生物分離工程細(xì)胞破碎-資料下載頁(yè)
2025-01-16 11:49本頁(yè)面
【正文】 . ? 高速珠磨機(jī) (high spced bead mill) 研磨是常用的一種方法，它將細(xì)胞懸浮液與玻璃小珠、石英砂或氧化鋁等研磨劑一起快速攪拌，使細(xì)胞獲得破碎。 ? 在工業(yè)規(guī)模的破碎中常采用高速珠磨機(jī) ? 超聲波破碎器 ? 超聲波處理細(xì)胞懸浮液時(shí)，破碎作用受許多因素的影響，通常聲強(qiáng)和振幅影響很大，但強(qiáng)度太高易使蛋白質(zhì)變性，頻率的變化影響不明顯：此外介質(zhì)的離子強(qiáng)度、 pH值、菌體的種類和濃度也有很大的影響 . ? 超聲波振蕩過(guò)程中遇到的最大問(wèn)題就是產(chǎn)生的熱量不容易驅(qū)散，所以影響了它在大規(guī)模工業(yè)上的應(yīng)用，但在實(shí)驗(yàn)室和小規(guī)模生產(chǎn)中是一種很好的方法 非機(jī)械法 ? 非機(jī)械方法很多，包括酶解、滲透壓沖擊、凍結(jié)和融化、干燥法和化學(xué)法溶胞等 . ? 1)酶解法 是利用酶反應(yīng)，分解破壞細(xì)胞壁上特殊的鍵，從而達(dá)到破碎目的。酶解法可以在細(xì)胞懸浮液中加入特定的酶，也可以采用自溶作用。 ? 酶解法的優(yōu)點(diǎn)是發(fā)生酶解的條件溫和、能選擇性地釋放產(chǎn)物、胞內(nèi)核酸等泄出量少、細(xì)胞外形較完整、便于后步分離等；但酶水解價(jià)格高，故小規(guī)模應(yīng)用較廣 . ?滲透壓沖擊法 ?凍融法 ?干燥法 ?化學(xué)法 :采用化學(xué)法處理可以溶解細(xì)胞或抽提胞內(nèi)組分。常用酸、堿、表面活性劑和有機(jī)溶劑等化學(xué)試劑。 ? 選擇破碎方法的依據(jù) (1)細(xì)胞的處理量 (2)細(xì)胞壁的強(qiáng)度和結(jié)構(gòu) (3)目標(biāo)產(chǎn)物對(duì)破碎條件的敏感性 (4) 破碎程度 適宜的操作條件應(yīng)從高的產(chǎn)物釋放率，低的能耗和便于后步提取這二方面進(jìn)行權(quán)衡 破碎技術(shù)研究的方向 ?(1)多種破碎法的結(jié)合 ?(2)與上游技術(shù)結(jié)合 ?(3)與下游操作技術(shù)結(jié)合 破碎率的測(cè)定 ? 破碎率 R:細(xì)胞破碎的程度 . 常用的方法是測(cè)定目的產(chǎn)物的釋放量 : 釋放的蛋白的量或酶的量 . 基因工程包涵體的純化方法 ?包涵體的洗滌和目標(biāo)蛋白的變性溶解 ?目標(biāo)蛋白的復(fù)性 思考題 ? ? ? 3.
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