【正文】 接性、廣譜性 抗病毒機理： 不 直接作用于病毒， 而 作用于宿主細胞基 因， 合成 抗病毒蛋白 ，抑制病毒蛋白合成。 —— 蛋白激酶、 2`5`腺嘌呤核苷合成酶、 磷酸二脂酶 早期 中斷病毒復(fù)制，阻止病毒擴散 二、特異性免疫 按種類： IgG（ 過胎盤） IgM（ 大） IgA（ 泌粘 ） TD、 TC 、 NK、 M 中和抗體： 定義、機理和免疫球蛋白的類型 細胞免疫 ： 體液免疫： 起 預(yù)防 而非治療作用、對 細胞內(nèi)病毒無效 按功能： 中和抗體、 補體結(jié)合抗體 、 血凝抑制抗 體 抗病毒免疫的主要成分 抗體 時 相 中和作用 殺傷機理 通過胎盤 IgM 出現(xiàn)早 ,消失快 較強 CDC 不能 IgG 出現(xiàn)遲 ,消失慢 強 ADCC 能 SIgA 存在粘膜中 局部中和 不能 抗病毒免疫的持續(xù)時間 ? 因病毒的種類而異 – 有病毒血癥 的 全身性病毒感染 ：痊愈后獲得牢固的免疫力，且持時較長；天花 V – 只有 單一血清型 的病毒感染：病后有牢固的免疫力，持時長；乙型腦炎 V – 易發(fā)生抗原變異 的病毒感染：病后機僅產(chǎn)生短暫的免疫力；流感 V 病毒感染的檢測與防治 病毒感染的實驗室診斷方法 一、病毒感染的檢查方法 （ 一 ） 標本 的采集與送檢 —— 檢查成敗的關(guān)鍵 1. 標本 采集 : 發(fā)病初期或急性期；部位 。 2. 標本 處理 : 無菌操作，抗生素＋ 50％甘油 鹽水，低溫保存； 3. 冷藏 送檢 : 1～ 2小時送檢 。70℃ 保存 。 4. 血清學(xué)檢查應(yīng)采 雙份標本 。 常見分離病毒標本的選擇 病毒 咽拭子 糞便 血液 腦脊液 唾液 組織 柯薩奇 A和 B組 + + + 心 單純皰疹病毒 + 腦膜 腮腺炎病毒 + + + 流感病毒 + 輪狀病毒 + HAV + HIV + 精液 （二）病毒的分離培養(yǎng)與鑒定 ● 分離培養(yǎng) 動物 接種 : 最原始 , 易感動物的選擇； 雞胚 接種 : 多種病毒敏感，取材方便 細胞 培養(yǎng) : 最主要 。 包括器官培養(yǎng)、移植培養(yǎng)和細胞培養(yǎng)（原代 和次代細胞，二倍體細胞株和傳代細胞系） 常用于病毒分離的細胞 細胞種類 可分離的病毒 原代細胞 非洲綠猴腎細胞 人單核細胞 人胚腎、肺細胞 恒河猴獼猴腎細胞 HSV、 RSV、 VZV、 腮腺炎病毒、風(fēng)疹病毒 HIV、 HTLV、 HHV6 腮腺炎病毒、腺病毒 ECHO、 脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇 A、 B組、 RSV 二倍體細胞株 人胚肺成纖維細胞株 WI3 MRC— 5 CMV、 VZV、 鼻病毒 腮腺炎病毒、腺病毒 傳代細胞系 Hela Hep2 Vero 柯薩奇 A、 B組、 RSV 腺病毒、 RSV HSV、 RSV、 風(fēng)疹病毒 、輪狀病毒、麻疹病毒 ● 病毒在細胞內(nèi)增殖的檢查與鑒定 增殖指標 : 細胞變化 。紅細胞吸附 。細胞代謝改變；干擾現(xiàn)象；免疫熒光法檢測 病毒數(shù)量與感染性的測定： 蝕斑測定 （ CPE） TCI D50的測定 （三）病毒感染的快速診斷 ●形態(tài)學(xué)檢查 光鏡檢查 電鏡檢查：直接檢查；免疫電鏡檢查 ●檢測病毒抗原 免疫學(xué)檢測：免疫熒光， ELISA， RIA ELISA for HIV antibody Microplate ELISA for HIV antibody: coloured wells indicate reactivity ●病毒核酸檢測技術(shù) PCR 斑點 分子雜交 ( dotblot ) Southern印跡 ( DNA ), Northern印跡 ( RNA,mRNA ), 原位 分子雜交 , 微板 核酸雜交 ( chip ) 基因芯片（ microarray chip） 理想標記物應(yīng)具備的條件 1． 敏感性 高 2. 容 易 標記 3. 標記后 不影響 序列 特異性 和 雜交溫度 4． 雜交信號 檢測 方便 5. 標記物 穩(wěn)定 易 保存 ，對環(huán)境 污染 小 檢測結(jié)果判定 感染病毒的 臨床意義 必須結(jié)合流行 病學(xué)資料、臨床表現(xiàn)、病毒種類及機體的 病理變化 作綜合分析 ，才能判定??！ 二、病毒感染的防治原則 對病毒性疾病預(yù)防的 三大措施 ： 控制 傳染源 、 切斷 傳播途徑 、 保護 易感人群 。 —— 用 疫苗 作人工主動免疫 ， 對于預(yù)防病毒 感染 有重要意義 。 ? 免疫預(yù)防 ? 藥物防治 針對性防治 （一）免疫預(yù)防 ●人工主動免疫 滅活疫苗 : 核酸滅活 , 抗原性存在 。 減毒活疫苗 :自然或人工篩選低毒 的變異株 。 —— 潛在風(fēng)險 有： 回復(fù)毒力、并發(fā)癥、活化潛伏病毒、 引起持續(xù)感染 亞單位疫苗 :純化包膜或衣殼上蛋白亞單位 。 多肽疫苗 : 如提取 HBV HBsAg的多肽成分 。 基因工程制備 HBsAg。 ● 人工被動免疫 免疫血清 , 胎球 , 丙球 , TF等。 理想病毒疫苗的要求 有效 ： 安全 ： 死 疫苗：防止外源性污染病毒混入其中 。 滅活 病毒：必須徹底 。 活 疫苗：毒株必須是弱毒株 。 價廉 ：低價、方便。 現(xiàn)代疫苗學(xué)發(fā)展策略 ① 將病原微生物基因克隆到合適的載體 ， 再導(dǎo)入適宜的表達系統(tǒng)中表達中和性免疫原遺傳信息； ② 選擇缺失基因的減毒病原體載體 ， 插入一些外源基因 ， 當這些活載體疫苗進行流產(chǎn)性復(fù)制時 ， 表達出的抗原暴露于宿主免疫系統(tǒng)； ③ 預(yù)防多種疾病 、 接種次數(shù)少的多價聯(lián)合疫苗； ④ 利用質(zhì)粒 DNA誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的核酸疫苗； ⑤ 疫苗的免疫增強物及對免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)； ⑥ 特定免疫原或免疫調(diào)節(jié)提呈的新型微載體系統(tǒng) 。 （二） 藥物防治 金剛烷胺 , 阿糖腺苷 , 無環(huán)鳥苷 , 羥丙氧甲基鳥嘌呤 疊氮脫氧胸苷 (AZT), 干擾素 干擾素誘生劑 , 中草藥 抗病毒藥物類型 ? 化學(xué)藥物 ? 基因制劑 ? 天然藥物 抗病毒化學(xué)藥物的作用機制 ? 阻斷 病毒 脫殼 ? 阻斷 病毒 核酸合成 – 核苷類似物（ nucleoside analogue）、 核苷酸類似物（ nucleotide analogue） 和非核苷類似物 – 主要應(yīng)用于皰疹病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒 ? 阻斷 病毒 蛋白質(zhì)合成 ? 阻斷 病毒 釋放 抗病毒化學(xué)藥物作用的靶位點 作用靶點 藥物 ?復(fù)制早期 ?由病毒 DNA或 RNA聚合酶介導(dǎo)的核酸合成 ?病毒前體蛋白切割 ?病毒 mRNA翻譯蛋白 ?病毒釋放 ?金剛烷胺 甲基金剛烷胺 ?無環(huán)鳥苷 丙氧鳥苷 脫氧鳥苷 penciclovir famciclovir cidofovir 阿糖腺苷 idoxuridine 3氟胸腺嘧啶 甲酸磷霉素 AZT ddI ddC d4T 3TC nevirapine 病毒唑 拉米夫啶 ?賽科納瓦 英迪納瓦 瑞托納瓦 耐菲納瓦 ?干擾素 fomiversin ?Zanamivir oseltamivir 阻斷病毒核酸合成的藥物 ? 核苷 類似物（ nucleoside analogue） ? 核苷酸 類似物（ nucleotide analogue） ? 非核苷 類似物 ? 主要應(yīng)用 于 皰疹病毒 、 逆轉(zhuǎn)錄病毒 阻斷病毒核酸合成的藥物 靶病毒 分子結(jié)構(gòu) 藥 物 皰疹病毒 逆轉(zhuǎn)錄病毒 其他病毒 核苷類似物 非核苷類似物 核苷類似物 核苷酸類似物 非核苷類似物 核苷類似物物 無環(huán)鳥苷 丙氧鳥苷 cidofovir 阿糖腺苷 碘苷 三氟胸苷 甲酸磷霉素 AZT ddI ddC d4T 3TC Adefovir Nevirapine delavirdine efavirenz 病毒唑