環(huán)境微生物的分離與鑒定技術(shù)-資料下載頁
2025-01-18 02:10本頁面
【正文】 生物組成信息 –對(duì) PCR產(chǎn)物進(jìn)行梯度凝膠電泳分析，直接觀察其多樣性 –對(duì) PCR產(chǎn)物進(jìn)行 DNA指紋圖譜 分析 四、微生物的現(xiàn)代分類檢測技術(shù) 4. 16S rRNA序列分析技術(shù) ② 應(yīng)注意的問題 ? 提取的 DNA要能夠代表樣品中環(huán)境微生物的遺傳多樣性 ? 防止核酸污染出現(xiàn) PCR假陽性結(jié)果 ? 克服混合環(huán)境微生物基因組 DNA PCR出現(xiàn)的不均等擴(kuò)增現(xiàn)象 ? 排除 PCR產(chǎn)物中的嵌合序列 ? 避免探針雜交中出現(xiàn)的假陰性結(jié)果 四、微生物的現(xiàn)代分類檢測技術(shù) 5. DNA指紋圖譜技術(shù) – 限制性片段長度多態(tài)性分析 (RFLP) ? 其原理是利用適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶在特定位點(diǎn)上將細(xì)胞基因組 DNA切割成不同長度的片段，然后在瓊脂糖凝膠上電泳分離后對(duì)所得圖譜進(jìn)行分析比較得出分類結(jié)論，以顯示不同種群基因組 DNA的限制性片段長度多態(tài)性。 四、微生物的現(xiàn)代分類檢測技術(shù) 5. DNA指紋圖譜技術(shù) – 隨機(jī)擴(kuò)增 DNA多態(tài)性分析 (RAPD) ? 其原理是不同的基因組中與隨意引物匹配的堿基序列的位點(diǎn)和數(shù)目可能不同，因而采用核苷酸序列的隨機(jī)引物進(jìn)行基因組 DNA擴(kuò)增，非特異性引物可以結(jié)合在模板 DNA的多個(gè)位點(diǎn)，產(chǎn)生多個(gè) PCR產(chǎn)物，采用瓊脂糖凝膠電泳將產(chǎn)物分離，將每株菌的每條引物下擴(kuò)增后產(chǎn)生的圖譜合成為針對(duì)一株菌的單一圖譜，再通過軟件進(jìn)行分析。 四、微生物的現(xiàn)代分類檢測技術(shù) 5. DNA指紋圖譜技術(shù) – 擴(kuò)增片段長度多態(tài)性分析 (AFLP) ? 其基本原理是通過 PCR選擇性擴(kuò)增 整個(gè) DNA的內(nèi)切酶片段，在分辨率高的聚丙烯酰胺凝膠上電泳，產(chǎn)生一組特異的 DNA限制性片段的指紋圖。
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