【正文】 ），并采用液體菌種直針接種（不用接種環(huán)接種）。放置于恒溫水浴培養(yǎng)。指示溫度計應(yīng)放在同樣的試管和培養(yǎng)基內(nèi)，在指定溫度下培養(yǎng)2－5d，觀察生長情況。在接近0℃的低溫培養(yǎng)，則觀察時間可延長至7－10d，甚至30d。觀察記錄結(jié)果：目測生長情況，與未接種的空白培養(yǎng)基對比，注意混濁度、沉淀物和懸浮物等項(xiàng)，并分級記錄如下：（1）“＋“：表示生長良好；與對照管相比，可清楚地判定是混濁的。（2）“＋－“：表示生長差；與對照管相比，只有在某一觀察角度時方能看到明顯的混濁。（3）“－“：表示不生長；在適宜的角度下觀察，與對照無差異?？傊?，培養(yǎng)5d，能生長者均按生長計，否則按不生長計，凡培養(yǎng)5d仍屬可疑者或不生長者必須重測，在重測時，可能出現(xiàn)有時生長，有時不生長的不穩(wěn)定現(xiàn)象，這可能有兩種原因：一種是水浴溫度不穩(wěn)定，培養(yǎng)時溫度波動大；另一種原因可能是所測定的溫度，恰好是測定菌的臨界生長溫度，在這種情況下，可用提高一度或降低一度的辦法肯定之。必須注意，當(dāng)測定的試管較多時，不可將試管捆成一捆浸于水浴中，這樣捆著的試管內(nèi)外溫度不一致，易出現(xiàn)誤差。最好用特制試管架放試管，所用溫度計應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)溫度計標(biāo)定過。3形成芽孢的培養(yǎng)基形成芽孢是芽孢桿菌的關(guān)鍵性特征，但不是所有的芽孢桿菌都能在任何條件下形成芽孢。在鑒定細(xì)菌時，為了確定是否屬芽孢菌，需要對那些在一般條件下不形成芽孢的細(xì)菌，采用生孢子培養(yǎng)基，來確定是否能形成芽孢。3O/129的敏感性試驗(yàn)O/129即2，4－二氨基－6，7－二異丙醇喋啶，為弧菌抑制劑。該試驗(yàn)用于弧菌屬、氣單胞菌屬和假單胞菌屬的鑒定。取2，4－二氨基－6，7－二異丙醇喋啶150mg，溶于10mL1：1的乙醇：二乙基乙醚中。把6mm大小的濾紙片浸入該溶液后取出，在空氣中晾桿，然后放在帶菌的半固體培養(yǎng)基上做擴(kuò)散敏感試驗(yàn)。三、血清學(xué)試驗(yàn)　　血清學(xué)反應(yīng)是指：相應(yīng)的抗原與抗體在體外一定條件下作用，可出現(xiàn)肉眼可見的沉淀、凝集現(xiàn)象。在食品微生物檢驗(yàn)中，常用血清學(xué)反應(yīng)來鑒定分離到的細(xì)菌，以最終確認(rèn)檢測結(jié)果。　　血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)：　　1)抗原體的結(jié)合具有特異性，當(dāng)有共同抗原體存在時，會出現(xiàn)交叉反應(yīng)。　　2)抗原體的結(jié)合是分子表面的結(jié)合，這種結(jié)合雖相當(dāng)穩(wěn)定，但是可逆的。　　3)抗原體的結(jié)合是按一定比例進(jìn)行的，只有比例適當(dāng)時，才能出現(xiàn)可見反應(yīng)。　　4)血清學(xué)反應(yīng)大體分為兩個階段進(jìn)行，但其間無嚴(yán)格界限。第一階段為抗原體特異性結(jié)合階段，反應(yīng)速度很快，只需幾秒至幾分鐘反應(yīng)即可完畢，但不出現(xiàn)肉眼可見現(xiàn)象。第二階段為抗原體反應(yīng)的可見階段，表現(xiàn)為凝集、沉淀、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)等。反應(yīng)速度慢，需幾分、幾十分以至更長時間。而且，在第二階段反應(yīng)中，電解質(zhì)、PH、溫度等環(huán)境因素的變化，都直接影響血清學(xué)反應(yīng)的結(jié)果。　　習(xí)慣上將經(jīng)典的血清學(xué)反應(yīng)分三種類別：凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)和補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)。１、凝集反應(yīng)　　顆粒性抗原（細(xì)菌、紅細(xì)胞等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，在電解質(zhì)參與下所形成的肉眼可見的凝集現(xiàn)象，稱為凝集反應(yīng)（Agglutination reaction）。其中的抗原稱為凝集原，抗體稱為凝集素。在該反應(yīng)中，因?yàn)閱挝惑w積抗體量大，做定量實(shí)驗(yàn)時，應(yīng)稀釋抗體?！　。保┲苯幽磻?yīng)　　顆粒性抗原與相應(yīng)抗體直接結(jié)合所出現(xiàn)的反應(yīng)，稱為直接凝集反應(yīng)(Direct agglution reaction)?！　?。是一種常規(guī)的定性試驗(yàn)方法。原理是用已知抗體來檢測未知抗原。常用于鑒定菌種、血型。如將含有痢疾桿菌抗體的血清與待檢菌液各一滴，在玻片上混勻，數(shù)分種后若出現(xiàn)肉眼可見的凝集塊，即陽性反應(yīng)，證明該菌是痢疾桿菌。此法快速、簡便，但不能進(jìn)行定量測定?！　?。是一種定量試驗(yàn)方法。多用已知抗原來檢測血清中有無相應(yīng)抗體及其含量。常用于協(xié)助診斷某些傳染病及進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。如肥達(dá)氏反應(yīng)就是診斷傷寒、付傷寒的試管凝集試驗(yàn)。因?yàn)橐獪y定抗體的含量，故將待檢查的血清用等滲鹽水倍比稀釋成不同濃度，然后加入等量抗原，37℃或56℃，2~4小時觀察，血清最高稀釋度仍有明顯凝集現(xiàn)象的，為該抗血清的凝集效價?！　。玻╅g接凝集反應(yīng)　　將可溶性抗原（抗體）先吸附在一種與免疫無關(guān)的，顆粒狀微球表面，然后與相應(yīng)抗體（抗原）作用，在有電解質(zhì)存在的條件下，即可發(fā)生凝集，稱為間接凝集反應(yīng)(Indirect agglutination)。由于載體增大了可溶性抗原的反應(yīng)面積。當(dāng)載體上有少量抗原與抗體結(jié)合。就出現(xiàn)肉眼可見的反應(yīng)，敏感性很高。２、沉淀反應(yīng)　　可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在有適量電解質(zhì)存在下，經(jīng)過一定時間，形成肉眼可見的沉淀物，稱為沉淀反應(yīng)（Precipitation）。反應(yīng)中的抗原稱為沉淀原，抗體為沉淀素。由于在單位體積內(nèi)抗原量大，為了不使抗原過剩，故應(yīng)稀釋抗原，并以抗原的稀釋度作為沉淀反應(yīng)的效價?！　。保┉h(huán)狀沉淀反應(yīng)：是一種定性試驗(yàn)方法，可用已知抗體檢測未知抗原。將已知抗體注入特制小試管中，然后沿管壁徐徐加入等量抗原，如抗原與抗體對應(yīng)，則在兩液界面出現(xiàn)白色的沉淀圓環(huán)?！　。玻┬鯛畛恋矸磻?yīng)：將已知抗原與抗體在試管（如凹玻片）內(nèi)混勻，如抗原抗體對應(yīng)，而又二者比例適當(dāng)時，會出現(xiàn)肉眼可見的絮狀沉淀，此為陽性反應(yīng)?！　。常┉傊瑪U(kuò)散試驗(yàn)：利用可溶性抗原抗體在半固體瓊脂內(nèi)擴(kuò)散，若抗原抗體對應(yīng)，且二者比例合適，在其擴(kuò)散的某一部分就會出現(xiàn)白色的沉淀線。每對抗原抗體可形成一條沉淀線。有幾對抗原抗體，就可分別形成幾條沉淀線。瓊脂擴(kuò)散可分為單向擴(kuò)散和雙向擴(kuò)散兩種類型。單向擴(kuò)散是一種定量試驗(yàn)。可用于免疫蛋白含量的測定。而雙向擴(kuò)散多用于定性試驗(yàn)。由于方法簡便易行，常用于測定分析和鑒定復(fù)雜的抗原成分。３、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)　　補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)(Complement fixation reaction)是在補(bǔ)體參與下，以綿羊紅細(xì)胞和溶血素作為指示系統(tǒng)的抗原抗體反應(yīng)。補(bǔ)體無特異性，能與任何一組抗原抗體復(fù)合物結(jié)合而引起反應(yīng)。如果補(bǔ)體與綿羊紅細(xì)胞、溶血素的復(fù)合物結(jié)合，就會出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，如果與細(xì)菌及相應(yīng)抗體復(fù)合物結(jié)合，就會出現(xiàn)溶菌現(xiàn)象。因此，整個試驗(yàn)需要有補(bǔ)體、待檢系統(tǒng)（已知抗體或抗原、未知抗原或抗體）及指示系統(tǒng)（綿羊細(xì)胞和溶血素）五種成份參加。其試驗(yàn)原理是補(bǔ)體不單獨(dú)和抗原或抗體結(jié)合。如果出現(xiàn)溶菌，是補(bǔ)體與待檢系統(tǒng)結(jié)合的結(jié)果，說明抗原抗體是相對應(yīng)的，如果出現(xiàn)溶血，說明抗原抗體不相對應(yīng)。此反應(yīng)操作復(fù)雜，敏感性高，特異性強(qiáng)，能測出少量抗原和抗體，所以應(yīng)用范圍較廣。21 /