[文學(xué)]分子遺傳學(xué)9遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和信紙b-資料下載頁(yè)
2025-01-19 13:32本頁(yè)面
【正文】 (2） 反應(yīng)速率取決于初始的單鏈濃度 Co； (3) 以反應(yīng)濃度和 COt1/2為座標(biāo)可繪復(fù)性曲線； (4) 通過(guò) COt1/2值可測(cè)原核生物基因組的大??； 已知大腸桿菌的基因組為 , COt1/2 = COt1/2 （ 任何基因組 DNA） / = 任何基因組大小 / (5)原核生物基因組大小不同 ， 復(fù)性曲線也不同； (6) 可用以區(qū)分真核生物和原核生物基因組 。 單一順序和重復(fù)順序 復(fù)性動(dòng)力學(xué)曲線的區(qū)別 ?真核生物的 DNA有重復(fù)順序，而原核 生物多為單一順序。 (1) 單一順序的復(fù)性曲線常只有一個(gè)拐點(diǎn)， 而重復(fù)順序常有多個(gè)拐點(diǎn)。 (2) COt 比值變化范圍。 原核 生物的 COt比值為 100, 真核 生物的 COt比值大于 100 影響復(fù)性反應(yīng)的因素 (1) DNA片段的大小； (2) DNA的濃度； (3) DNA復(fù)雜性 。 (4) 溫度 。 最佳復(fù)性溫度一般比 Tm低 25?C。 (5) 鹽的濃度： 復(fù)性時(shí)要求鹽的濃度達(dá)到足夠高 。為什么 ？ 在復(fù)性反應(yīng)中如何知道單鏈已經(jīng)結(jié)合成雙鏈了呢？ 可以通過(guò)哪些法來(lái)檢測(cè) ？ (1) 減色效應(yīng) （ hpochromic effcef） 測(cè)定光密度 ， 即 OD值 （ optical density） ，DNA從單鏈變成雙鏈 ， OD260減少 30% (2) 羥基磷灰石柱層析 羥基磷灰石對(duì)雙鏈 DNA吸附較牢 ， 不易 吸附單鏈 第五節(jié) 分子雜交 分子雜交（ molecular hybridization） 共同特點(diǎn)是： (1)都是應(yīng)用復(fù)性動(dòng)力學(xué)原理； (2)都必須有 探針 （ probe）的存在。 探針就是用同位素或非同位素如熒光染料，生物素等標(biāo)記的短片段特異 DNA或 RNA順序。 常用的分子雜交方法 ? 一 . 原位分子雜交 （ in situ hybridization） ? 二 . 斑點(diǎn)雜交 （ dot blotting） ? 三 . 薩瑟雜交 （ Southern blot） ? 四 . 諾瑟雜交 （ Northern hybridization） ? 五 . Western blotting ? 六 . 電鏡觀察 ? (1) 異源雙鏈定位法 （ Heferoduplex mapping） ? (2) R環(huán)定位法 （ Rloop mapping） (a) 變性 雜交 變性 ( b ) D N A 變性 R N A 雜交 R 環(huán) 圖 9 25 異源雙鏈定位法 (a) 和 R 環(huán)作圖 (b)
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