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2025-03-22 05:15本頁面
【正文】 離短，會頂破蓋玻片，損壞樣本，甚至物鏡，且成像也不清晰； ? 進(jìn)行斷層成像會有熒光損失，從而影響圖像的質(zhì)量，采取提高檢測針孔 [Pinhole≥1(AU)],增加激光穿透性； ? 在進(jìn)行“ Continuous”掃描時，找到最亮的層面進(jìn)行調(diào)焦調(diào)整相應(yīng)參數(shù)。 26 （五）玻片處理和涂膠 對易造成細(xì)胞 、 組織脫片的問題采取以下兩措施 ， 可防止脫片現(xiàn)象出現(xiàn) 。 1． 載玻片和蓋玻片處理新載玻片上有油污 ， 必須經(jīng)過清潔液浸泡 12～ 24h， 流水充分漂洗后用蒸餾水清洗 5遍以上 ， 浸泡在 95％ 酒精內(nèi) 2h， 用綢布擦干或用紅外線烤箱烤干均可 ，貯放于玻片盒內(nèi)備用 。 蓋玻片很薄 ， 以上處理程序必須縮短 ，清潔液浸泡只需 2h， 流水沖洗注意勿損傷玻片等 。 不主張用烘烤箱干燥 。 多聚賴氨酸液 粘附劑； 27 （六）自發(fā)熒光（ Autofluorescence） ? 首先看它時什么顏色？在何部位，與靶區(qū)有何關(guān)聯(lián)？是否是雜質(zhì)？所選擇的熒光染料與之必須不同； ? 亮度如何？如果太亮需要避開、減弱； ? 是否需要它？通常情況下，有助于確定染色區(qū)的定位； ? 來源何處？葉綠體、卵黃、膠原蛋白、還是其他的來源？ ? 淬滅、漂白； ? 蘇丹黑可以淬滅脂質(zhì)的自發(fā)熒光； ? 組織內(nèi)的自發(fā)熒光可以被硼氫化鈉淬滅。 ? 組織自發(fā)熒光淬滅劑 AutoFluo Quencher 28 十 . 定位與定量測量應(yīng)注意的問題 定位 ： 1AU ； 。 定量 ： ； ； 。 29 3D樣本制備的基本原則 固定： 是否需要切片？ ? 激發(fā)的穿透力為 50500um 取決于熒光探針對組織的滲透能力。 免疫熒光標(biāo)記的樣本：用震蕩切片機(jī)切厚片 透明 ? 酒精脫水 二甲苯透明 二甲苯 +少量中性樹膠濕封 封片： 防止樣本變形 防止熒光褪色 醛類： 4%中性甲醛 – 結(jié)構(gòu)保存好，但抗體滲透差； + %Triton 有機(jī)溶劑：丙酮、甲醇 – 有利抗體滲透；部分抗原可能被抽提 30
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