【正文】 64μg/mL 唑類(lèi)藥物 ~128 μg/mL 特比萘芬 ~128 μg/mL 阿莫羅芬 ~100 μg/mL 瓊脂稀釋法 ? 操作步驟 1. 取不同菌液以多點(diǎn)接種法接種入培養(yǎng)基，每點(diǎn)為 1～ 5μl 菌液。 2. 28℃ ，培養(yǎng) 3～ 7天。 3. 培養(yǎng)期間，每 24小時(shí)讀結(jié)果 1次，以肉眼判定無(wú)菌生長(zhǎng) 的最低藥物培養(yǎng)皿的濃度為 MIC。 微量液體稀釋法 ? 培養(yǎng)基制備 同酵母樣菌試管液基稀釋法，采用含 MOPS的RPMI 1640培養(yǎng)基， ~ ? 藥液制備：同酵母樣菌試管液基稀釋法， 儲(chǔ)存液濃度至少為 1280μg/mL。工作液濃度為 2倍測(cè)試濃度。 微量液體稀釋法 ? 菌液制備 1. 受試菌株在 PDA上 35℃ 培養(yǎng) 7天，促進(jìn)小分生孢子生成（鐮刀菌屬先在 35℃ 培養(yǎng) 48～ 72小時(shí)，然后 25～ 28℃ 培養(yǎng)至 7天）。 2. 1mL無(wú)菌生理鹽水沖洗菌落，曲霉菌落可在無(wú)菌生理鹽水中加入1滴吐溫 20。 3. 收集沖洗液，靜置 3～ 5分鐘，取上部較均勻混懸液，渦旋混勻，分光光度計(jì)測(cè)定 OD值。曲霉和申克孢子絲菌調(diào)整 OD值至~。 根霉、鐮刀菌及波氏假阿什利菌調(diào)整至 ~。 4. 將上述懸液用培養(yǎng)基進(jìn)行 1:50稀釋?zhuān)吹玫焦ぷ饕海?2倍最終濃度），約為 104～ 5 104cfu/mL。 微量液體稀釋法 ? 試驗(yàn)步驟 1. 采用 96孔 U型板，每排 1～ 10孔依次加入不同濃度待測(cè)藥物工作液100 μl ，第 1孔為最高濃度，第 10孔為最低濃度。 2. 在 1～ 10孔加入 100μl菌工作液，第 11孔中加入 100 μl無(wú)菌不含藥物的培養(yǎng)基和 100 μl菌工作液，作為生長(zhǎng)對(duì)照； 12孔僅加入無(wú)菌不含藥物培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。 3. 培養(yǎng)板置于 35℃ 孵育。根霉在培養(yǎng) 21～ 26小時(shí)后，鐮刀菌、曲霉和孢子絲菌在 46~50小時(shí)，波氏假阿什利菌 70～ 74小時(shí)后讀取結(jié)果。 微量液體稀釋法 ? 結(jié)果判讀 結(jié)果判讀以生長(zhǎng)對(duì)照孔作為標(biāo)準(zhǔn)，將生長(zhǎng)情況進(jìn)行評(píng)分。 0： 完全透明清澈或無(wú)生長(zhǎng)； 1： 少量生長(zhǎng)，大致相當(dāng)于生長(zhǎng)對(duì)照孔的 25％ 2： 生長(zhǎng)明顯減少，相當(dāng)于生長(zhǎng)對(duì)照孔 50％ 3： 生長(zhǎng)輕度減少，相當(dāng)于生長(zhǎng)對(duì)照孔 75％ 4： 無(wú)明顯生長(zhǎng)抑制，與生長(zhǎng)對(duì)照一致 微量液體稀釋法 ? 結(jié)果判讀 1. 兩性霉素 B 終點(diǎn)易判斷，以評(píng)分為 0的最低濃度為 MIC 2. 氟胞嘧啶和唑類(lèi)藥物 以評(píng)分為 2的最低濃度作為 MIC 3. 伊曲康唑及其他三唑類(lèi) 一般終點(diǎn)容易判斷，以評(píng)分為 0的最低濃度作為 MIC。如出現(xiàn)終點(diǎn)判斷困難，提示該菌在臨床中可能耐藥。 微量液體稀釋法 ? 結(jié)果判定 ：目前 MIC與菌株耐藥情況的關(guān)系尚不清楚。 1. 兩性霉素 B：多數(shù)條件致病絲狀菌的 MIC值為 ~。但某些菌株如土曲霉、局限枝頂孢霉、尖端賽多孢子菌和多育賽多孢子菌等MIC可達(dá) ~16 μg/mL 。臨床治療提示，曲霉 MIC≥ μg/mL時(shí)，可導(dǎo)致兩性霉素 B治療失敗。 2. 氟胞嘧啶：除少數(shù)曲霉屬和暗色孢科以外，多數(shù)絲狀真菌不敏感，MIC64 μg/mL。 微量液體稀釋法 ? 結(jié)果判定 3. 氟康唑：除少數(shù)雙相真菌和皮膚癬菌外，多數(shù)絲狀真菌不敏感，MIC64μg/mL。 4. 酮康唑：絲狀真菌 MIC波動(dòng)于 ~16 μg/mL ，但目前尚缺乏 MIC值與療效關(guān)系的資料 5. 伊曲康唑和新三唑類(lèi)：初步的資料顯示當(dāng) MIC8 μg/mL時(shí)，提示臨床該菌對(duì)伊曲康唑耐藥。新三唑類(lèi)藥物尚缺乏 MIC值與臨床療效間關(guān)系的資料。 試管液體稀釋法 ? 操作與微量液體稀釋法相似，將培養(yǎng)體系置于試管中，接種菌量約為 104～ 5 104cfu/mL， 35℃ 培養(yǎng)后觀(guān)察生長(zhǎng)情況。結(jié)果判讀和判定同微量液體稀釋法。 ? 液基稀釋法 優(yōu)點(diǎn)：敏感，操作簡(jiǎn)便， 缺點(diǎn)：適用范圍有限，僅適用于產(chǎn)孢豐富的絲狀真菌， 而對(duì)產(chǎn)孢較少的真菌則較難進(jìn)行。 ? 絲狀真菌的其他藥物敏感試驗(yàn)方法還包括瓊脂擴(kuò)散法、 E試驗(yàn)法等，其操作步驟均可參照酵母樣菌方法進(jìn)行。目前絲狀真菌的藥物敏感試驗(yàn)仍沒(méi)有一個(gè)廣被接受的標(biāo)準(zhǔn)方法，對(duì)各種方法得到的 MIC值尚沒(méi)有充分的臨床療效資料與之對(duì)應(yīng)；同時(shí)，絲狀真菌藥物敏感試驗(yàn)中接種菌量確定仍是目前存在的主要問(wèn)題。尚需進(jìn)行進(jìn)一步的試驗(yàn)對(duì)各種方法進(jìn)行再評(píng)價(jià)。 小 結(jié) ? 抗真菌藥物敏感試驗(yàn)方法很多， NCCLS采用的液體稀釋法，尤其微量液體稀釋法，簡(jiǎn)便易行，結(jié)果敏感，而受到大多數(shù)專(zhuān)業(yè)工作者的歡迎。 ? 微量液體稀釋法有其局限性，細(xì)菌藥物敏感試驗(yàn)顯示，液體稀釋法相對(duì)于傳統(tǒng)的瓊脂稀釋法重復(fù)性差。同時(shí)，由于缺乏臨床療效和藥敏結(jié)果間的關(guān)系資料，對(duì)各種藥敏試驗(yàn)方法仍無(wú)法作出客觀(guān)評(píng)價(jià)。 ? 對(duì)于絲狀真菌來(lái)說(shuō)，目前尚無(wú)一種廣被接受的藥敏試驗(yàn)方法，如菌量確定的方法等。 ? 這些方面，仍需進(jìn)一步研究探討。