轉(zhuǎn)錄因子dna結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)分析dns-氨基酸的雙向聚酰胺薄(文件)
【正文】 子的 Kd＝ 0時(shí)， Ve＝ Vo即該分子被完全排阻于凝膠顆粒之外，全部分布于流動(dòng)相里，固定相里分布為零（ A)； ? 當(dāng)分子的 Kd＝ 1時(shí)， Ve＝ Vo+Vi即該分子完全不被排阻，均勻的分布在流動(dòng)相和固定相里，兩相比值為 1(C)； ? 當(dāng) 0 Kd 1時(shí)， Ve = Vo + Kd*Vi即表明分子受到部分排阻 (B)。易溶于展層劑的所受的動(dòng)力作用大，展層速度快，反之，速度慢。這種層析方法稱為雙向?qū)游觥? 操作注意事項(xiàng)： ? 嚴(yán)格控制點(diǎn)樣位置以及點(diǎn)樣直徑。 Ⅰ Ⅱ 頡 亮 苯 丙 賴 甘 絲 天 脯 谷 DNS氨基酸的雙向?qū)游鲱A(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)原理 由于 Hb（紅色，分子量 64500） 與二硝苯 魚精蛋白 （黃色，分子量 202012020）的分子量不同 ， 通過交聯(lián)葡聚糖凝膠 G50（ sephadex）層析柱用蒸餾水洗脫分離。交聯(lián)度越大，網(wǎng)孔越小，吸水膨脹就越小。 X數(shù)字越大，交聯(lián)度越小，網(wǎng)孔越大，適用于分離高分子生化產(chǎn)品?？捎貌０魯嚢枋贡砻嫫秸? 3. 平衡：反復(fù)加蒸餾水 ,平衡 10分鐘 .使蒸餾水維持在 34cm高度； 4. 加樣：待蒸餾水流至柱平面時(shí)（不可使柱平面干掉），馬上靠近柱平面小心滴加4滴樣品（注意盡量不要使床面攪動(dòng)），待樣品浸入到凝膠中后馬上加入 3－ 4滴蒸餾水 (動(dòng)作輕柔 )，反復(fù)兩次，然后加大量蒸餾水洗脫； 5. 收集樣品：樣品一旦加入后馬上用量筒收集流出液，注意向柱床上不斷加水，記錄紅色流出一半時(shí)的毫升數(shù)（血紅蛋白的 Ve，也即 Vo），繼續(xù)收集，記錄黃色流出一半時(shí)體積（魚精蛋白 Ve）； 實(shí)驗(yàn)操作 第三部分， DNA親和層析分離目標(biāo)轉(zhuǎn)錄因子蛋白 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 1. 查閱相關(guān)資料，了解 DNA親和層析技術(shù)的原理和種類； 2. 查詢某種轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)序列； 3. 請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)，利用 DNA親和層析技術(shù)分離某種轉(zhuǎn)錄因子； 4. 對(duì)于分離得到的轉(zhuǎn)錄因子，有什么方法驗(yàn)證。 1. 裝柱前準(zhǔn)備 : 先用自來水洗凈 ,再用蒸餾水洗凈 ,之后往層析柱加入 23ml蒸餾水 ,以確保凝膠底部沒有氣泡； 2. 裝柱：垂直裝柱，待凝膠裝至柱高的 1015cm即可（裝柱的時(shí)候注意要不斷混勻凝膠）。 ? G類葡聚糖凝膠常用 GX代表， X數(shù)字既代表交聯(lián)度，也代表特水量。 凝膠層析分離血紅蛋白 與魚精蛋白 G類葡聚糖凝膠（ SephadexG）的最基本骨架是葡聚糖，它是一種以右旋葡萄糖為殘基的多糖，分子間主要是 α1,6糖苷鍵（約占 95%），分枝為 l,3糖苷鍵（約占 5%），以 1氯 2,3環(huán)氧丙烷為交聯(lián)劑將鏈狀結(jié)構(gòu)連接為三維空間的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物。 ? 展層后必須經(jīng)電吹風(fēng)將膜吹干。形成的DNS氨基酸在紫外光下呈黃色熒光。由于有些 AA結(jié)構(gòu)相似，如只采用一種溶劑系統(tǒng)進(jìn)行單向?qū)游?，難達(dá)到完全分離的目的?；旌衔镫S流動(dòng)相通過聚酰胺薄膜時(shí)，由
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