轉(zhuǎn)錄因子dna結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)分析dns-氨基酸的雙向聚酰胺薄-資料下載頁(yè)
2024-09-28 09:31本頁(yè)面
【導(dǎo)讀】轉(zhuǎn)錄因子DNA結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)分析。DNS-氨基酸的雙向聚酰胺薄膜層析?；虮磉_(dá)的調(diào)控關(guān)鍵在于轉(zhuǎn)錄起始水平的調(diào)控。準(zhǔn)確的預(yù)測(cè)將有助于人們認(rèn)識(shí)和研究不同轉(zhuǎn)錄因子對(duì)目標(biāo)基。層析法也稱(chēng)色譜法，是1906年俄國(guó)植物學(xué)家MichaelTswett發(fā)現(xiàn)并命名的。而被分開(kāi)，由此得名為“色譜法”。他們首先提出了色譜塔板理論。1944年出現(xiàn)紙層析以后，層析法不斷發(fā)展，相繼出現(xiàn)薄層層析、親和層析、凝膠層析、氣相層析、高壓液相層析等。離的化合物進(jìn)行可逆的吸附，溶解，交換等作用?；虺R界體等，都稱(chēng)為流動(dòng)相。在柱層析中一般稱(chēng)為洗脫劑，薄層層析時(shí)稱(chēng)為展層劑。的推力影響不同，從而使各組分以不同的速度移動(dòng)而達(dá)到分離的目的。據(jù)待分離物與吸附劑之間吸附力不同而達(dá)到分離目的的一種層析技術(shù)稱(chēng)為吸附層析。流動(dòng)相有兩種狀態(tài)：液體作為流動(dòng)相氣體作為流動(dòng)相。淀粉、纖維素及陶土，而聚集于聚集于吸附劑表面的物質(zhì)稱(chēng)被吸附劑。離子交換劑可以分為三部分：高分子聚合物
【正文】 免損壞薄膜表面） ； ? 分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果； ? 將層析后標(biāo)記好的薄膜以點(diǎn)樣點(diǎn)為左下角貼于實(shí)驗(yàn)報(bào)告中。 操作注意事項(xiàng)： ? 嚴(yán)格控制點(diǎn)樣位置以及點(diǎn)樣直徑。 ? 展層時(shí)勿將點(diǎn)樣點(diǎn)浸入展層劑中。 ? 展層后必須經(jīng)電吹風(fēng)將膜吹干。 ? 紫外光對(duì)眼睛有害不要把頭伸到燈下觀察。 Ⅰ Ⅱ 頡 亮 苯 丙 賴(lài) 甘 絲 天 脯 谷 DNS氨基酸的雙向?qū)游鲱A(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)原理 由于 Hb（紅色，分子量 64500） 與二硝苯 魚(yú)精蛋白 （黃色，分子量 202012020）的分子量不同 ， 通過(guò)交聯(lián)葡聚糖凝膠 G50（ sephadex）層析柱用蒸餾水洗脫分離。從顏色不同可直接觀察到血紅蛋白洗脫較快，魚(yú)精蛋白洗脫較慢。 凝膠層析分離血紅蛋白 與魚(yú)精蛋白 G類(lèi)葡聚糖凝膠（ SephadexG）的最基本骨架是葡聚糖，它是一種以右旋葡萄糖為殘基的多糖，分子間主要是 α1,6糖苷鍵（約占 95%），分枝為 l,3糖苷鍵（約占 5%），以 1氯 2,3環(huán)氧丙烷為交聯(lián)劑將鏈狀結(jié)構(gòu)連接為三維空間的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物。 ? 葡聚糖凝膠網(wǎng)孔大小可通過(guò)調(diào)節(jié)交聯(lián)劑和葡聚糖的配比及反應(yīng)條件來(lái)控制。交聯(lián)度越大，網(wǎng)孔越小，吸水膨脹就越小。交聯(lián)度越小，網(wǎng)孔越大，吸水膨脹就越大。 ? G類(lèi)葡聚糖凝膠常用 GX代表， X數(shù)字既代表交聯(lián)度，也代表特水量。 X數(shù)字越小，交聯(lián)度越大，網(wǎng)孔越小，適用于分離低分子質(zhì)量生化產(chǎn)品。 X數(shù)字越大，交聯(lián)度越小，網(wǎng)孔越大，適用于分離高分子生化產(chǎn)品。 X數(shù)字也代表凝膠的持水量，如 G25表示 1g干膠持水 ， G100表示 1g干膠持水 10ml，依次類(lèi)推。 1. 裝柱前準(zhǔn)備 : 先用自來(lái)水洗凈 ,再用蒸餾水洗凈 ,之后往層析柱加入 23ml蒸餾水 ,以確保凝膠底部沒(méi)有氣泡； 2. 裝柱：垂直裝柱，待凝膠裝至柱高的 1015cm即可（裝柱的時(shí)候注意要不斷混勻凝膠）。注意防止氣泡與分層 , 否則重新裝柱?？捎貌０魯嚢枋贡砻嫫秸?； 3. 平衡：反復(fù)加蒸餾水 ,平衡 10分鐘 .使蒸餾水維持在 34cm高度； 4. 加樣：待蒸餾水流至柱平面時(shí)（不可使柱平面干掉），馬上靠近柱平面小心滴加4滴樣品（注意盡量不要使床面攪動(dòng)），待樣品浸入到凝膠中后馬上加入 3－ 4滴蒸餾水 (動(dòng)作輕柔 )，反復(fù)兩次，然后加大量蒸餾水洗脫； 5. 收集樣品：樣品一旦加入后馬上用量筒收集流出液，注意向柱床上不斷加水，記錄紅色流出一半時(shí)的毫升數(shù)（血紅蛋白的 Ve，也即 Vo），繼續(xù)收集，記錄黃色流出一半時(shí)體積（魚(yú)精蛋白 Ve）； 實(shí)驗(yàn)操作 第三部分， DNA親和層析分離目標(biāo)轉(zhuǎn)錄因子蛋白 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 1. 查閱相關(guān)資料，了解 DNA親和層析技術(shù)的原理和種類(lèi)； 2. 查詢(xún)某種轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)序列； 3. 請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)，利用 DNA親和層析技術(shù)分離某種轉(zhuǎn)錄因子； 4. 對(duì)于分離得到的轉(zhuǎn)錄因子，有什么方法驗(yàn)證。
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