[醫(yī)學(xué)]酶免疫技術(shù)-資料下載頁
2025-11-28 23:12本頁面
【正文】 不確定性，也就是說每次測定或同次測定空白孔位置的不同均有可能得到不同吸光度測定值，故而在 ELISA測定比色時．最好是使用雙波長比色。 實驗室質(zhì)量控制的問題及分析 （二）統(tǒng)計學(xué)質(zhì)量控制 系統(tǒng)誤差：通常表現(xiàn)為質(zhì)控物測定均值的漂移、多由操作者所使用的儀器設(shè)備、試劑、標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn)問題而造成；這種誤差可通過 SOP、人員培訓(xùn)等測定前措施加以控制和排除。 隨機誤差：通常表現(xiàn)為測定 SD的增大，主要是由實驗操作人員的操作等隨機因素所致；這種誤差難以完全避免和控制。 統(tǒng)計學(xué)質(zhì)控的功能：就是發(fā)現(xiàn)誤差的產(chǎn)生及分析誤差產(chǎn)生的原因，采取措施予以避免。 實驗室質(zhì)量控制的問題及分析 （三）統(tǒng)計學(xué)質(zhì)控的方法： 基線測定：連續(xù)測定同一濃度同一批號質(zhì)控物 20批次以上，最佳條件（儀器、試劑、操作者）下的變異（ OCV）和常規(guī)條件下的變異（ RCV），當(dāng) RCV與 OCV接近，或小于 2 OCV時， RCV是可以接受的。 LeveyJennings質(zhì)控圖方法：根據(jù) RCV計算中的均值 X和 SD確定質(zhì)控限，一般以 X177。 2SD為告警限， X177。 3SD為失控限。其統(tǒng)計學(xué)含義為：在穩(wěn)定條件下，在 20個 IQC結(jié)果中不應(yīng)有多余一個結(jié)果超過 2S（ %可信限）限度，在 1000個測定結(jié)果中超過 3S（ %可信限）的結(jié)果不多于 3個。因此如以 X177。 3SD為失控限，假失控的概率為 %；此概率低，提示誤差檢出能力不強。如以 X177。 2SD為失控限，假失控的概率太高，通常不能接受。 “即刻法”質(zhì)控方法：將連續(xù)的質(zhì)控測定值從小到大排列后并計算均值X和標(biāo)準(zhǔn)差 S，帶入公式計算 SI上限和 SI下限，再與“即刻法”質(zhì)控 SI值表比較，確定質(zhì)控測定值的變化范圍，如在 2S之內(nèi)是可以接受的，在2S3S之間則處于告警，大于 3S則屬 失控。 可以利用 Excel電子表格強大的數(shù)據(jù)處理功能，制作出多規(guī)則室內(nèi)質(zhì)控圖表，可對室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)進行處理，并能實時判斷是否失控，大大方便了實驗室室內(nèi)質(zhì)控數(shù)據(jù)的管理。 實驗室質(zhì)量控制的問題及分析 HIV酶免實驗室質(zhì)量控制過程，環(huán)境、儀器、試劑、操作步驟、均有文件和 SOP可以控制，最為重要的樣本收集和處理往往問題較多，易受多種因素影響，導(dǎo)致測定結(jié)果偏移或失準(zhǔn)。 可能影響測定結(jié)果的標(biāo)本因素包括： （一）內(nèi)源型干擾因素 類風(fēng)濕因子（ RF）：一般為 IgM型，可與變性 IgG Fc段產(chǎn)生非特異結(jié)合，故可能與包被的 IgG以及隨后加入的酶標(biāo) IgG結(jié)合而產(chǎn)生假陽性。避免措施： 1）稀釋標(biāo)本； 2）選擇酶標(biāo) IgGFab段二抗； 3）用無關(guān)變性 IgG預(yù)先封閉標(biāo)本中 RF； 4）測定抗原時標(biāo)本中加入 2巰基乙醇降解 RF。 補體：包被抗體及隨后加入的酶標(biāo)抗體均能激活補體而與補體 C1q位點結(jié)合而出現(xiàn)假陽性，也可因降低檢測物與固相結(jié)合而引起假陰性或測值偏低。避免措施： 1） 56℃30min 滅火標(biāo)本補體； 2）包被及酶標(biāo)抗體使用不激活人補體系統(tǒng)的雞抗體 IgY。 異嗜性抗體：人血清中含有抗嚙齒類動物（如鼠、馬、羊） Ig的抗體，即天然異嗜性抗體。此刻交聯(lián)或與酶標(biāo)二抗而出現(xiàn)假陽性。避免措施：標(biāo)本稀釋液中加入過量的動物 Ig。 溶菌酶：可與等電點 =5的低等電點蛋白較強結(jié)合，雙抗體夾心法 ELISA可致假陽性。避免措施：卵白蛋白可封閉溶菌酶。 實驗室質(zhì)量控制的問題及分析 （二）外源型干擾因素 標(biāo)本溶血：血紅蛋白中的血紅素基團有類似過氧化物的活性，溫育時吸附固相可與 HRP顯色。 細菌污染標(biāo)本：細菌分泌的一些酶可對抗原抗體蛋白分解或直接影響酶標(biāo)抗體作用，并且細菌引起標(biāo)本渾濁，此可離心后取上清。 標(biāo)本 4 ℃ 儲存時間過長： IgG聚合成多聚體，間接 ELISA中易生假陽性。建議 4 ℃ 儲存一周。 避免標(biāo)本反復(fù)凍融而產(chǎn)生的機械剪切力破壞蛋白，凍融標(biāo)本應(yīng)顛倒混勻，避免劇烈震蕩。 標(biāo)本凝固不全，一般完全凝固需 1824h，離心分離血清仍殘留部分纖維蛋白原，形成纖維蛋白塊，易造成假陽性。 結(jié)束語 一個良好實驗室的質(zhì)量保證取決于 嚴(yán)格的管理制度 高素質(zhì)的專業(yè)人員 規(guī)范的操作技術(shù) 標(biāo)準(zhǔn)的環(huán)境設(shè)施 謝謝
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