bca法測蛋白濃度課件-在線瀏覽
2025-03-08 07:59本頁面
【正文】 件下可以和某些化學(xué)試劑呈現(xiàn)一定的顏色反應(yīng)，顏色的深淺與其濃度成正比。在此波長范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶液的光吸收值 (OD280)與其含量呈正比關(guān)系，可用作 定量測定。 缺點 ：準(zhǔn)確度較差，嘌呤、嘧啶、核酸等容易干擾測定。 優(yōu)點： 操作簡便、迅速、受蛋白質(zhì)性質(zhì)影響較小。Folin酚反應(yīng)是在雙縮脲反應(yīng)的基礎(chǔ)上，引進(jìn) Folin試劑 (磷鉬酸 — 磷鎢酸試劑 )，蛋白質(zhì) — 銅絡(luò)合物能還原磷鉬酸 — 磷鎢酸試劑，生成藍(lán)色物質(zhì)。 優(yōu)點： 是操作簡便、靈敏度高、較紫外吸收法靈敏10－ 20倍，較雙縮脲法靈敏 100倍。 （三） Folin酚試劑法 13 考馬斯亮藍(lán) G250染料在酸性條件下能與蛋白質(zhì)結(jié)合， 使染料的最大吸收峰值從 465nm變成 595nm，溶液的顏色 由棕紅色變?yōu)樗{(lán)色，在 595nm測定的吸光度值與蛋白質(zhì)濃 度成正比，故可用于蛋白質(zhì)定量測定。 缺點： 用于不同蛋白質(zhì)測定時有較大的偏差；大量去垢 劑會使顯色反應(yīng)受到干擾；標(biāo)準(zhǔn)曲線有輕微的非線性；比色 杯染色嚴(yán)重，影響重復(fù)性。因此，測定生物樣品的含氮量，即可推算蛋白質(zhì)含 量。 缺點： 靈敏度低，適用于 ～ ，誤差為 177。 前言 （五）改良微量凱式定氮法 15 （六） BCA法 堿性條件下，蛋白將 Cu2+還原為 Cu+,Cu+與 BCA試劑形成 紫顏色的絡(luò)合物，測定其在 562nm處的吸收值，并與標(biāo)準(zhǔn)曲 線對比，即可計算待測蛋白的濃度。 前言 16 ? BCA蛋白質(zhì)檢測流程： 前言 17 六 種蛋白質(zhì)測定方法比較 方法 靈敏度 時間 原理 干擾物質(zhì) 說明 凱氏定氮法 （ K j e d a h l法） 靈敏度低，適用于 0 . 2 ~ 1 . 0 m g氮，誤差為 ? 2％ 費(fèi)時 8 ～ 10小時 將蛋白氮轉(zhuǎn)化為氨，用酸吸收后滴定 非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白質(zhì)而分離） 用于標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)含量的準(zhǔn)確測定；干擾少；費(fèi)時太長 雙縮脲法（ B i u r e t 法） 靈敏度低 1 ～ 2 0 m g 中速 2 0 ~ 3 0分鐘 多肽鍵＋堿性 Cu2＋? 紫色絡(luò)合物 硫酸銨； Tris 緩沖液； 某些氨基酸 用于快速測定，但不太靈敏；不同蛋白質(zhì)顯色相 似
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1