bca法測蛋白濃度課件-資料下載頁
2025-01-19 07:59本頁面
【正文】 CA二鈉鹽、 2%無水碳酸鈉、 %酒石酸鈉、 %氫氧化鈉、 %碳酸氫鈉，將上述液體混合后調(diào) pH至 。 （ 2）試劑 B： 4%硫酸銅。 （ 3） BCA工作液：試劑 A100mL+試劑 B2L，混合。 （ 4）蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取 150mg牛血清白蛋白，溶于100mL蒸餾水中，即為 。 (5)待測樣品。 23 實(shí)驗(yàn)步驟 （二）操作 表 1 BC A 法測定蛋白質(zhì)含量 管號試劑（ mL ） 空白管 1 2 3 4 5 測定管 標(biāo) 準(zhǔn) 蛋 白 溶 液（ 1 . 5 m g / m l ） — — 蒸餾水 — — 待測樣品 — — — — — — BCA 工作液 蛋白質(zhì)含量（ μ g ） 30 60 90 120 150 24 將上述各管混勻后于 37176。 C保溫 30分鐘，用 562nm波長比色測定吸光度值。 以蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo)，光吸收值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 用測定管光吸收值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找相應(yīng)的蛋白質(zhì)含量，再計(jì)算出待測血清中蛋白質(zhì)濃度（ g/L)。 實(shí)驗(yàn)步驟 25 注意事項(xiàng) 紫外分光光度計(jì)的正確使用。 試劑的準(zhǔn)確量取，按操作表的順序依次添加試劑。 待測樣品濃度在 50～ 2022微克／毫升濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。 注意安全，保護(hù)好儀器。 注意事項(xiàng) 26 ?試比較 BCA法與雙縮脲、 Lowry法的異同。 ? BCA法常用于科研，其有哪些特點(diǎn)。 思考 27 ? 1）預(yù)熱儀器。 ? 2）選定波長。 ? 3）固定靈敏度檔。一般測量固定在 “ 1”檔。 ? 4）調(diào)節(jié) “ 0”點(diǎn)。 ? 5）調(diào)節(jié) T=100％。 ? 6）測定。 ? 7）關(guān)機(jī)。 紫外分光光度計(jì)的使用 28 下次實(shí)驗(yàn)：血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳 預(yù)習(xí)要點(diǎn)： 復(fù)習(xí)蛋白質(zhì)兩性解離。 預(yù)習(xí)電泳的基本原理。 結(jié)合幾種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，為什么將點(diǎn)樣端置 于陰極？ 為什么跑在最前面是清蛋白？而跑在最后面是 r球蛋白？ 如何辨認(rèn)各條帶？ 請簡要寫出操作流程圖。 請寫出計(jì)算公式。 29 歡迎大家提寶貴意見！
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