堿性磷酸酶基因表達載體的構建及在大腸桿菌中的表達-本科基因工程實驗論文開題報告-資料下載頁
2025-01-21 18:04本頁面
【正文】 2． 實驗思路、方法、技術路線、實驗方案及可行性分析： 實驗思路：按照技術路線完成試驗。 實驗方法：電泳 PCR擴增 原核誘導表達等。 技術路線： 可行性分析：實驗室相關技術成熟，實驗人員熟悉相關的實驗內容以及方法，實驗的可行性很高。3. 實驗進度（10天之內）：準備：發(fā)放實驗器材，搖pETHis，pMD18TNK。第一天：提質粒并PCR擴增NK，然后與pMD19T連接過夜。第二天：作感受態(tài)DH5a。EcoRI和BamHI雙酶切pETHis。pMD19TNK連接液轉化DH5a涂板?；厥誴ETHis。第三天：挑pTNK平板克隆，搖菌。提質粒pMD19TNK。第四天：EcoRI和BamHI雙酶切驗證?；厥誑K。NK與pETHis連接過夜。第五天：pETHisNK連接液轉化DH5a，涂板。挑pETHisNK克隆，搖菌。搖BL21(DE3)。第六天：作感受態(tài)BL21(DE3)。提質粒pETHisNK。HindIII酶切驗證。轉化BL21(DE3)，涂板過夜。第七天：搖菌[包括空BL21(DE3)]。練習組裝SDS電泳模具。OD600=，離心集菌。第八天：灌膠加樣電泳（23h），染色45min，脫色。觀察脫色膠，轉入清水，照相。4. 預期實驗成果： 1 獲得目的產物BAP； 2 成功構建BAP表達載體； 3 撰寫實驗報告。5. 曾參與與本實驗有關的學習和研究工作積累以及已取得的工作成績：（學過基因工程課程、讀過相關的文獻、寫過有關的綜述、參加過相關的實驗設計或研究課題、獲得學術獎勵情況等）閱讀相關文獻書籍：1) 王秋穎. 堿性磷酸酶特性及其應用的研究進展[J]. 中國畜牧獸醫(yī), 2011, 38(001): 157161.2) 旭芬. 基因工程實驗指導[M]. 高等教育出版社, 2006.3) 李軍, 黃霞, 姚雪梅, 等. E. coli DH10B 堿性磷酸酶基因的克隆, 表達及活性研究[J]. 中國醫(yī)藥導報, 2012, 9(1): 2829.三、指導教師意見： 簽字： 年 月 日注：本報告務必在實驗開始前交實驗室教師審查，審查合格后方可開始實驗。9
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