重組后的表達(dá)產(chǎn)物。單獨(dú)存在的α及W片段均無(wú)β半乳糖苷酶活性，只有宿主細(xì)胞與克隆載體同。時(shí)共表達(dá)兩片段時(shí)，宿主細(xì)胞內(nèi)才有β半乳糖苷酶活性，使特異性作用物變?yōu)樗{(lán)色化合物，2）引物3′端決定引物的特異性，3′端與模板DNA一定要配對(duì)。設(shè)計(jì)引物時(shí)應(yīng)當(dāng)避免在。第3位簡(jiǎn)并性而影響擴(kuò)增特異性。4)引物與非特異擴(kuò)增序列的同源性不要超過(guò)70%或有連續(xù)8個(gè)互補(bǔ)堿基同源。間不應(yīng)多于4個(gè)連續(xù)堿基的同源性或互補(bǔ)性。a、被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補(bǔ)的DNA引物。93℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，到達(dá)平臺(tái)期所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。
【正文】 NA 片段的連接 ③基因工程載體的研究與應(yīng)用 論述題 1 題 1. PCR 反應(yīng)的體系、基本原理、基本操作過(guò)程。 PCR 的反應(yīng)體系 a、被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補(bǔ)的 DNA 引物（約 20 個(gè)堿基左右）。 b、具有熱穩(wěn)定性的酶如： TagDNA 聚合酶。 c、 dNTP d、作為模板的目的 DNA 序列 PCR 技術(shù)的基本原理 類似于 DNA 的 天然復(fù)制過(guò)程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。 PCR 由變性 退火 延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①模板 DNA 的變性：模板 DNA 經(jīng)加 熱至93℃左右一定時(shí)間后，使模板 DNA 雙鏈或經(jīng) PCR 擴(kuò)增形成的雙鏈 DNA 解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；②模板 DNA 與引 物的退火 (復(fù)性 )：模板 DNA 經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至 55℃左右，引物與模板 DNA 單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；③引物的延伸： DNA 模板 引物結(jié)合 物在 TaqDNA 聚合酶的作用下，以 dNTP 為反應(yīng)原料 ，靶序列為模板，按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板 DNA 鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈重復(fù)循環(huán)變性 退火 延伸三過(guò)程，就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需 2～ 4 分鐘， 2～ 3 小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬(wàn)倍。到達(dá)平臺(tái)期 (Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。
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