【正文】 N, P, S, O等雜原子的極性物質(zhì)的分離 手性分離 聚合物中齊聚物的分離 聚合物中添加劑 的分離 SFC常用流動(dòng)相的臨界性質(zhì) 化合物 常壓下沸點(diǎn)（ ℃ ） 臨界性質(zhì) Tc（ ℃ ） Pc (MPa) ρc (g/cm3) CO2 N2O NH3 H2O MeOH EtOH iPrOH C2H6 nC3H8 nC4H10 nC5H12 nC6H14 C6H6 Cl2CF2 Et2O CH3OCH2CH3 續(xù) : SFC常用流動(dòng)相的臨界性質(zhì) SFC常用檢測(cè)器的性能 檢測(cè)器 操作類型 選擇性 靈敏度 噪音 檢測(cè)限 線性 作用 FID 質(zhì)量型 有機(jī) C c/g pg/s 107 破壞性 NPD 質(zhì)量型 N/P c/g (P) c/g (N) pA 25 fg/s 50 fg/s 104 (P) 105 (N) 破壞性 FPD 質(zhì)量型 S/P c/g (P) 32 c/g (S) 8 pA pg/s 50 pg/s 105 (P) 103 (S) 破壞性 RPD 質(zhì)量型 H/S/Cl/Br/I 50~100 pg/s 103 破壞性 紫外 質(zhì)量型 紫外吸收 5 pg/s 103 ~ 104 非破壞性 熒光 質(zhì)量型 產(chǎn)生熒光 ＜ 5 pg/s 103 ~ 104 非破壞性 電泳分離技術(shù) 簡(jiǎn)介 電泳 (Electrophoresis): 區(qū)帶離子電泳 , 電泳譜法 , 電遷移 , 電色譜 電泳分離的主要依據(jù) : 離子本性 研究體系所處環(huán)境 電場(chǎng)強(qiáng)度 + 料液注入 A B C 常規(guī)電泳分離方法的分類和應(yīng)用 區(qū)帶電泳 : 載體電泳和無載體電泳 無載體電泳 : 自由電泳 , 等電點(diǎn)電泳 , 等速電泳和毛細(xì)管電泳 載體電泳 : 粉末電泳 紙電泳 凝膠電泳 —淀粉電泳 , 瓊脂糖電泳 , 聚丙烯酰胺電泳 電泳色譜 聚焦電泳 —等電聚焦電泳 , 密度梯度電泳 , 親和電泳 常規(guī)電泳的優(yōu)缺點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn) 1 對(duì)樣品適應(yīng)性廣，只要能電離的包括大分子在 內(nèi)都能應(yīng)用 1 用高壓 2 與板色譜聯(lián)合應(yīng)用，可提高選擇性和效率 2 效率不太高 3 速度比一些同類的分離法更快些，如凝膠滲透 3 難以定量分析 4 儀器和技術(shù)常常是簡(jiǎn)單的 常規(guī)電泳條件的選擇 條件 單位 合適范圍 超出過度的影響 低于合適范圍的影響 電壓 V/cm* 5~15 電內(nèi)滲大，發(fā)熱厲害 移動(dòng)速度小，易擴(kuò)散 緩沖劑 離子強(qiáng)度 181。~ 只低于低壓，這樣分離差，移速小 緩沖容量不足，移速小 試液濃度 % ~1 拖尾 不易檢出 溫度 ℃ 0~20 蒸發(fā)加劇 設(shè)備復(fù)雜 支持體 緊密度 適中 易產(chǎn)生吸附 抗聚性太小，易擴(kuò)散 電流 mA/cm* ~ 移動(dòng)太快，分離效果差 *對(duì)電壓， cm指紙條長(zhǎng)度單位；對(duì)電流，指紙條長(zhǎng)度單位； 其 pH視分離組分而定，一般不宜太大或太??； 隨樣品種類而異 等速電泳的應(yīng)用 應(yīng)用領(lǐng)域 具體對(duì)象舉例 金屬離子 Al, Be, Cd, Ce, Cr, Cs, La, Ni, Tl 同位素 UO22+, Na+ 有機(jī)離子 低級(jí)和高級(jí)脂肪酸、咪唑葡萄糖、菸酸 染料 四磺化靛青 配合物 氨基酸 各種氨基酸 肽 胰島素、血管緊張肽、促腎上腺皮質(zhì)激素 抗菌素 青霉素、四環(huán)素、頭孢菌素 蛋白質(zhì) 白蛋白、球蛋白、脂蛋白、免疫球蛋白 細(xì)胞 紅細(xì)胞、白細(xì)胞、病毒 酶的研究 三磷酸腺苷酶、膽堿脂酶、己糖激酶、乳酸脫氫酶 核苷酸 十三種核苷酸的同時(shí)分離 高效毛細(xì)管電泳 (HPCE) 毛細(xì)管區(qū)帶電泳 (CZE) 毛細(xì)管空管色譜 (EOTC) 膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜 (MECC): 集電泳 , 電滲和分配為一體 , 可分離中性物質(zhì) 毛細(xì)管離子交換電動(dòng)色譜 (CIEEKC) 毛細(xì)管電色譜 (CEC) 毛細(xì)管等速電泳 (CITP) 毛細(xì)管凝膠電泳 (CGE) 毛細(xì)管等電聚焦 (CIEF) HPCE各種方法 名稱 毛細(xì)管內(nèi)填充物 類型 說明 毛細(xì)管區(qū)帶電泳（ CZE） 緩沖的自由電解質(zhì)溶液，可含有一定功能的添加成分 自由溶液電泳型 可通過添加劑引入色譜機(jī)制 毛細(xì)管空管色譜（ EOTC） CZE載體，管內(nèi)壁鍵合固定相 CZE擴(kuò)展的色譜型 管內(nèi)徑 10181。m，最佳內(nèi)徑2181。m 膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜（ MECC） CZE載體，加帶電荷的膠束（表面活性劑濃度在其 CMC之上） CZE擴(kuò)展的色譜型 膠束起固定相作用，稱為準(zhǔn)固定相，可加添加劑或非離子表面活性劑 毛細(xì)管離子交換電動(dòng)色譜（ CIEEKC） CZE載體，加帶電高分子準(zhǔn)固定相 CZE擴(kuò)展的色譜型 利于分離同分異構(gòu)體 毛細(xì)管電色譜（ CEC） CZE載體，加液相色譜固定相 非自由溶液色譜型 可以色譜淋洗液代替 CZE載體 毛細(xì)管等速電泳（ CITP） 前導(dǎo)電解質(zhì)溶液 電泳型（不連續(xù)介質(zhì)） 需使用前導(dǎo)與尾隨兩種電解質(zhì) 毛細(xì)管凝膠電泳（ CGE） 電泳用凝膠，可加添加劑 非自由溶液電泳型 由于使用凝膠具有“分子篩”效應(yīng) 毛細(xì)管等電聚焦（ CIEF） 梯度載體，亦可使用凝膠 電泳型 按等電點(diǎn)分離，要求完全抑制電滲流動(dòng) HPCE常用的檢測(cè)器 (detector) 檢測(cè)原理和方式 代表性檢測(cè)限（ mol） UV吸收光譜法 10–13 ~ 10–15 間接熒光法柱前衍生化 10–17 ~ 10–20 間接熒光法柱上衍生化 間接熒光法柱后衍生化 8 10–16 2 10–17 直接熒光法 熱光吸收 拉曼光譜 折光指數(shù) 同位素放射性 輻射測(cè)量 質(zhì)譜法 電導(dǎo)法（電位梯度） 電勢(shì)法 直接安培法 間接安培法 5 10–17 4 10–17 2 10–15 4 10–12 1 10–16 1 10–19 1 10–17 1 10–16 7 10–19 10–16 MECC的應(yīng)用 分離 對(duì)象 實(shí) 例 介質(zhì) 表面活性劑 添加劑 核酸 mol/L Na2B4O7, mol/L NaH2PO4, pH = ~ mol/L SDS Zn2+ 氨基酸、肽和蛋白質(zhì) 10 mmol/L NH4OAc 20 mmol/L SDS mM CuSO45H2O, mmol/L Aspartame 維生素 mol/L Na2HPO4, mol/L Na2B4O7 mol/L SDS 麻醉劑和藥物 mmol/L Na2HPO4, mmol/L Na2B4O7, pH = mmol/L SDS 15%乙腈 光學(xué)異構(gòu)體 10 mmol/L磷酸鹽， pH = 18 mmol/L 2,6二甲氧基 β環(huán)糊精 芳香化合物 mol/L硼酸鹽， pH = 40 mmol/L γ環(huán)糊精 2 mol/L尿素 酚 硼 /磷酸鹽緩沖液， pH = mmol/L SDS 同位素取代化合物 25 mmol/L Na2HPO4, mmol/L Na2B4O7 25 mmol/L SDS 20%甲醇 酸性溶質(zhì)（如氯酚） 50 mmol/L磷酸鹽， pH = mmol/L SDS 胺 mol/L Na2HPO4, mol/L Na2B4O7 mol/L SDS，%TratonX100 異丙醇（ 10%， V/V） 同分異構(gòu)體 mol/L磷酸鹽， pH = mol/L 2O羧甲基 β環(huán)糊精 2022 4 17 97今天就到這吧……今天就到這吧……休息一會(huì)兒……休息一會(huì)兒……Shuttle: 1. 2. 3. Shuttle service Shuttlecock Molecular shuttle (分子梭 ) NNNNSSSSSS SSOO OOO O OO O OOO+ +++Fig ur e . S t r uc t ur e of T T F c on t a inin g m ole c ula r s hu t t le de s ign e d b y S t od da r t