【正文】 三個市陸續(xù)出現劇烈腹瀉和嘔吐病例，腹瀉糞便為水樣便、患者無腹痛、里急后重和發(fā)熱癥狀；首例患者出現在甲市 ，經省、市疾病預防控制中心聯(lián)合處置，判定為一起由來自丙市農貿市場甲魚污染 O139 群霍亂弧菌引起的食源性疾病暴發(fā)疫情。 事件經過： 7 月某日，乙市村民張 XX 家舉辦壽宴，來自甲、乙、丙市的親朋好友參加。宴請食物中有用從乙市農貿市場購買并來自丙市農貿市場的甲魚加工的菜品，第二天甲市朱 XX 發(fā)病，并出現上述癥狀，疾控中心接報后進行處置，最終確認了本起疫情。 【討論題 】 請復述省市疾控中心從接到第一例患者發(fā)病報告后開始進行的診斷處理過程（不包括對疫情的控制措施），并簡述如何確認致病病原和污染食品來源的方法和步驟。 【參考答案】 二、一例輪狀病毒感染案例分析 【背景知識】 輪狀病毒 (RV)是引起嬰幼兒腹瀉的最主要病原。能夠造成人類腹瀉的輪狀病毒 (RV)只有 A、 B、 C 組，人們較為熟悉的嬰幼兒腹瀉病毒是 A 組輪狀病毒毒， B組至今只在我國曾有暴發(fā)流行， C 組僅有個別發(fā)現。輪狀病毒在世界范圍內分布廣泛，國內外大量研究表明 A 組輪狀病毒是引起嬰幼兒非細菌性腹瀉的重要病原體，其引起的腹瀉具有較高的發(fā)病率，是導致嬰幼兒發(fā)病甚至死亡的重要原因。 【案例】 患兒，半歲，女。以突然發(fā)病出現發(fā)熱、水樣腹瀉和嘔吐等癥狀于 2022 年11 月 5 日急診入院 ，詢問病史患兒為早產 1 個月，人工喂養(yǎng)，體檢輕微脫水癥，蛋花樣糞便，體溫 38℃。 提示 ：患兒起病急，出現發(fā)熱、水樣腹瀉和嘔吐等癥狀，發(fā)病時間為深秋，體檢輕微脫水征，蛋花樣糞便。患兒可能為輪狀病毒所致腹瀉。 【討論題】 你作為檢驗人員，如何進行采樣并進行實驗室檢驗確診？ 【參考答案】 模塊 三 ：微生物檢測方法學評價 一、大腸菌群經典三步法和 LST 兩步法的比較與評價 15 目的要求： 1. 掌握 微生物方法學評價方法 2. 了解 基本科研思路 學時： 9 學時 課程內容： 《 GBT 生活飲用水標準檢驗方法 微生物指標》中大腸菌群采用經典三步法：自行回憶 在《 GBT 食品衛(wèi)生微生物學檢驗標準大腸菌群計數》中大腸菌群的檢測采用兩步法： 【討論題】 微生物學檢測方法中 , 經常會用“顯色”這一手段使結果判斷更加容易、簡單 , 并能減少人為因素引起的漏檢、誤檢。月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（ LST）肉湯、煌綠乳糖膽鹽（ BGLB）肉湯均不含指示劑，能否添加指示劑增加實驗結果的辨別性？ 月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（ LST）肉湯、煌綠乳糖膽鹽（ BGLB）肉湯這兩種培養(yǎng)基相對于乳糖膽鹽蛋白胨水有什么特別之處？ 16 如何設計實驗評價這兩種方法對大腸菌群的檢測能力？ 【參考 資料 】 兩步法大腸菌群 MPN 計數較三步法的優(yōu)勢有：⑴ 兩步法操作更簡單，適合批量檢測；⑵ 兩步法檢出的概率大 乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基基本上不具備修復已損傷的細胞的作用，而月桂基硫酸鹽胰蛋白胨則可以；⑶ 兩步法減少了人為的誤差 三步法需要挑選菌落，受人主觀的影響很大，沒有挑對或挑取的不夠多都會導致假陰性結果，而兩步法采取增菌液接種，會減少假陰性。 乳胨水培養(yǎng)基：乳糖 10g，蛋白胨 20g，膽鹽 5g， %溴甲酚紫 25mL，蒸餾水 1000mL， 。 BGLB培養(yǎng)基：乳糖 10g，蛋白胨 10g，膽鹽 20g，煌綠 ，蒸餾水 1000mL。 LST 培養(yǎng)基：胰酪胨 20g，氯化鈉 5g，乳糖 5g，磷酸氫二鈉 ，磷酸二氫鈉 ， 月桂基硫酸鈉 ，蒸餾水 1000mL， 177。 。 實驗表明 LST 培養(yǎng)基的菌量明顯比乳胨水、 BGLB 培養(yǎng)基多，證明 LST 培養(yǎng)基更有利于大腸菌群的生長和檢出，因此適宜作大腸菌群初發(fā)酵 培養(yǎng)基。 從營養(yǎng)角度分析有以下的原因： (1)乳胨水和 BGLB 的氮源為蛋白胨， LST 為胰蛋白胨。胰蛋白胨含有的氨基酸種類齊全，是一種極易被大多數微生物吸收的良好氮源和碳源，因而 LST 的胰蛋白胨較蛋白胨更利于大腸菌群的吸收利用。 (2)3 種培養(yǎng)基均以乳糖作為主要碳源，同時提供大腸菌群檢測發(fā)酵產氣的主要基質。三者的乳糖與蛋白胨質量比是：乳胨水培養(yǎng)基 1： 2， BGLB 培養(yǎng)基 1： 1， LST 培養(yǎng)基 1： 4。以上實驗的數據表明， LST 較乳胨水、 GBLB 培養(yǎng)基更利于大腸菌群生長。 (3)LST培養(yǎng)基中抑制劑為十二烷基硫酸鈉，乳胨水和 BGLB 培養(yǎng)基中均為膽鹽，它們均能抑制革蘭氏陽性菌，但十二烷基硫酸鈉有表面活性作用， 該物質為抑制劑，能較好地抑制革蘭氏陽性菌生長， 有利于提高革蘭氏陰性菌活性和分散菌體的作用 ，利于大腸菌群選擇性地發(fā)育 。 課后思考題 一、請設計實驗方案比較不同的鑒定培養(yǎng)基分離沙門菌的差異 常見的沙門菌鑒定培養(yǎng)基有： XLD、 SS、 HE、 BS 等 二、大腸菌群作為糞便污染指示微生物，傳統(tǒng)的檢測方法是基于細菌培養(yǎng)獲得17 結果，耗時長，效率低，請你設計一種分子生物學方法來代替?zhèn)鹘y(tǒng)方法，并對該方法進行評價。 提示：首先選擇方法，定性 or 定量？其次要選擇能代表糞便污染情況的檢測對象（細菌？）。