抗真菌藥物敏感試驗-資料下載頁
2025-01-06 04:34本頁面
【正文】 64μg/mL 唑類藥物 ~128 μg/mL 特比萘芬 ~128 μg/mL 阿莫羅芬 ~100 μg/mL 瓊脂稀釋法 ? 操作步驟 1. 取不同菌液以多點接種法接種入培養(yǎng)基，每點為 1～ 5μl 菌液。 2. 28℃ ，培養(yǎng) 3～ 7天。 3. 培養(yǎng)期間，每 24小時讀結(jié)果 1次，以肉眼判定無菌生長 的最低藥物培養(yǎng)皿的濃度為 MIC。 微量液體稀釋法 ? 培養(yǎng)基制備 同酵母樣菌試管液基稀釋法，采用含 MOPS的RPMI 1640培養(yǎng)基， ~ ? 藥液制備：同酵母樣菌試管液基稀釋法， 儲存液濃度至少為 1280μg/mL。工作液濃度為 2倍測試濃度。 微量液體稀釋法 ? 菌液制備 1. 受試菌株在 PDA上 35℃ 培養(yǎng) 7天，促進小分生孢子生成（鐮刀菌屬先在 35℃ 培養(yǎng) 48～ 72小時，然后 25～ 28℃ 培養(yǎng)至 7天）。 2. 1mL無菌生理鹽水沖洗菌落，曲霉菌落可在無菌生理鹽水中加入1滴吐溫 20。 3. 收集沖洗液，靜置 3～ 5分鐘，取上部較均勻混懸液，渦旋混勻，分光光度計測定 OD值。曲霉和申克孢子絲菌調(diào)整 OD值至~。 根霉、鐮刀菌及波氏假阿什利菌調(diào)整至 ~。 4. 將上述懸液用培養(yǎng)基進行 1:50稀釋，即得到工作液（ 2倍最終濃度），約為 104～ 5 104cfu/mL。 微量液體稀釋法 ? 試驗步驟 1. 采用 96孔 U型板，每排 1～ 10孔依次加入不同濃度待測藥物工作液100 μl ，第 1孔為最高濃度，第 10孔為最低濃度。 2. 在 1～ 10孔加入 100μl菌工作液，第 11孔中加入 100 μl無菌不含藥物的培養(yǎng)基和 100 μl菌工作液，作為生長對照； 12孔僅加入無菌不含藥物培養(yǎng)基作陰性對照。 3. 培養(yǎng)板置于 35℃ 孵育。根霉在培養(yǎng) 21～ 26小時后，鐮刀菌、曲霉和孢子絲菌在 46~50小時，波氏假阿什利菌 70～ 74小時后讀取結(jié)果。 微量液體稀釋法 ? 結(jié)果判讀 結(jié)果判讀以生長對照孔作為標準，將生長情況進行評分。 0： 完全透明清澈或無生長； 1： 少量生長，大致相當于生長對照孔的 25％ 2： 生長明顯減少，相當于生長對照孔 50％ 3： 生長輕度減少，相當于生長對照孔 75％ 4： 無明顯生長抑制，與生長對照一致 微量液體稀釋法 ? 結(jié)果判讀 1. 兩性霉素 B 終點易判斷，以評分為 0的最低濃度為 MIC 2. 氟胞嘧啶和唑類藥物 以評分為 2的最低濃度作為 MIC 3. 伊曲康唑及其他三唑類 一般終點容易判斷，以評分為 0的最低濃度作為 MIC。如出現(xiàn)終點判斷困難，提示該菌在臨床中可能耐藥。 微量液體稀釋法 ? 結(jié)果判定 ：目前 MIC與菌株耐藥情況的關(guān)系尚不清楚。 1. 兩性霉素 B：多數(shù)條件致病絲狀菌的 MIC值為 ~。但某些菌株如土曲霉、局限枝頂孢霉、尖端賽多孢子菌和多育賽多孢子菌等MIC可達 ~16 μg/mL 。臨床治療提示，曲霉 MIC≥ μg/mL時，可導(dǎo)致兩性霉素 B治療失敗。 2. 氟胞嘧啶：除少數(shù)曲霉屬和暗色孢科以外，多數(shù)絲狀真菌不敏感，MIC64 μg/mL。 微量液體稀釋法 ? 結(jié)果判定 3. 氟康唑：除少數(shù)雙相真菌和皮膚癬菌外，多數(shù)絲狀真菌不敏感，MIC64μg/mL。 4. 酮康唑：絲狀真菌 MIC波動于 ~16 μg/mL ，但目前尚缺乏 MIC值與療效關(guān)系的資料 5. 伊曲康唑和新三唑類：初步的資料顯示當 MIC8 μg/mL時，提示臨床該菌對伊曲康唑耐藥。新三唑類藥物尚缺乏 MIC值與臨床療效間關(guān)系的資料。 試管液體稀釋法 ? 操作與微量液體稀釋法相似，將培養(yǎng)體系置于試管中，接種菌量約為 104～ 5 104cfu/mL， 35℃ 培養(yǎng)后觀察生長情況。結(jié)果判讀和判定同微量液體稀釋法。 ? 液基稀釋法 優(yōu)點：敏感，操作簡便， 缺點：適用范圍有限，僅適用于產(chǎn)孢豐富的絲狀真菌， 而對產(chǎn)孢較少的真菌則較難進行。 ? 絲狀真菌的其他藥物敏感試驗方法還包括瓊脂擴散法、 E試驗法等，其操作步驟均可參照酵母樣菌方法進行。目前絲狀真菌的藥物敏感試驗仍沒有一個廣被接受的標準方法，對各種方法得到的 MIC值尚沒有充分的臨床療效資料與之對應(yīng)；同時，絲狀真菌藥物敏感試驗中接種菌量確定仍是目前存在的主要問題。尚需進行進一步的試驗對各種方法進行再評價。 小 結(jié) ? 抗真菌藥物敏感試驗方法很多， NCCLS采用的液體稀釋法，尤其微量液體稀釋法，簡便易行，結(jié)果敏感，而受到大多數(shù)專業(yè)工作者的歡迎。 ? 微量液體稀釋法有其局限性，細菌藥物敏感試驗顯示，液體稀釋法相對于傳統(tǒng)的瓊脂稀釋法重復(fù)性差。同時，由于缺乏臨床療效和藥敏結(jié)果間的關(guān)系資料，對各種藥敏試驗方法仍無法作出客觀評價。 ? 對于絲狀真菌來說，目前尚無一種廣被接受的藥敏試驗方法，如菌量確定的方法等。 ? 這些方面，仍需進一步研究探討。
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