實驗堿性磷酸酶米氏常數的測定-資料下載頁
2025-05-26 07:04本頁面
【正文】 測定管 各加 mL酶液 反應時間 37℃ ，精確反應 10分鐘 mol/L NaOH（ mL） 各加 2 mL 酶液（ mL ） 空白管 各補加 mL酶液 OD405 （三） 數據處理 各管在 722分光光度計測定波長 405nm的 OD值 (OD405nm)。 從對硝基苯酚標準曲線上查出OD405nm相當于產物對硝基苯酚的含量 (?mol數 ),計算出各種底物濃度下的初速度 vo（ 單位以?mol?L1?min1表示 ） ， 取倒數 1/v填入表內 。 以1/v對 1/[S]作圖 ， 求出酶催化 pNPP水解的米氏常數 Km和最大反應速度 Vm。 六、 注意事項 1. 取液量一定要準確 。 2. 反應時間 一定要精確 。 3. 加酶前后一定要將試劑混勻 。 4. 空白對照一定要先加 NaOH， 后加酶 。 5. 測定 OD405時要以各自的空白調零點 。 6. 移液管或 取液器的使用 7. 比色杯的使用 返回 管號 1 139。 2 2 39。 3 3 39。 4 4 39。 5 5 39。 加酶時間 （ min） 1 2 3 4 5 加NaOH時間 11 12 13 14 15 反應時間 （ min） 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 返回 七 、 思考題 (1) 試說明米氏常數 Km的物理意義和生物學意義 。 (2)為什么說米氏常數 Km是酶的一個特征常數而 Vm則不是 ？
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