【正文】 N, P, S, O等雜原子的極性物質(zhì)的分離 手性分離 聚合物中齊聚物的分離 聚合物中添加劑 的分離 SFC常用流動相的臨界性質(zhì) 化合物 常壓下沸點（ ℃ ） 臨界性質(zhì) Tc（ ℃ ） Pc (MPa) ρc (g/cm3) CO2 N2O NH3 H2O MeOH EtOH iPrOH C2H6 nC3H8 nC4H10 nC5H12 nC6H14 C6H6 Cl2CF2 Et2O CH3OCH2CH3 續(xù) : SFC常用流動相的臨界性質(zhì) SFC常用檢測器的性能 檢測器 操作類型 選擇性 靈敏度 噪音 檢測限 線性 作用 FID 質(zhì)量型 有機 C c/g pg/s 107 破壞性 NPD 質(zhì)量型 N/P c/g (P) c/g (N) pA 25 fg/s 50 fg/s 104 (P) 105 (N) 破壞性 FPD 質(zhì)量型 S/P c/g (P) 32 c/g (S) 8 pA pg/s 50 pg/s 105 (P) 103 (S) 破壞性 RPD 質(zhì)量型 H/S/Cl/Br/I 50~100 pg/s 103 破壞性 紫外 質(zhì)量型 紫外吸收 5 pg/s 103 ~ 104 非破壞性 熒光 質(zhì)量型 產(chǎn)生熒光 ＜ 5 pg/s 103 ~ 104 非破壞性 電泳分離技術 簡介 電泳 (Electrophoresis): 區(qū)帶離子電泳 , 電泳譜法 , 電遷移 , 電色譜 電泳分離的主要依據(jù) : 離子本性 研究體系所處環(huán)境 電場強度 + 料液注入 A B C 常規(guī)電泳分離方法的分類和應用 區(qū)帶電泳 : 載體電泳和無載體電泳 無載體電泳 : 自由電泳 , 等電點電泳 , 等速電泳和毛細管電泳 載體電泳 : 粉末電泳 紙電泳 凝膠電泳 —淀粉電泳 , 瓊脂糖電泳 , 聚丙烯酰胺電泳 電泳色譜 聚焦電泳 —等電聚焦電泳 , 密度梯度電泳 , 親和電泳 常規(guī)電泳的優(yōu)缺點 優(yōu)點 缺點 1 對樣品適應性廣，只要能電離的包括大分子在 內(nèi)都能應用 1 用高壓 2 與板色譜聯(lián)合應用，可提高選擇性和效率 2 效率不太高 3 速度比一些同類的分離法更快些，如凝膠滲透 3 難以定量分析 4 儀器和技術常常是簡單的 常規(guī)電泳條件的選擇 條件 單位 合適范圍 超出過度的影響 低于合適范圍的影響 電壓 V/cm* 5~15 電內(nèi)滲大，發(fā)熱厲害 移動速度小，易擴散 緩沖劑 離子強度 181。~ 只低于低壓，這樣分離差，移速小 緩沖容量不足，移速小 試液濃度 % ~1 拖尾 不易檢出 溫度 ℃ 0~20 蒸發(fā)加劇 設備復雜 支持體 緊密度 適中 易產(chǎn)生吸附 抗聚性太小，易擴散 電流 mA/cm* ~ 移動太快，分離效果差 *對電壓， cm指紙條長度單位；對電流，指紙條長度單位； 其 pH視分離組分而定，一般不宜太大或太小； 隨樣品種類而異 等速電泳的應用 應用領域 具體對象舉例 金屬離子 Al, Be, Cd, Ce, Cr, Cs, La, Ni, Tl 同位素 UO22+, Na+ 有機離子 低級和高級脂肪酸、咪唑葡萄糖、菸酸 染料 四磺化靛青 配合物 氨基酸 各種氨基酸 肽 胰島素、血管緊張肽、促腎上腺皮質(zhì)激素 抗菌素 青霉素、四環(huán)素、頭孢菌素 蛋白質(zhì) 白蛋白、球蛋白、脂蛋白、免疫球蛋白 細胞 紅細胞、白細胞、病毒 酶的研究 三磷酸腺苷酶、膽堿脂酶、己糖激酶、乳酸脫氫酶 核苷酸 十三種核苷酸的同時分離 高效毛細管電泳 (HPCE) 毛細管區(qū)帶電泳 (CZE) 毛細管空管色譜 (EOTC) 膠束電動毛細管色譜 (MECC): 集電泳 , 電滲和分配為一體 , 可分離中性物質(zhì) 毛細管離子交換電動色譜 (CIEEKC) 毛細管電色譜 (CEC) 毛細管等速電泳 (CITP) 毛細管凝膠電泳 (CGE) 毛細管等電聚焦 (CIEF) HPCE各種方法 名稱 毛細管內(nèi)填充物 類型 說明 毛細管區(qū)帶電泳（ CZE） 緩沖的自由電解質(zhì)溶液，可含有一定功能的添加成分 自由溶液電泳型 可通過添加劑引入色譜機制 毛細管空管色譜（ EOTC） CZE載體，管內(nèi)壁鍵合固定相 CZE擴展的色譜型 管內(nèi)徑 10181。m，最佳內(nèi)徑2181。m 膠束電動毛細管色譜（ MECC） CZE載體，加帶電荷的膠束（表面活性劑濃度在其 CMC之上） CZE擴展的色譜型 膠束起固定相作用，稱為準固定相，可加添加劑或非離子表面活性劑 毛細管離子交換電動色譜（ CIEEKC） CZE載體，加帶電高分子準固定相 CZE擴展的色譜型 利于分離同分異構體 毛細管電色譜（ CEC） CZE載體，加液相色譜固定相 非自由溶液色譜型 可以色譜淋洗液代替 CZE載體 毛細管等速電泳（ CITP） 前導電解質(zhì)溶液 電泳型（不連續(xù)介質(zhì)） 需使用前導與尾隨兩種電解質(zhì) 毛細管凝膠電泳（ CGE） 電泳用凝膠，可加添加劑 非自由溶液電泳型 由于使用凝膠具有“分子篩”效應 毛細管等電聚焦（ CIEF） 梯度載體，亦可使用凝膠 電泳型 按等電點分離，要求完全抑制電滲流動 HPCE常用的檢測器 (detector) 檢測原理和方式 代表性檢測限（ mol） UV吸收光譜法 10–13 ~ 10–15 間接熒光法柱前衍生化 10–17 ~ 10–20 間接熒光法柱上衍生化 間接熒光法柱后衍生化 8 10–16 2 10–17 直接熒光法 熱光吸收 拉曼光譜 折光指數(shù) 同位素放射性 輻射測量 質(zhì)譜法 電導法（電位梯度） 電勢法 直接安培法 間接安培法 5 10–17 4 10–17 2 10–15 4 10–12 1 10–16 1 10–19 1 10–17 1 10–16 7 10–19 10–16 MECC的應用 分離 對象 實 例 介質(zhì) 表面活性劑 添加劑 核酸 mol/L Na2B4O7, mol/L NaH2PO4, pH = ~ mol/L SDS Zn2+ 氨基酸、肽和蛋白質(zhì) 10 mmol/L NH4OAc 20 mmol/L SDS mM CuSO45H2O, mmol/L Aspartame 維生素 mol/L Na2HPO4, mol/L Na2B4O7 mol/L SDS 麻醉劑和藥物 mmol/L Na2HPO4, mmol/L Na2B4O7, pH = mmol/L SDS 15%乙腈 光學異構體 10 mmol/L磷酸鹽， pH = 18 mmol/L 2,6二甲氧基 β環(huán)糊精 芳香化合物 mol/L硼酸鹽， pH = 40 mmol/L γ環(huán)糊精 2 mol/L尿素 酚 硼 /磷酸鹽緩沖液， pH = mmol/L SDS 同位素取代化合物 25 mmol/L Na2HPO4, mmol/L Na2B4O7 25 mmol/L SDS 20%甲醇 酸性溶質(zhì)（如氯酚） 50 mmol/L磷酸鹽， pH = mmol/L SDS 胺 mol/L Na2HPO4, mol/L Na2B4O7 mol/L SDS，%TratonX100 異丙醇（ 10%， V/V） 同分異構體 mol/L磷酸鹽， pH = mol/L 2O羧甲基 β環(huán)糊精 2022 4 17 97今天就到這吧……今天就到這吧……休息一會兒……休息一會兒……Shuttle: 1. 2. 3. Shuttle service Shuttlecock Molecular shuttle (分子梭 ) NNNNSSSSSS SSOO OOO O OO O OOO+ +++Fig ur e . S t r uc t ur e of T T F c on t a inin g m ole c ula r s hu t t le de s ign e d b y S t od da r t